Mitochondrial dysfunction is closely associated with reactive oxygen species (ROS) generation and oxidative stress in cells. On the other hand, modulation of the cellular antioxidant defense system by changes in the mitochondrial DNA (mtDNA) content is largely unknown. To determine the relationship between the cellular mtDNA content and defense system against oxidative stress, this study examined a set of myoblasts containing a depleted or reverted mtDNA content. A change in the cellular mtDNA content modulated the expression of antioxidant enzymes in myoblasts. In particular, the expression and activity of glutathione peroxidase (GPx) and catalase were inversely correlated with the mtDNA content in myoblasts. The depletion of mtDNA decreased both the reduced glutathione (GSH) and oxidized glutathione (GSSG) slightly, whereas the cellular redox status, as assessed by the GSH/GSSG ratio, was similar to that of the control. Interestingly, the steady-state level of the intracellular ROS, which depends on the reciprocal actions between ROS generation and detoxification, was reduced significantly and the lethality induced by $H_2O_2$ was alleviated by mtDNA depletion in myoblasts. Therefore, these results suggest that the ROS homeostasis and antioxidant enzymes are modulated by the cellular mtDNA content and that the increased expression and activity of GPx and catalase through the depletion of mtDNA are closely associated with an alleviation of the oxidative stress in myoblasts.
본 연구는 고온기 복합생균제(L. plantarum, B. subtilis, Saccharomyces cerevisiae) 급여가 육계의 항산화 방어작용에 미치는 영향을 조사하기 위하여 대조군(CON), 0.25% 생균제 급여군(LPB) 및 0.5% 생균제 급여군(HPB) 등 3 처리군으로 설정하여 혈장, 소장 점막 및 간 조직에서 항산화 지표를 분석하였다. 실험 결과, 혈장 total protein, albumin, bloodurea nitrogen(BUN) 및 glutathione(GSH) 수준 등 질소화합물은 처리군 간 차이가 없었다. 혈장에서 조사한 항산화 효소 superoxide dismutase(SOD), glutathione peroxidase(GPX)와 glutathione S-transferase(GST) 및 지질과산화(MDA) 역시 생균제 급여에 따른 유의적 차이가 없었다. 소장점막조직에서 SOD 활성도는 0.5% 생균제 급여군(HPB)에서 대조군과 LPB군 보다 유의하게(P<0.05) 증가하였다. 소장 점막조직의 MDA 수준은 대조군보다 HPB군에서 현저하게(P<0.05) 감소하였다. 그러나 소장 점막조직의 GPX와 GST 활성도는 생균제 급여에 따른 차이는 없었다. 간 조직에 존재하는 SOD, GPX, GST 활성도 및 MDA 수준은 생균제 급여와 급여 수준에 따른 영향을 받지 않았고 모든 군에서 비슷한 수준을 보였다. 따라서 HPB군의 소장 점막조직에서 SOD 활성도가 증가하고 지질과산화도가 감소하는 결과로 보아 고온기에 0.5% 생균제 급여는 육계 소장 점막조직의 항산화 방어작용에 긍정적인 효과를 미치는 것으로 나타났다.
Background: To assess the antioxidant effects of gamma-oryzanol on human prostate cancer cells. Materials and Methods: Cytotoxic activity of gamma-oryzanol on human DU145 and PC3 prostate cancer cells was determined by proliferation assay using 3-(4, 5-dimethylthiazol, 2-yl)-2, 5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) reagent. mRNA levels of genes involved in the intracellular antioxidant system, superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPX) and glutathione reductase (GSR) were determined by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). Cancer cell lysates were used to measure lipid peroxidation using thiobarbituric acid reactive substance (TBARS). Glutathione contents of the cell lysates were estimated by the reaction between sulfhydryl group of 5, 5'-dithio (bis) nitrobenzoic acid (DTNB) to produce a yellow-color of 5-thio-2-nitrobenzoic acid using colorimetric assay. Catalase activity was also analysed by examining peroxidative function. Protein concentration was estimated by Bradford's assay. Results: All concentrations of gamma-oryzanol, 0.1-2.0mg/ml, significantly inhibited cell growth in a dose- and time-dependent fashion in both prostate cancer cell lines, DU145 and PC3. Gene expression of catalase in DU145 and PC3 exposed to gamma-orizanol at 0.5mg/ml for 14 days was down regulated, while mRNA of GPX was also down regulated in PC3. The MDA and glutathione levels including catalase activity in the cell lysates of DU145 and PC3 treated with gamma-oryzanol 0.1 and 0.5mg/ml were generally decreased. Conclusions: This study highlighted effects of gamma-oryzanol via the down-regulation of antioxidant genes, catalase and GPX, not cytotoxic roles. This might be interesting for adjuvant chemotherapy to make prostate cancer cells more sensitive to free radicals. It might be useful for the reduction of cytotoxic agents and cancer chemoprevention.
