• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제42권3호
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• pp.302-313
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• 1995

연구배경: 종양괴사인자(Tumor necrosis factor; TNF)는 다양한 생물학적인 작용을 가지며 종양 세포에 대한 세포 독성은 그 대표적인 기능중의 하나이다. TNF-$\alpha$는 생체외에서(in vitro) 몇몇 종양 세포주에 대하여 항암제, 특히 topoisomerase II targeted chemotherapeutic agent의 세포 독성 효과를 상승적으로 증가시키는 것이 알려져 있다. 최근 암세포에 대한 cytokine 유전자 요법에서 TNF는 중요한 대상으로 여겨지고 있으며, 유전자 이입에 의해 암조직이 TNF를 생성하게 될 경우 암 증식 억제 효과가 있음이 보고되고 있다. 연구자는 암세포에 TNF-$\alpha$ 유전자를 이입하여 자신이 TNF-$\alpha$를 생성하도록 형질을 변환시킨 암세포는 topoisomerase II 억제 항암제에 대한 김수성에 변화가 있을 것이라는 가설을 수립하였고 이를 검증하고자 본 연구를 수행하였다. 본 연구에서는 생체외로(in vitro) TNF-$\alpha$ 유전자를 이입하여 TNF-$\alpha$를 생성하는 암세포주에서 topoisomerase II targeted drug에 대한 항암제 감수성 효과가 모세포주에 비하여 증대될 수 있는지를 알아 보고자하였다. 방법: TNF-$\alpha$에 감수성을 보이는 것으로 알려진 인체 중피종 세포주인 NCI-H2058 세포주 및 생쥐의 섬유육종 세포주인 WEHI164 세포주와 인체 비소세포 폐암 세포주인 A549 세포주를 배양하여, 먼저 임상에서 흔히 폐암의 항암 화학 요법 치료에 널리 쓰이는 대표적인 topoisomerase II targeted chemotherapeutic drug인 etoposide(VP-16)와 doxorubicin(adriamycin)을 가하였을 때 관찰된 세포 독성을 MTT assay로 측정하고, 각 모세포주(parenta1 cell line)에 TNF-$\alpha$의 유전자를 이입시켜서 형절 변환한 세포주(transformed cell line)에 대하여 각각 동일한 항암제를 가하였을 때 관찰된 세포 독성의 정도를 같은 방법으로 측정하여, 그 결과를 비교 분석하였다. 또한 모세포주에 외부에서 TNF를 가하여 전처치한 후 동일한 항암제를 가하였을 때의 세포독성을 관찰하여 비교 분석하였다. 결과: H2058 세포주에서는 TNF-$\alpha$ 유전자를 이입한 세포주 topoisomerase II targeted drug을 가하였을 때, 항암제 감수성이 모세포주에 같은 항암제를 가하였을 때에 비하여 의미있게 증가함을 관찰할 수 있었으나(p<0.05), WEHI 세포주와 A549 세포주에 있어서는 TNF-$\alpha$ 유전자를 이입한 세포주에서 모세포주에 비하여 항암제 감수성이 증가하지는 않았다. 결론: TNF-$\alpha$ 유전자의 이입이 topoisomerase II targeted chemotherapeutic drug에 대한 항암제 감수성을 증가시키는 효과는 세포주에 따라 다양한 결과를 보이는 것을 알 수 있었으며, 적어도 선택된 특정 종류의 호흡기계 암세포에 있어서는 TNF-$\alpha$ 유전자의 이입으로 항암제 감수성(chemosensitivity)을 증가시킬 수 있을 것으로 사료된다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제41권2호
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• pp.87-96
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• 1994

