• 한국발생생물학회:학술대회논문집
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• 한국발생생물학회 1998년도 제4차 학술발표대회 및 정기총회
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• pp.50-51
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• 1998

guanidinoacetate methyltransferase (GAMT) catalyzes the last step of creatine biosynthesis in mammals. Creatine plays an important role in cellular energy metabolism in variety of tissues including brain and male reproductive tract. Congenital deficiency of the enzyme leads to a neurologic disorder in humans. We used an interspecific backcross DNA panel to map Gamt to the central region of mouse Chromosome (Chr) 10 near the locus of hesitant mutation affecting male fertility. We assigned the human GAMT gene to Chr 19 by PCR analysis of a human/rodent somatic hybrid cell line DNA panel, and further localized the human gene to Chr 19 at band p13.3 by PCR analysis of a human radiation hybrid DNA panel. Human chr 19p13.3 is homologous to the central part of mouse Chr 10 where mouse Gamt is located. Furthermore, this part of mouse Chr 10 contains mutant loci the phenotype of which is similar to the GAMT deficiency in human.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제25권11호
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• pp.1863-1870
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• 2015

Fibrinolytic enzyme genes (aprE2, aprE176, and aprE179) were introduced into the Bacillus subtilis 168 chromosome without any antibiotic resistance gene. An integration vector, pDG1662, was used to deliver the genes into the amyE site of B. subtilis 168. Integrants, SJ3-5nc, SJ176nc, and SJ179nc, were obtained after two successive homologous recombinations. The integration of each fibrinolytic gene into the middle of the amyE site was confirmed by phenotypes (Amy-, Spec^S) and colony PCR results for these strains. The fibrinolytic activities of the integrants were higher than that of B. subtilis 168 by at least 3.2-fold when grown in LB broth. Cheonggukjang was prepared by inoculating each of B. subtilis 168, SJ3-5nc, SJ176nc, and SJ179nc, and the fibrinolytic activity of cheonggukjang was 4.6 ± 0.7, 10.8 ± 0.9, 7.0 ± 0.6, and 8.0 ± 0.2 (U/g of cheonggukjang), respectively at 72 h. These results showed that construction of B. subtilis strains with enhanced fibrinolytic activities is possible by integration of a strong fibrinolytic gene via a marker-free manner.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제20권1호
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• pp.45-53
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• 2010

We have developed an efficient and precise method for genome manipulations in Bacillus subtilis that allows rapid alteration of a gene sequence or multiple gene sequences without altering the chromosome in any other way. In our approach, the Escherichia coli toxin gene mazF, which was used as a counter-selectable marker, was placed under the control of a xylose-inducible expression system and associated with an antibiotic resistance gene to create a "mazF-cassette". A polymerase chain reaction (PCR)-generated fragment, consisting of two homology regions joined to the mazF-cassette, was integrated into the chromosome at the target locus by homologous recombination, using positive selection for antibiotic resistance. Then, the excision of the mazF-cassette from the chromosome by a single-crossover event between two short directly repeated (DR) sequences, included in the design of the PCR products, was achieved by counter-selection of mazF. We used this method efficiently and precisely to deliver a point mutation, to inactivate a specific gene, to delete a large genomic region, and to generate the in-frame deletion with minimal polar effects in the same background.

• 생명과학회지
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• 제13권2호
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• pp.175-183
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• 2003

침팬지와 고릴라는 영장목의 사람상과에 속한다. 이들은 아프리카 대형 유인원이라 불리며, 그들의 기원은 아프리카이다. 최근 영장류 학자들은 침팬지와 고릴라 각각 2종 5아종으로 분류하고 있다. 인간 게놈 프로젝트가 완성되었지만, 인간의 유전적 질병을 극복하고 인간의 진화를 풀기 위해서는 인간과 가장 유사한 아프리카 대형 유인원에 대한 연구가 요구된다. 인간의 21번에 상응하는 침팬지의 22번 염색체의 서열이 완성되었고, 현재 Y염색체 염기 서열이 분석되고 있다. 인간, 침팬지, 고릴라의 비교 연구로부터 인간이 가지는 다양한 질병에 대한 이해와 실마리를 제공해 줄 것이다. 영장류의 진화 과정에서 인간만이 가지는 기능성 유전자 및 가동성 유전자 (HERV, LINE, SINE)를 탐지해 냄으로 인해, 인간이란 무엇인가\ulcorner 라는 근본적인 의문점을 해명 할 수 있을 것이다. 이러한 영장류의 비교연구를 위해, 우리는 인간을 포함한 아프리카 대형 유인원에 대한 특징, 진화 및 계통 등의 기본적인 지식을 종합정리하여 보고하고자 한다.

