흰쥐 간세포에 존재하는 비소결합물질의 특성을 조사하기 위하여 4 ppm의 비소를 포함하는 NaASO$_2$수용액의 식수로 15일간 흰쥐에 공급하였다. 비소처리군의 간 cytosol분획의 정상단백 질의 함량은 감소하였으나 8종류의 stress protein의 함량은 증가하였다. Cytosol에 존재하는 비소결합체물질은 한 종류이고,glycine, glutamic acid 및 cysteine의 3종류의 아미노산으로 구성되어있으며 분자량은 500D이었다.Glutathione은 비소와 5:1의 몰비로 결합하였으며 glutathione과 비소의 복합체는 gel filtration chromatography에서 비소결합물질과 같은 이동성을 나타내어 cytosol에 존재하는 미소결합물질은 glutathione으로 추정되었다. Glutathione에 결합한 비소는 미토콘드리아의 호흡, 형태전환 및 팽윤과 수축기능에 있어서 대조군과 별다른 차이를 나타내지 않았다. 이와 같은 결과들로써, 생체에 직접 처리한 비소에 의하여 stress protein합성이 촉진되며, 간 cytosol에 존재하는 비소결합물질은 glutathione으로 추정되고, 비소와 복합체를 형성함으로써 비소의 세포독성에 대한 방어기능을 나타내는 것으로 생각된다.
Kim, Jong-Hyeong;Mamuad, Lovelia L.;Lee, Hyun-June;Ki, Kwang-Seok;Lee, Wang-Shik;Ha, Jong-K.;Lee, Sang-Suk
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제24권12호
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pp.1711-1717
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2011
The objective of this experiment was to evaluate the effect of dietary supplementation of glutathione (GSH) on health, solid feed consumption, nutrient intake, body weight gain (BWG), feed efficiency, blood metabolites and the occurrence of diarrhea in Holstein neonatal calves. The calves were fed plain milk as a control (CON) or milk with GSH supplementation. Sixteen calves were separated from their mothers immediately after birth, moved into individual cages and fed colostrum for the first three days. For GSH supplementation, three grams of GSH powder were mixed in 1.8 L of heat-treated milk and placed in a plastic bottle with a rubber nipple. The calves were fed GSH-supplemented milk only once out of four daily feedings. For the first 25 d, calves were fed 1.8 L of milk four times per day. Milk feeding frequency was reduced to three times per day from days 26 to 30, followed by twice a day from days 31 to 44, and once a day from days 45 to 49, after which they were weaned at day 50. Body weight gain (BWG), feed consumption, and growth performance were monitored until day 70. The dietary supplementation of GSH had no effect on daily feed intake and growth performance in growing calves. Hematological results revealed red blood cell distribution width (RDW) was lower, and mean corpuscular volume (MCV) was significantly higher in calves fed GSH. Serum lactate dehydrogenase (LDH) concentrations were lower in calves fed GSH. Rectal temperature at day 70 was higher in calves that did not receive GSH, while mean frequency of diarrhea and enteritis was less in calves fed GSH. It is concluded from the present study that BW gain, total dry matter intake (DMI), feed efficiency, and breathing rate did not differ between groups. However, there were some positive blood parameters and the mean frequency of diarrhea and enteritis was less in calves fed GSH compared to CON which did not receive GSH. With the results obtained, supplementation of GSH is highly recommended.
Conditions for glutathione production in E. coli cells which possess pGH501 (2 gshI+gshII) were studied. In terms of ATP supply for the glutathione synthesis, two different systems have been constructed and compared. When the acetate kinase reaction of E. coli was used for ATP generation, 20 mM of L-cysteine was completely converted to glutathione by toluene-treated E. coli cells (100 mg/ml) harboring pGH501 within 2 h at $37^{\circ}C$. However, considering the economical aspects, the glycolytic pathway of yeast was chosen as a better system for ATP generation. The optimal concentrations of reactants for glutathione production were determined to be as follows; 80 mM L-glutamate, 20 mM L-cysteine, 20 mM glycine, 20 mM $MgCl_2$, 50 mM potassium phosphate buffer (pH 7.5), 400 mM glucose, polyoxyethylene stearylamine ($5\;\mul/ml$), toluene-treated E. coli HB101/pGH501 (100 mg/ml), and dried yeast cells (400 mg/ml). The conversion ratio of L-cysteine to glutathione was 80% (about 5 mg/ml) under optimal condition within 6 h at $37^{\circ}C$.