연구배경 : 종양괴사인자(tumor necrosis factor ; TNF)는 여러 암세포에 대해서 세포독성을 보임이 알려져 있다. 그리고, 최근 분자생물학적 발전에 힘입어 TNF 유전자를 암세포에 이입하고 발현시키는 연구가 그 동안 진행되었다. 이들 연구의 목적은, TNF를 전신적으로 쓸 경우 전신 부작용이 심하여 인체에 쓸 수 없는 현 단계에서 암세포 자체에서 TNF를 만들어 내어서 암세포 주위에서만 작용하게 함으로써 연체에 미치는 전신독성을 최소한으로 줄이고 암세포를 사멸시키는 것이었다. 암세포에 TNF 유전자를 이입함으로써 예상되는 항암효과가 성공을 거두기 위해서는 첫째, TNF 유전자가 이입된 암세포에서 분비된 TNF가 주위 암세포를 성공적으로 사멸시켜야 하고 둘째는 분비된 TNF가, TNF 유전자가 이입된 암세포 자신을 사멸시켜야 한다. 본 연구는 이 중 두번째 기전, 즉 TNF 유전자가 이입된 암세포가 자신이 분비한 TNF에 의해서 사멸되거나 또는 세포 독성이 나타날 수 있는가를 검증하는데 목적을 두었다. 방법 : TNF에 감수성을 보이는 인체의 중피종 세포주인 NCI-H2058과 생쥐 섬유육종 세포주인 WEHI164에 TNF-$\alpha$ 유전자를 retroviral vector를 이용하여 이입하고 TNF를 발현을 시도하였다. DNA 수준과 단백질 수준에서 TNF-$\alpha$ 유전자가 제대로 이입되어 발현되는지 PCR과 ELISA 및 bioassay(MTT assay)로 확인하였다. 그리고, TNF 유전자가 이입된 세포주가 자신이 분비하는 TNF에 사멸되는지 아니면 생존하는지 MTT(dimethylthiazolyl diphenyltetrazolium) assay로 알아보았다. 그리고, 만일 TNF 유전자가 이입된 암세포가 자신이 분비한 TNF에 사멸되지 않고 생존할 경우, TNF 유전자가 이입된 NCI-H2058-TNF와 WEHI164-TNF 암세포주가 외부에서 준 TNF에도 내성을 보이는지도 추가로 MTT assay 방법으로 확인해 보았다. 결과 : 1) TNF-$\alpha$ 유전자 이입 및 발현 확인 PCR을 시행한 결과, TNF 유전자가 이입된 NCI-H2058-TNF와 WEHI164-TNF 세포주는 790 base pair 크기의 진한 DNA band를 보인 반면 각각의 모세포주에서는 보이지 않아서 retroviral vector를 이용한 유전자 이입이 DNA 수준에서 이루어졌음을 확인할 수 있었다. 그리고, NCI-H2058-TNF와 WEHI164-TNF의 상층 배양액의 TNF양을 ELISA와 bioassay(MTT assay)로 측정한 결과, 생물학적 활성을 지닌 TNF를 각각 $23.6{\pm}0.84ng$/24h/$10^6cells$, $12.2{\pm}0.36ng$/24h/$10^6cells$ 생산함을 알 수 있었다. 2) TNF 유전자 이입 전후, 암세포의 TNF에 대한 감수성 비교 TNF 유전자 이입 전후의 TNF에 대한 세포주의 감수성(세포사망율)을 TNF의 농도 변화에 따라 비교한 결과, NCI-H2058의 경우 TNF 농도 100ng/ml에서 모세포는 $25{\pm}3%$의 세포독성을 보인 반면 TNF 유전자 이입 후에는 $3{\pm}2%$의 세포독성을 보여 통계적으로 유의한 차이가 있었다(p<0.01). 그리고, WEHI-164의 경우도 TNF 농도 100ng/ml에서 모세포는 $73{\pm}5%$의 세포독성을 보인 반면 TNF 유전자 이입 후에는 $3{\pm}2%$의 세포독성을 보여 통계적으로 유의한 차이가 있었다(p<0.01). 결론 : TNF에 감수성을 보이는 암세포주인 NCI-H2058과 WEHI164에 TNF 유전자 이입을 시행하고 TNF가 발현되게 하였을 때, TNF 유전자를 이입받은 두 암세포주 모두에서 자신이 생산해 내는 TNF에 내성을 보여 생존하였다. 뿐만 아니라 생존한 이들 세포는 외부에서 준 TNF에 대해서도 내성을 보였다. 따라서, 암세포에 대한 TNF 유전자 이입을 통한 유전자 요법이 성공을 거두려면 유전자 이입된 세포에서 분비하는 TNF의 면역 세포 동원 방법 등의 간접적인 항암기전이 필요할 것으로 생각된다.

