Newcastle disease virus (NDV) 감염된 baby hamster kidney (BHK) 세포에서 합포체 형성은 세포막 표면으로의 수송된 바이러스 당단백질 hemagglutinin-neuramidase (HN)에 의해 일어난다. HAU 값은 추출물의 농도가 25.0과 $3.2{\mu}g/mL$ 사이에서는 현저하게 감소하였으나, NDV 감염된 HAD (%)는 $25.0{\mu}g/mL$ 농도에서 광범위한 흡착능의 감소를 나타내 바이러스 당단백질의 세포내 생합성은 저해되지 않았다. 그러므로, 약용식물인 빈랑 메탄올 추출물이 바이러스 당단백질의 세포막으로의 수송과 함께 합포체 형성을 저해하여 항바이러스 작용을 하였다. 또한 빈랑 추출물의 저해활성을 조사한 결과 ${\alpha}$-glucosidase에 대한 추출물의 $IC_{50}$은 $10.0{\mu}g/mL$이었으며, ${\alpha}$-mannosidase, ${\beta}$-glucosidase, ${\beta}$-mannosidase에 대한 빈랑 추출물의 $IC_{50}$은 각각 20.0, 40.0, $80.0{\mu}g/mL$로 나타나 ${\beta}$-type glycosidases 보다 ${\alpha}$-type glycosidases에 대한 효소활성 저해능이 우수하였다. 따라서 $IC_{50}$농도에서는 세포내에서 당단백질 생합성은 저해되지 않으며 당단백질의 수송을 저해하는 것으로 판단되었으며 향후 항바이러스 관련 작용기작의 연구가 필요하다고 판단된다.
Swine influenza virus (SIV)는 돼지 개체군에서 가장 흔한 질병을 일으키는 바이러스 중 하나이며 그 subtype은 hemagglutinin (HA)와 neuraminidase (NA)에 의해 결정됩니다. 최근 SIV subtype 진단 방법이 개발되고 있으나 SIV의 리보뉴클레오타이드 서열의 많은 변이로 인해 PCR 보다는 항원-항체 반응을 이용하는 방법이 주로 사용되고 있다. 본 연구에서는 SIV 하위 유형의 신속한 결정을 위하여 2008년 이후 국내에서 발생한 SIV의 다중염기서열 정렬을 통하여 10개의 subtype 진단 프라이머 세트를 개발하고 이를 이용한 one-step RT-PCR 반응을 최적화하였다. 또한 감염력이 높고 독성이 있는 인플루엔자 H1N1 (pH1N1)의 아형에서 확인된 독특한 M 유전자서열을 검출함으로써 pandemic SIV를 조기에 결정하도록 특이적 프라이머를 설계하였다. 2008년부터 2014년까지 한국에서 발생한 9종의 SIV RNA를 활용하여 SIV의 아형 및 pandemic 가능성을 결정하기 위해 시험 분석한 결과 모든 진단 프라이머 세트는 SIV 아형을 정확하게 결정하였으며 pandemic SIV를 검출할 수 있는 것으로 확인되었다. 결과적으로 이들 프라이머 세트를 이용한 최적화된 one-step RT-PCR 분석이 SIV 아형의 신속한 진단에 유용하다는 것이 확인하였다. 이러한 결과는 SIV 하위 유형 및 pandemic SIV가 확산되기 전에 조기 발견을 위한 키트로 개발될 수 있음을 시사한다.