Chemopreventive activities of polysaccharides from soybeans fermented with either Phellinus igniarius or Agrocybe cylindracea were investigated by measuring the induction of quinone reductase (QR), glutathione S-transferase (GST) activities, and glutathione (GSH) levels in the cell culture along with inhibition of polyamine biosynthesis. The polysaccharides from soybeans fermented with P. igniarius strongly (p<0.005) induced QR activity at all concentrations tested. The extract not only induced GST activity in a dose-dependent manner in the concentration range of 0.1-1.0 mg, but significantly induced GSH revels in cultured Hepa 1c1c7 cells with a maximal 1.4-fold increase at 0.1 mg. The polysaccharides from soybeans fermented with A. cylindracea were effective in inhibiting polyamine metabolism. These results suggest that polysaccharides from soybeans fermented with P. igniarius or A. cylindracea have cancer chemopreventive activities in in vitro models and, therefore, could be considered as potential agents for cancer chemoprevention.
본 연구는 선형가속기의 고에너지 엑스선을 조사한 생쥐 간에 대한 백삼과 동충하초의 방사선방호효과를 연구하였다. ICR계 수컷생쥐 군에 7일 동안에 경구적으로 백삼(150 mg/kg/day)과 동충하초(200 mg/kg/day)를 각각 방사선조사 전에 투여했고 다른 생쥐 군에 5 Gy(1.01 Gy/min)의 방사선량으로 전신조사를 했고 대조군에 생리적 식염수 (0.1 ml)를 투여 한 후 간 조직에서 환원형 글루타치온(GSH)과 산화형 글루타치온(GSSG)의 함량을 각각 검사하였다. 그 결과 방사선조사군(Rad)보다 동충하초투여군(EF+Rad)과 백삼투여군(WG+Rad)에서 환원형 글루타치온 (GSH)함량이 유의성 있게 증가했으나 산화형 글루타치온(GSSG)의 함량은 유의성 있게 감소하였다. 총 환원형 글루타치온(total GSH)과 산화형 글루타치온(GSSG)의 함량 비율은 방사선조사군(Rad)보다 동충하초투여군(EF+Rad)과 백삼투여군(WG+Rad)에서 유의성 있게 감소하였다.
본 연구에서는 글루타치온의 생산 공정을 개발하기 위해 효모의 성장특성, 글루타치온의 생산성 및 공정 모니터링에 관하여 조사하였다. 초기 pH가 4인 경우 40 mg/L 정도의 높은 글루타치온이 생산되었으며 배양온도에 따른 글루타치온의 생산은 3$0^{\circ}C$에서 가장 높게 나타났다. 그리고 최소 배지에 첨가한 시스테인은 배양 12시간에 넣었을 때 글루타치온의 생산성이 높게 나타났다. 생물 반응기를 이용한 회분식 배양에서 기질 농도에 따른 S. cerevisiae 성장 특성 및 글루타치온 생산은 글루코스 농도 20 g/L에서 글루타치온 생산량이 55 mg/L로 가장 높았다. 최소 배양액에 배양 초기에 0.5 % (v/v) 글라이신과 글루탐산을 각각 첨가하고 배양 11시간에 시스테인을 0.5% (v/v) 추가로 첨가한 경우에 글루타치온의 생산량이 많았다. 회분식 배양 후 기질을 첨가하는 유가식 발효 공정에서는 반응기내 글루코스 농도가 0.5 g/L 이하로 유지되도록 글루코스를 계단식으로 공급하였을 때 글루타치온은 약 102 mg/L로 높은 생산량을 나타내었다. 2차원 형광 센서를 이용하여 글루타치온 생산 공정의 온라인 모니터링은 배양액의 배지 조성이나 성장 특성 등 배양기내의 환경 변화에 따라 형광 영역 및 세기가 다르게 나타났으며 실시간 모니터링 된 형광 데이터는 기질 및 생산물 그리고 균체 성장 등의 각종 공정 변수와 좋은 상관성을 보였다. 따라서 2차원 형광 센서에 의한 모니터링은 글루타치온 대량 생산을 위한 실시간 모니터링에 매우 효과적이라 할 수 있다.