• Journal of Microbiology
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• 제39권3호
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• pp.186-194
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• 2001

Scrub typhus, caused by Orientia tsutsugamushi infection, is clinically and histopathologically characterized by local as well as systemic inflammatory reactions, indicating that orientiae induce mechanisms that amplify the inflammatory response. To reveal underlying mechanisms of chemoattraction and activation of responding leukocytes, expression of chemokine and tumor necrosis factor alpha (TNF-$\alpha$) genes in murine peritoneal macrophages after infection with the obligate intracellular bacterium Ο.tsutsugamushi was investigated. The genes that were unregulated included macrophage inflammatory proteins l$\alpha$/$\beta$(MIP-l$\alpha$/$\beta$), MIP-2, monocyte chemoattractant protein 1(MCP-1), RANTES (regulated upon activation, normal T-cell expressed and secreted), gamma-interferon-inducible protein 10(IP-10) and TNF-$\alpha$. Peak expression of these chemokines and TNF-$\alpha$ was observed between 1 and 3 h after infection. These responses returned to or approached baseline preinfection levels 6 h after challenge. Semiquantitative reverse transcription (RT)-PCR analysis revealed dramatic Increases during infection in the steady-state levels of mRNA ceding for the inhibitory subunit of NF-kB (IkB$\alpha$), whose transcription is enhanced by binding of NF-kB within the IkB$\alpha$promoter region. Thus, Ο. tsutsugamushi appears to be a stung inducer of chemokines and TNF-$\alpha$ which may significantly contribute to inflammation and tissue damage observed in scrub typhus by attracting and activating phagocytic leukocytes.

• 동의생리병리학회지
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• 제24권6호
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• pp.956-961
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• 2010

Tumor necrosis factor-alpha (TNF-${\alpha}$) is a major mediator of immuno-inflammatory activity. The purpose of this study is to investigate whether TNF-${\alpha}$ productions of mouse macrophage RAW 264.7 and human hepatocyte HepG2 are modulated by Artemisiae argi Folium water extract (AW), Lactobacillus pentosus-fermented Artemisiae argi Folium water extract (AFL), and Saccharomyces cerevisiae-fermented Artemisiae argi Folium water extract (AFS) for 3 h of incubation. Effect of AW on cell viability of HepG2 was also investigated. TNF-${\alpha}$ productions were measured by Enzyme-Linked Immnunosorbent Assay method and cell viability was measured by MTT assay. Both AFL and AFS significantly increased TNF-${\alpha}$ productions of RAW 264.7 at the concentration of 50, 100, and 200 ${\mu}g$/mL (p<0.05). Also, AFL and AFS significantly increased TNF-${\alpha}$ productions of HepG2 at the concentration of 50, 100, and 200 ${\mu}g$/mL (p<0.05). AW significantly increased TNF-${\alpha}$ production of HepG2 at the concentration of 100 and 200 ${\mu}g$/mL (p<0.05). AW did not show any cytotoxicity on HepG2 cells for 3 h. These results suggest that AFL, AFS, and AW have the immune-enhancing property related with its increasing effect on TNF-${\alpha}$ production of macrophage and hepatocyte.

• 대한한방내과학회지
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• 제30권4호
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• pp.685-695
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• 2009

Objectives : In this study, the author tried to investigate whether Geonpye-tang(GPT) significantly affects PMA-, EGF- or TNF-alpha-induced MUC5AC mucin production and gene expression from human airway epithelial cells. Materials and Methods : Effects of the agent on PMA-, EGF- or TNF-alpha-induced MUC5AC mucin production and gene expression from human airway epithelial cells (NCI-H292) were investigated. Confluent NCI-H292 cells were pretreated for 30 min in the presence of GPT and treated with PMA (10ng/ml) or EGF (25ng/ml) or TNF-alpha (0.2nM), to assess both effect of the agent on PMA- or EGF- or TNF-alpha-induced MUC5AC mucin production by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and gene expression by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). Possible cytotoxicity of the agent was assessed by examining the rate of survival and proliferation of NCI-H292 cells after treatment with the agent over 72 hrs (SRB assay). Results : (1) GPT significantly inhibited PMA-induced and EGF-induced MUC5AC mucin production from NCI-H292 cells. However, GPT did not affect TNF-alpha-induced MUC5AC mucin production. (2) GPT significantly inhibited the expression levels of PMA-, EGF- or TNF-alpha-induced MUC5AC genes in NCI-H292 cells (3) GPT did not show significant cytotoxicity to NCI-H292 cells. Conclusion : This result suggests that GPT can affect the production and gene expression of respiratory mucin observed in diverse respiratory diseases accompanied by mucus hypersecretion. This can explain the traditional use of GPT in oriental medicine. Effects of GPT with their components should be further investigated using animal experimental models that reflect pathophysiology of airway diseases through future studies.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제44권6호
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• pp.1353-1365
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• 1997