• Journal of Animal Science and Technology
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• 제45권1호
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• pp.1-12
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• 2003

본 연구에서는 국내 고유 재래 가축들의 유전정보와 유전학적 개량의 기초자료 제공을 목적으로 고분염 분석(high-resolution banding) 방법에 의한 한국재래계의 염색체 분염 표지를 제시하였다. 본 연구에 공시된 한국재래계로서는 축산기술연구소에서 계통화 시킨 황갈색 및 적갈색 계통으로 이들이 생산한 수정란의 초기 배자를 이용하여 염색체 분석을 수행하였으며 닭의 초기배자에 EtBr 및 colchicine을 처리함으로써 보다 양호한 고정도 염색체를 획득하였다. 한국재래계의 GTG-banding 결과 모든 상동염색체간에 뚜렷하고 특징적인 band 양상을 얻을 수 있었으며, Leghorn 및 국제표준핵형(ISSAK)과 비교시 염색체의 형태적 양상에서는 거의 차이가 없는 것으로 분석되었고 대표적 landmark간에도 거의 일치되는 양상을 보였다 그러나 대부분의 한국재래계의 대형염색체에서 더 많은 G-band의 분리 양상을 보이고 특히 1번 및 Z 염색체에서 특징적 분리 양상의 차이를 보였다. 한국재래계의 C-banding 분석에서는 세포별 heterochromatin의 다형성을 보이기는 하나 대부분의 염색체의 동원체와 말단부위에서 C- band가 나타났으며, Z 염색체 장완 말단부와 W 염색체 전체에서는 거의 모든 세포에서 C-band가 출현하였다. 또한 3번 염색체 동원체와 Z 염색체 장완 말단부에서 특징적 다형성을 나타내어 이들 염색체들에서는 상동염색체간 heterochromatin의 이형적 양상(heteromorphic)이 존재함을 밝혔다.

• 한국가금학회지
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• 제20권4호
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• pp.177-188
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• 1993

닭에서 적절한 성감별 방법을 개발하고 닭의 성분화 기작의 기초자료를 얻기 위하여 배아의 섬유아세포의 염색체를 분석하고, W 염색체 특이적인 반복염기서열과 50∼60％의 유사성을 보이는 random primer로 PCR 증폭을 실시하여 성을 판별하는 방법이 이용되었으며, 닭에서 성분화에 관련된 유전자를 분리하기 위해 W 염색체 특이적인 반복염기서열을 클로닝하였고, PCR을 이용하여 ZFY와 SRY 염기서열을 증폭하였다. 닭의 배아섬유세포의 염색체 분석 결과 Z 염색체와 W 염색체를 구분함으로써 배아의 성을 직접적으로 판별하는 것이 가능하였으며 , 암닭의 DNA를 Xho Ⅰ와 Eco RI로 절단하여 생성되는 band를 이용하여 성을 판별하는 것이 가능하였다. Xho Ⅰ와 Eco RI family를 클로닝하고, colony hybridization을 통해 Xho Ⅰ과 염기서열이 유사한 80∼100개의 clone을 동정하여, 이들 두 그룹간 DNA homology는 매우 유사하였다. 150개의 random primer 중 W 염색체 특이적인 반복 염기서열과 유사성을 보이는 primer 7개를 screening하였으며, 이 중 3개의 primer는 닭에서 자성과 웅성간의 차이를 나타내었다. 닭에서 성분화에 관련된 유전자를 동정하기 위하여 포유류의 ZFY와 SRY유전자의 PCR증폭을 실시하였다. ZFY를 증폭한 결과, 자성과 웅성간의 차이를 발견할 수 없었으며, 이는 닭에서 ZFY는 상염색체 또는 Z 염색체에 존재함을 시사한다. SRY의 증폭에서는 성간의 차이가 확인되었으나, 이 유전자가 Z 염색체에 존재하는지 W 염색체에 존재하는지 혹은 상염색체 존재하는지 여부는 연구가 필요하리라 사료된다.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2003년도 생물공학의 동향(XII)
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• pp.577-581
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• 2003