This study was aimed to investigate the anti-tumor and immune response effect of Samyongtang(S1; this medicine represents for 'ENERGIZER'), Yangjeongjejeoktang(S2; this is the 'INTERMEDIATE METHOD' of S1 and S3) and Onbeakwon(S3; this is 'ATTACK' the disease of mass) on the experimental rats induced by Sarcoma-180 and Methotrexate. And to observed the differences S1, S2, and S3 treatment groups. Tumor weight(TW) in vivo, interleukin-2(IL-2), hemagglutinin titer(H.A), hemolysin titer(HL), rossete forming cell(RFC), delayed type hypersensitivity(DTH), and natural killer cell activity(NKCA) in vivo were measured in rats. The obtained results were summarized as follows. 1. Tumor weight was decreased in all treatment groups (S2>S3>S1) as compared with control group, but the difference was not statistically significant each treatment groups. 2. Interleukin-2 was increased in all treatment groups (S1>S2>Ss) as compared with control group, but the difference was not statistically significant each treatment groups. 3. Hemagglutinin titer was increased in all treatment groups (S1>S2>S3) as compared with control group, but the difference was not statistically significant each treatment groups. 4. Hemolysin titer was increased in all treatment groups (S1>S2>S3) as compared with control group, but the difference was not statistically significant each treatment groups. 5. Rossete forming cell(RFC) was increased in all treatment groups (S1>S2>S3) as compared with control group, but the difference was not statistically significant each treatment groups. 6. Delayed type hyperseneitivity(DTH) was increased in S1, S2 treatment groups (S1>S2) as compared with control group, but it was decreased in S3 treatment group. Therefore, S1 group was statistically significant compared with S3 groups. 7. Natural killer cell activity(NKCA) was increased in all treatment groups (S2>S3>S1) as compared with control group, but the difference was not statistically significant each treatment groups. Based on the above mentioned results, it is suggested that S1, S2 and S3 will have anti-tumor substances and enhance effect of immune response. But the differences were not statistically significant in each treatment groups, except for delayed type hypersensitivity.
This experimental study was carried out to evaluate the anti-tumor and the immunomodulatory effects of Jiaweicitaowan(加未慈桃丸) against cancer. The in vitro anti-tumor effects were evaluated by MTT assay. The cytotoxicity, extension of survival days, the effect of inhibition solid tumor which was induced sarcoma 180, and the changes of body weight were evaluated for in vivo effects of anti-tumor. To evaluate the immunomodulatory effects of Jiawei- citaowan(加未慈桃丸), delayed type hypersensitivity, hemagglutinin, hemolysin titers for humoral immune response, rosette forming cells for cell-mediated immune response, natural killer cell activity, proliferation of lymphocyte, productivty of Interleukin-2, and carbon clearance were measured with methotrexate treated mice. The results were as follows; 1. In the case of existence ability of tumor cell, IC50 had an anti-tumor ativity resulted 2.52mg/ml to SNU-C4. 0.41mg/ml to SNU-396, resulted to 0.09mg/mlSNU-1. 2. The groups of Jiaweicitaowan(加未慈桃丸) 10mg/ml, 20mg/kg had no body weight loss. reduction in intake of water and feed, so these had no toxicity. 3. In the case of the effect of extention of existence. the group of 20mg/kg Jiaweicitaowan(加未慈桃丸) extract treated group was showed 250% in ILS. 4. The effect of inhibition solid tumor was significantly decreased in both 10mg/kg, 20mg/kg of Jiaweicitaowan(加未慈桃丸) extract treated groups as compared with control group S. The groups of 10mg/kg, 20mg/kg Jiaweicitaowan(加未慈桃丸) had significant effect of body weight change compared to control group. 6. Delayed type hypersensitivity was not significant in both Jiaweicitaowan(加未慈桃丸) extract treated groups as compared with control group. 7. Hemagglutinin and Hemolysin titers were significantly increased by dose-dependent. so these results showed that the humoral immume respose was activated. 8. For the effect of rosette formimg cells was not significant in hoth Jiaweicitaowan(加未慈桃丸) extract treated groups as compared with control group. 9. Natural killer cell activity was significantly increased in both Jiaweicitaowan(加未慈桃丸) extract treated groups as compared with control group in the ratio of 100: 1, 50: 1 of effector and target cells, but in the ratio of 10:1, the Jiaweicitaowan(加未慈桃丸) extract treated groups were not significant. 10. The proliferation of lymphocyte and productivty of Interleukin-2 were significantly increased by dose-dependent in both 10mg/ kg, 20mg/ kg of Jiaweicitaowan(加未慈桃丸) extract treated groups as compared with control group. 11. In the phagocytic effect, the 20mg/kg of Jiaweicitaowan(加未慈桃丸) extract treated group showed the increasing effect with significance as compared with control group. According to the results, we can suggest that Jiaweicitaowan(加未慈桃丸) has the antitumor and the immunomodulatory effects.