연구배경 : 종양괴사인자(tumor necrosis factor ; TNF)는 다양한 생물학적 기능을 가지고 있는 바, 그 중 생체 외에서 증명된 뚜렷한 항암 효과로 말미암아 최근 항암 유전자요법의 중요한 대상으로 관심을 모으고 있다. 현재 유전자 이입의 기술적 문제로 생체 외에서 암세포에 유전자 이입을 시행한 후 이를 다시 환자의 생체내로 이식하는 방법이 연구의 주종을 이루고 있다. 그러나 저자들의 과거의 연구를 포함한 여러 연구에서 TNF가 이입된 암세포는 TNF에 대해 내성을 보이는 이에는 새로이 방어 단백질을 합성하는 것이 관여할 것이라는 시사가 있었다. 이 획득내성의 기전을 밝히는 것이 종양생물학의 이해를 넓히고 보다 효과적인 항암 유전자요법을 개발하기위한 매우 중요한 과제로 생각된다. 저자들은 TNF 유전자 이입에 따른 암세포의 TNF에 대한 획득내성에, 일부 세포에서 TNF에 의해 발현이 유도된다는 것이 밝혀진, 항산화효소의 하나인 MnSOD의 발현의 변화가 관여하는 지를 규명하고자 본 실험을 수행하였다. 방 법 : TNF에 다양한 감수성을 보이는 인체 및 생쥐 기원의 4가지 암세포주(WEHI164, NCI-H2058, A549, ME180)에 TNF-$\alpha$ 유전자를 retroviral 이용하여 이입하고 TNF의 발현을 시도하여 PCR, ELISA, MTT assay로 확인하였고, TNF 유전자가 이입된 세포(WEHI164-TNF, NCI-H2058-TNF, A549-TNF, ME180-TNF)는 TNF에 내성을 보이는지 역시 MTT assay로 검증하였다. TNF 유전자 이입 전후의 MnSOD mRNA 발현의 차이는 Northern blot analysis를 통하여 비교하였다. 결 과 : 1) TNF-$\alpha$ 유천자 이입 및 발현 확인 PCR을 시행한 결과 TNF 유전자가 이입된 각 세포 790 base pair 표기의 진한 DNA band를 보인 반면 모세포주는 보이지 않아서 retroviral vector를 이용한 유전자 이입이 DNA 수준에서 이루어 있었다. 그리고 TNF 유전자가 이입된 세포의 배양상층액에서 TNF양을 ELISA로 측정한 결과 TNF를 세포에 따라 1.91ng/24hr/$10^6\;cells$에서 3.91ng/24hr/$10^6\;cells$ 생산함을 알 수 있었다. 2) TNF 유전자 이입 전후, 암세포의 TNF에 대한 감수성 비교 TNF 농도 100ng/ml에서 WEHI164-TNF와 ME180-TNF 세포는 통계적으로 유의하게 (p<0.01) TNF에 대한 내성을 획득함을 알 수 있었다. 3) TNF 유전자 이입 전후외 MnSOD mRNA 발현양상 TNF에 감수성을 보이는 WEHl164와 ME180세포는 TNF 유전자 이입 후에 MnSOD mRNA 발현이 증가되지 않았으며, TNF에 내성을 보이는 NCIH2058과 A549 세포는 TNF 유전자 이입 후에 MnSOD mRNA 발현의 증가가 관찰되었으나 이는 모세포에 외부에서 TNF를 주었을 때도 관찰되었다. 결 론 : 세포주에 TNF 유전자를 이입하여 TNF를 발현하게 하였을때 세포 자신은 TNF에 대해 내성을 하게 되는데, 이 획득내성은 MnSOD 발현 능력의 향상에 의한 것은 아닐 것으로 판단되나 각 세포주의 자연 상태의 TNF에 대한 감수성 여부는 MnSOD의 발현 차이가 관련될 것으로 생각된다.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1998년도 Proceedings of UNESCO-internetwork Cooperative Regional Seminar and Workshop on Bioassay Guided Isolation of Bioactive Substances from Natural Products and Microbial Products
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• pp.176-176
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• 1998