Streptomyces lividans is one of the most commonly-used streptomyetes strain as a molecular cloning and expression host. Unlike its close relative S. coelicolor, however, S. lividans rarely produces secondary metabolite such as actinorhodin in a typical glucose-containing culture condition due to insufficient expression of some antibiotic regulatory genes including afsR2. Although multiple copies of afsR2 or a glycerol-specific culture condition stimulated actinorhodin production in S. lividans, both failed to stimulate actinorhodin production in S. lividans cultured in a typical glucose-containing medium. To generate a culture-condition-independent actinorhodin-overproducing S. lividans strain the afsR2 gene was integrated into the S. lividans TK21 chromosome via homologous recombination, followed by the genetic confirmation. This S. lividans strain produced a significant amount of actinorhodin in both glucose-containing liquid and plate cultures, with higher actinorhodin productivity compared to the S. lividans containing multiple copies of afsR2. These results suggest that a chromosomal integration of a single copy of an antibiotic regulatory gene is a promising method for the development of a stable antibiotic-overproducing streptomycetes strain.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제11권1호
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• pp.61-64
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• 2001

Delta-integration vectors were constructed for the purpose of achieving homologous integration of the hirudin expression cassette into the chromosome of Saccharomyces cerevisiae. A double $\delta$ system truncated with the unnecessary bacterial genes, and consequently having a reduced insert size for integration, showed a four-fold increase in transformation efficiency at given DNA concentrations, and as a result, the constructed recombinant yeast strain had a 1.3-fold enhancement in hirudin expression level compared with a single $\delta$ system.

• Mycobiology
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• 제28권4호
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• pp.171-176
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• 2000

We have cloned a ${\alpha}-COP$ homolog, ancop, from Aspergillus nidulans by colony hybridization of chromosome specific library using ${\alpha}-COP$ homologous fragment as a probe. The probe DNA was amplified with degenerated primers designed by comparison of conserved region of the amino acid sequences of Saccharomyces cerevisiae ${\alpha}-COP$, Homo sapiens HEP-COP, and Drosophila melanogaster ${\alpha}-COP$. Full length cDNA clone was also amplified by RT-PCR. Comparison of genomic DNA sequence with cDNA sequence obtained by RT-PCR revealed 7 introns. Amino acid sequence similarity search of the anCop with other ${\alpha}-COPs$ gave an overall identity of 52% with S. cerevisiae, 47% with human and bovine, 45% with Drosophila and Arabidopsis. In upstream region from the transcription start site, a putative TATA and CAAT motif were also identified.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제32권3호
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• pp.282-285
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• 2004

The polyene antibiotics including nystatin, pimaricin, amphotericin and candicidin are a family of most promising antifungal polyketide compounds, typically produced by rare actinomycetes species. The biosynthetic gene clusters for these polyenes have been previously investigated, revealing the presence of highly homologous biosynthetic genes among polyene-producers such as polyketide synthase (PKS) and cytochrome P450 hydroxylase (CYP) genes. Based on amino acid sequence alignment among actinomycetes CYP genes, the highly-conserved regions specific for only polyene CYP genes were identified and chosen for degenerate PCR primers, followed by the PCR-screening with various actinomycetes genomic DNAs. Among tested several polyene non-producing actinomycetes strains, Pseudonorcardia autotrophica strain was selected based on the presence of PCR product with polyene-specific CYP gene primers, and then confirmed to contain a cryptic novel polyene hydroxylase gene in the chromosome. These results suggest that the polyene-specific hydroxylase gene PCR should be an efficient way of screening and isolating potentially-valuable cryptic polyene antibiotic biosynthetic genes from various microorganisms including rare actinomycetes.