Skin is constantly exposed to air, solar radiation, ozone and other air pollutants formulating free radicals. The reactive oxygen species(ROS), formed under these conditions, are associated with skin cancers, cutaneous photoaging, and cutaneous inflammatory disorders. In this study, we sought to establish an animal model for UVB-induced skin alteration using BALB/c mice. The level of UVB irradiation used in this model was within physiological dose. BALB/c mice were exposed to a single dose of UVB ($200mJ/cm^2$ and were sacrificed at 3, 6, 24, and 48 hours following the irradiation. The effect of a single exposure to UVB irradiation on skin catalase(CAT), superoxide dismutase(SOD), and glutathione peroxidase(GPx) activities were examined. Significant decrease in the activity of all enzymes were observed at 6 hours after irradiation(p<.05). The activity of CAT decreased more sharply than those of SOD and GPx, and then remained depressed until 48 hours after UVB irradiation, whereas the activity of GPx recovered to basal level at 48 h after UVB irradiation. Our results indicate that BALB/c mouse could be an adequate animal model of UVB irradiation experiment. These results will also provide fundamental knowledge for the effective nursing strategies in reducing UV-induced skin disorders.
The study aimed to evaluate the effect of kefir combination from goat milk and soy milk on lipid profile, plasma glucose, glutathione peroxidase (GPx) activity and the improvement of pancreatic β-cell in diabetic rats. Male rats were divided into five treatments: normal control, diabetic control, goat milk kefir, combination of goat milk-soy milk kefir and soy milk kefir. All rats were induced by streptooztocin-nicotinamide (STZ-NA), except for normal control. After 35 d experiment, the rats were sampled for blood, sacrificed and sampled for pancreatic tissues. Results showed that diabetic rats fed kefir combination had higher (p<0.05) triglyceride than the rats fed goat milk or soy milk kefir. Decreasing of plasma glucose in diabetic rats fed kefir combination was higher (p<0.05) than rats fed goat millk kefir. The activity of GPx in diabetic rats fed three kinds of kefir were higher (p<0.01) than untreated diabetic rats. The average number of Langerhans and β-cells in diabetic rats fed kefir combination was the same as the normal control, but it was higher than diabetic control. It was concluded that kefir combination can be used as antidiabetic through maintaining in serum triglyceride, decreasing in plasma glucose, increasing in GPx activity and improving in pancreatic β-cells.
The water fraction exhibiting anticancer activity was prepared from 70% methanol extract of Artemisis argyi by stepwise solvent partioning. This water fraction(5 $\mu$g/ml concentration) showed a considerable cytotoxicity against leukemic L1210 cells with a maximal value of 92% for 3 days culture. Contrastingly to such substantial anticancer activities the identical fraction showed far low toxicity against normal lymphocytes than chloroform fraction of Artemisia argyi mitomycine and 5-fluorouracil at every concentration ranging 0.01$\mu$g/ml~10.00$\mu$g/ml. The cytotoxicity displayed against L1210 cells by the water fraction of Artemisia was found to be proportinal to the decrease of viability of L1210 cells. On the other hand, $O_2$ion generation in L1210 cells appeared to be elevated in accordance to cytotoxicity by the water fraction with concurrent increases of superoxide dismuatse (SOD) and glutathione peroxidase (GPx) which are responsible for the conversion of $O_2$ ion and $H_2O$$_2$ respectively These findings taken together indicate that the death of L1210 cells by the water fraction of Auemisia atgyi, may be induced at least in part by the detrimental action of reactive oxygen species (ROS) including $O_2$- in spite of substantial extorts of SOD and GPx to overcome the attack of ROS.