An enhanced formation of nitric oxide (NO) is an important mediator of hypotention, peripheral vasodilation and vascular hyporeactivity to vasoconstrictor agents in endotoxaemia. And tumor necrosis factor (TNF${\alpha}$), as a primary mediator of circulatory shock has been known to induce inducible nitric oxide synthase (i-NOS), leading to excessive production of NO. We isolated two sesquiterpene lactone compounds from Saussurea lappa and their structures were elucidated as dehydrocostus lactone and costunolide. These compounds inhibit the production of both NO and TNF${\alpha}$ by LPS (1 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$)-activated Raw 264.7 cells. NO was measured spectropho-tometrically as nitrite by the Griess reagent and TNF${\alpha}$ by ELISA. Dehydrocostus lactone (IC$\sub$50/ : 3.0 ${\mu}$M) and costunolide (IC$\sub$50/ : 4.5 ${\mu}$M) inhibited the production of NO in LPS-activated Raw 264.7 cells by suppressing inducible nitric oxide synthase enzyme expression. These compounds also decreased the TNF${\alpha}$ levels in LPS-activated system in vitro and in vivo.

• 대한한방소아과학회지
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• 제22권1호
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• pp.95-102
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• 2008

Objectives The purpose of this study was to examine the anti allergic reaction with Cheonmaec-tang. Methods We examined Cell Viability, ${\beta}$-hexosaminidase, TNF-${\alpha}$, IL-4 secretion from RBL-2H3 cell after pretreatment with 2 ㎎/ml, 4 ㎎/ml of Cheonmaec-tang. Results We observed that Cheonmaec-tang is reduced to ${\beta}$-hexosaminidase, TNF-${\alpha}$, IL-4 secretion in RBL-2H3 cell. Conclusions These results indicate that Cheonmaec-tang has anti-histamic effect and controls TNF-${\alpha}$, IL-4 secretion on allergic reaction.

• Toxicological Research
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• 제11권2호
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• pp.169-173
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• 1995

The effects of tumor necrosis factor alpha $(TNF-{\alpha})$ on growth and tubular formation of bovine aortic endothelial cells were examined using an in vitro angiogenesis model system. The growth of endothelial cells was enhanced in a dose-dependent manner when the cells were cultured with $TNF-{\alpha}$ for 3 days, but $TNF-{\alpha}$, at the concentration of 1 nM or higher, produced a growth inhibition of endothelial cells when the cells were cultured for 8 days. The endothelial cells incubated with $TNF-{\alpha}$ for 48-h exhibited a typical morphologic change. Then, they showed a fibroblastoid organization of overlapping, elongated, and spindle-shaped cells. $TNF-{\alpha}$, at the concentration of O. 1 nM or higher, inhibited the tubular formation of vascular endothelial cells in an in vitro anglogenesis model using a 3-dimensional culture system.

• 대한한방소아과학회지
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• 제24권2호
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• pp.126-136
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• 2010

Objectives The purpose of this study was to investigate the antiallergic and antioxidative effects of Chaenomeles Sinensis (CS). Methods CS pretreatments inhibited anti-DNP IgE in RBL-2H3 mast cells for an hour. we measured cell viability, $\beta$-hexosaminidase release, IL-4, TNF-$\alpha$ secretion, and IL-4, TNF-$\alpha$ mRNA expression CS pretreatments inhibited DNP-HSA($10\;{\mu}g/ml$) for ten minutes, we measured Dicholrodihydrofluorescein(DCF) and DPPH radical-scavenging activity in 0.5 mM 1,1-diphenyl-2-picrydrazyl(DPPH) radical solution, 0.1ml, 99% ethanol 0.8ml, and CS 0.1 ml mixed solution. Results 0, 1, 2, 3, 4, 5 mg/ml CS treatments were not affect on cell viability and inhibited b-hexosaminidase release, IL-4, TNF-$\alpha$ secretion, CS treatments also decreased IL-4, TNF-$\alpha$ mRNA expression in RBL-2H3 cells. CS treatments inhibited reactive oxygen species(ROS) and DPPH radical-scavenging activity. Conclusions These results suggest that CS may be useful for the prevention or treatment of allergic disease.