마크로파지의 활성을 조사하기 위해 carbon clearance time을 조사한 결과 AEY 처리구가 control이나 CEY 처리구에 비해 짧았다. 특히 AEY 500$\mu\textrm{g}$ 처리에서 carbon clearance 시간이 5분으로 control에서 9.42분, CEY(250$\mu\textrm{g}$ 처리)에서 9.01분보다 유의성 있는 감소를 보였다. AEY 처리에 의해 응집소가와 용혈소가가 다소증가되었다. SRBC처리 1일째와 3일째에 250$\mu\textrm{g}$ 처리구를 비교해 보면, control, CEY, AEY의 응집소가는 각각 5.50, 5.63, 6.00 및 5.25, 5.38, 5.50로 용혈소가는 각각 4.75, 5.38, 5.50 및 4.25, 5.63, 5.63으로 AEY 처리구가 control, CEY 처리구에 비해 면역 활성이 있었지만 유의성은 없었다.
${\alpha}$-glucosidase 활성을 저해하는 초두구 메탄올 추출물의 항바이러스 활성을 연구하였다. Newcastle disease virus (NDV) 감염된 baby hamster kidney (BHK) 세포에서 Syncytium (합포체) 형성은 세포막 표면으로의 수송된 바이러스 당단백질 hemagglutinin-neuramidase (HN)에 의해 일어난다. 초두구 추출물$IC_{50}$$25{\mu}g/mL$) 처리된 세포에서 바이러스 당단백질의 수송과 함께 합포체 형성이 저해되었다. 또한 $IC_{50}$ 농도에서는 세포 내에서 당단백질 생합성은 저해되지 않으며 당단백질의 수송을 저해하는 것으로 추론된다.
The gene encoding the HN protein from the CBP-1 strain, a heat stable Newcastle disease virus (NDV) isolated from diseased pheasants in Korea, was characterized by reverse transcriptase- polymerase chain reaction(RT-PCR) and the nucleotide and amino acid sequences were analyzed following cloning of the HN gene. In all of the NDV strains studied, a 1.75 kb size cDNA fragment for the HN gene was generated by RT-PCR and smaller specific band sizes harboring the internal portions of the HN gene were also detected by using four pairs of primers. The RT-PCR was sensitive enough to detect viral transcripts when the virus titer was above 25 hemagglutination units. The amplified 1.75 kb cDNA was cloned into a BamHI site of the pVL1393 Baculo transfer vector. The nucleotide sequences of the 1,758 bp HN gene from the CBP-1 strain were determined by the dye terminator cyclic sequencing method. The gene sequences were compared among the strains of CBP-1, Texas GB, Beaudette C, LaSota, B1 and Ulster. The homology of the CBP-1 HN gene to other HN variants was 97.8% to Texas GB, 98.4% to Beaudette C, 95.4% to LaSota, 95.6% to B1 and 90.2% to Ulster. As the deduced 577 amino acid sequences were compared among the strains, the homology for CBP-1 HN appeared to be 96.7% to Texas GB, 97.9% to Beaudette C, 95.5% to LaSota, 95.5% to B1 and 92.7% to Ulster. It was evident that the amino acid sequences included 5 sites for N-asparagine linked glycosylation and 12 cysteine residues. The three conserved leucine residues within the predicted transmembrane domain of the HN protein are amino acid 30, 37 and 44. The three antigenic sites on the HN protein of NDV are amino acids 347(Glu), 481(Asn) and 495(Glu). These data indicate that the genotype of the CBP-1 strain is more closely associated with the strains of Texas GB and Beaudette C than it is for the LaSota, B1 and Ulster strains.
In order to investigate the effect of Naetakchungumsankamibang(NTCGS) water extract on the skin tumor induced by 3-MCA and immunological responses in mice, the cytotoxicity against SK-MEL-2 cells and total number of tumors induced by 3-MCA were measured. The numbers of WBC, platelets and RBC, plaque forming cells, hemagglutinin titer, hemolysis titer, carbon clearance, proliferation of splenocyte by thymidine uptake assay, splenic leukocyte by FACS analysis and $TNF-{\alpha}$ were also measured for the evaluation of the immunological responses. The results were obtained as follows: 1. In cytotoxicity against SK-MEL-2 cells, concentration inhibiting cell growth up to below $20\%$ of control was recognized at 1mg/ml of NTCGS. 2. In Inhibitory effect on the skin tumor induced by 3-MCA, the results showed a strong inhibitory effect of NTCGS. 3. In hematological changes in the tumor bearing mice, the numbers of WBC decreased significantly in NTCGS treated group as compared with control. 4. In hematological changes in the tumor bearing mice, the numbers of platelets increased significantly in NTCGS treated group as compared with control. 5. In hematological changes in the tumor bearing mice, the numbers of RBC increased with no significance in NTCGS treated group as compared with control. 6. Effects of the plaque forming cells in the tumor bearing mice, NTCGS treated group exhibited a significant effect compared with control. 7. In terms of the effects on hemagglutinin titer, NTCGS treated group showed higher level than control, without significance. 8. In terms of the effects on hemolysis titer, NTCGS treated group showed higher level than control, without significance. 9. In terms of the effects on phagocytic index K in Balb/C mice, NTCGS treated group showed significant difference from control. 10. In terms of the effects on proliferation of splenocyte by thymidine uptake assay, NTCGS showed significant effect at the concentration of 0.5mg/ml. 11. In terms of the effects on splenic leukocyte of Balb/C mice by FACS analysis, NTCGS treated group showed significantly higher level of helper T cell, B cell and macrophage than in control. 12. In terms of the effects on the secretion of $TNF-{\alpha}$, the treated group showed significant effect at the concentration of 1mg/ml of NTCGS. Based on the results summarized above, NTCGS is considered to have antitumor activity and immunological responses against skin tumor, and to be usable fur the treatment.