The effects of different dietary fatty acids on the hepatic glutathione S-transferase(GST-P) positive foci and glutathione related enzyme system were investigated in carcinogen treated rats. Weaning male Sprague Dawley rats were divided into three groups and fed the diets of 15% corn(CO), perilla(PO), and sardine oil(SO), respectively. Hepatocellular carcinogenesis was initiated with diethylnitrosamine(DEN) and then fed the diet containing 0.02% 2-acetylaminofluorene(2-AAF) followed by 0.05% phenobarbital for 10 weeks. The hepatic tissues were homogenized and centrifugated to prepare microsomal and cytosolic fractions. The enzyme activities of hepatic glutathione S-transferase(GST), glutathione reductase(GR), and glutathione peroxidase(GPx) were determined from cytosolic fractions. The number of GST-P hyperplastic nodules was the highest in corn oil group at 6th week, the early stage of hyperplastic nodule formation. GST activities were increased significantly by carcinogens in all dietary groups after 6th wk. GR activities followed the same trend as GST activities. GPx activities were decreased by carcinogens in all dietary groups at 10th week. In this experiment, corn oil diet may have promotive effect on hyperplastic nodule formation during the early promotional stages of chemical carcinogenesis.
Park, Seul-Ki;Jin, Eon-Seon;Lee, Choul-Gyun;Lee, Mi-Young
Molecular & Cellular Toxicology
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제4권4호
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pp.300-306
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2008
We investigated high light-induced alterations in antioxidant enzymes by exposing green vegetative cells of the alga Haematococcus pluvialis to excess irradiance to induce the production of astaxanthin, a carotenoid pigment. Total activity of catalase decreased approximately 70% after high light exposure, whereas glutathione peroxidase (GPX) activity was slightly enhanced. Total activity of superoxide dismutase and ascorbate peroxidase (APX) also slightly decreased. Overall, we did not observe dramatically elevated levels of antioxidant isozymes, although APXn, GPX2, and GPX3 isozyme increased slightly. ${H_2}{O_2}$ content increased about sixfold after high light exposure, demonstrating severe cellular oxidative stress, whereas lipid peroxidation was notably reduced. Concomitantly, astaxanthin accumulation increased about sevenfold. This result suggests that probably massively accumulated astaxanthin may be one of the antioxidant protector against high light stress.
Two open reading frames of Haemophilus influenzae, HI0572 and HI0751, showing homology to a yeast thioredoxin peroxidase II (TPx II) and an E. coli thiol peroxidase $P_{20}$, respectively, were cloned and expressed in E. coli, and then the proteins were subsequently purified and characterized. HI0751 protein showed the thioredoxin (Trx)-dependent peroxidase activity, whereas HI0572 protein showed glutathione-dependent peroxidase. The HI0572 is the first peroxiredoxin with glutathione peroxidase activity rather than thioredoxin peroxidase. Purified HI0572 and HI0751 proteins protected specifically the inactivation of glutamine synthetase by metal catalyzed oxidation (MCO) systems composed of $Fe^{3+}$, $O_2$ and mercaptans such as dithiothreitol, ${\beta}-mercaptoethanol$ and glutathione (GSH). Unlike the HI0751 protein, the HI0572 protein was more effective in protecting glutamine synthetase from inactivation by the $GSH/Fe^{3+}/O_2$ system. It seems that these unique properties of the HI0572 protein are due to the structure containing a glutaredoxin domain at it's C-terminal in addition to a peroxiredoxin domain.
Objective: Selenium-independent glutathione peroxidase (GPx5) is specifically expressed in the mammalian epididymis and plays an important role in protecting sperm from reactive oxygen species and lipid peroxidation damage. This study investigates GPx5 expression in the epididymis of Small Tail Han sheep. Methods: GPx5 expression was studied in three age groups: lamb (2 to 3 months), young (8 to 10 months), and adult (18 to 24 months). The epididymis of each age group divided into caput, corpus and cauda, respectively. Analysis the expression quantity of GPx5 in epididymis and testis by real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction and Western blot. Finally, GPx5 protein locating in the epididymis by immunohistochemical. Results: The results demonstrate that in the lamb group, the GPx5 mRNA, but not protein, can be detected. GPx5 mRNA and expressed protein were detected in both the young and adult groups. Moreover, both the mRNA and protein levels of GPx5 were significantly higher in the young group than in other two groups. When the different segments of epididymis were investigated, GPx5 mRNA was expressed in each segment of epididymis regardless of age. Additionally, the mRNA level in the caput was significantly higher than that in corpus and cauda within same age group. The GPx5 protein was in the epithelial cells' cytoplasm. However, GPx5 mRNA and protein were not detected in the testis. Conclusion: These results suggest that GPx5 is mainly expressed in the epididymis of Small Tail Han sheep, and that the expression level of GPx5 is associated with age. Additionally, GPx5 was primarily expressed in the epithelial cells of the caput. Taken together, these studies indicate that GPx5 is expressed in the epididymis in all age grades.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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