최근에 재조합 H7Nx 인플루엔자 바이러스가 산발적으로 인체 감염 사례가 보고되고 있으며 이러한 바이러스는 조류 종으로부터 지속적으로 분리되고있다. 본 연구에서는 조류에서 유래된 H7N1 인플루엔자 바이러스를 분리하여 A/wild bird/South Korea/sw-anu/2023로 명명하였고, 전장유전체 분석과 분자적 특성을 분석하였다. 계통발생학적 분석 결과 A/wild bird/South Korea/sw-anu/2023는 유라시아 혈통에 속하는 H7N1 인플루엔자 바이러스로 확인되었다. A/wild bird/South Korea/sw-anu/2023 바이러스의 polymerase basic 1(PB)2, PB1, polymerase acidic (PA), nucleoprotein (NP) 유전자는 야생 조류에서 분리되었던 조류 인플루엔자 바이러스유전자와 밀접한 관련이 있는 것으로 밝혀졌으며, hemagglutinin (HA), neuraminidase (NA), matrix (M), nonstructural (NS) 유전자는 집오리에서 분리되었던 조류 인플루엔자 바이러스와 유사하였다. 이러한 결과는 동아시아-호주 이동 경로를 따라 이동하는 야생 조류들 사이에서 새롭게 유전자가 재배열된 재조합 H7N1 조류 인플루엔자 바이러스가 순환되고 있음을 시사하고 있다. 따라서, H7Nx 인플루엔자 바이러스는 전 세계적으로 순환하며, 돌연변이된 H7N1 조류 인플루엔자 바이러스는 인간을 감염시킬 수 있으므로 야생 조류 및 가금류에서 H7N1 조류 인플루엔자 바이러스의 지속적인 감시가 필요할 것이다.
It was well known that B. pertussis cells possess protective antigen, histamine sensitizing factor, heatstable and labile toxin, hemagglutinin, agglutinogen and the others. Previous reports involving above antigenic properties of B. pertussis have been carried out for several years. However, leucocyte promoting property was not yet investigated. In this report, the results of studies on the leucocytosis, particulary the lymphocytosis, produced in mice by injecting pertussis vaccine were presented. Especially leucocyte promoting property and histamine sensitizing property of B. pertussis vaccine treated at various temperatures were compared. The relationship between the leucocyte promoting property and histamine sensitizing property was investigated. Results were as follows. 1. Although leucocytosis was significantly rised in both 0.5ml injection and 0.1ml injection of pertussis vaccine than in control, at the higher dose (0.5ml injection) an elevation in white cell count was more significant. The leucocyte responce to pertussis vaccine was greater following 0.5 ml injection than following 0.1ml injection. 2. Lymphocytosis was significantly rised in both 0.5ml injection and 0.1ml injection of pertussis vaccine than in control. At higher dose (0.5ml injection), an elevation in lymphocyte count was more significant. 3. Order of elevation in differential leucocyte counts was lymphocyte, polymorphonuclear leucocyte and monocyte. 4. The leucocyte response to pertussis vaccine was 2 fold greater following intravenous injection than following subcutaneous injection. 5. Decrease leucocyte promoting activity and histamine sensitizing activity resulted from exposure to temperature above $56^{\circ}C$. Histamine sensitizing activity of pertussis vaccine treated at various temperatures paralleled leucocyte promoting activity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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