Jo, Qtae;Choy, Eun-Jung;Lee, Yong-Hwa;Ko, Sung-Jung;Song, Young-Chae;Kim, Myoung-Jin;Hwang, Eung-Ju
Fisheries and Aquatic Sciences
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제9권4호
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pp.140-145
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2006
We measured activities of the ubiquitous tripeptide non-protein thiol (L-${\gamma}$-glutamyl-L-cysteinyl-glycine), glutathione (GSH), which is believed to playa fundamental role in detoxifying xenobiotics in biological systems, as a metabolic biomarker for benzo(${\alpha}$)pyrene and Aroclor 1254 exposure in the Pacific oyster Crassostrea gigas. Reproductive oysters were exposed to the pollutants for 50 days by the algal vectoring method in which the oysters were fed with concentrated standard algal foods grown in culture media containing Aroclor 1254 (0, 5, 50, 500 ng/g) or benzo(${\alpha}$)pyrene (0, 10, 100, 1,000 ng/g). Both pollutants induced maternal GSH activities in 10 days in a dosage-dependent manner (p<0.05), although Aroclor 1254 was stronger. The pollutant-driven GSH elevation persisted for 20 to 30 days depending on the pollutants and concentrations. Thereafter, a drastic decline in the GSH activity was observed due to metabolic failure, after which the oyster GSH remained at low levels throughout the remainder of the experiment. The pollutant exposures influenced maternal reproductive output in terms of fertilization, hatching, and morphology. These results imply that changes in activity of the GST-catalyzing molecule can be used as an oyster biomarker for Aroclor 1254 and benzo(${\alpha}$)pyrene exposure.
Halogenated organic compounds, such as 1-bromobutane (1-BB), have been used as cleaning agents, agents for chemical syntheses or extraction solvents in workplace. In the present study, immunotoxic effects of 1-BB and its conjugation with glutathione (GSH) were investigated in female BALB/c mice. Animals were treated orally with 1-BB at 375, 750 and 1500 mg/kg in corn oil once for dose response or treated orally with 1-BB at 1500 mg/kg for 6, 12, 24 and 48 hr for time course. S-Butyl GSH was identified in spleen by liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry. Splenic GSH levels were significantly reduced by single treatment with 1-BB. S-Butyl GSH conjugates were detected in spleen from 6 hr after treatment. Oral 1-BB significantly suppressed the antibody response to a T-dependent antigen and the production of splenic intracellular interlukin-2 in response to Con A. Our present results suggest that 1-BB could cause immunotoxicity as well as reduction of splenic GSH content, due to the formation of GSH conjugates in mice. The present results would be useful to understand molecular toxic mechanism of low molecular weight haloalkanes and to develop biological markers for exposure to haloalkanes.
Background: Panax notoginseng saponins (PNS) are bioactive substances extracted from P. notoginseng that are widely used to treat cardiovascular and cerebrovascular diseases and interstitial diseases. PNS have the functions of scavenging free radicals, anti-inflammation, improving blood supply for tissue and so on. Objectives: The aim of this study was to investigate the effects of PNS on the oxidative stress of immune cells induced by porcine circovirus 2 (PCV2) infection in vitro and in vivo. Methods: Using an oxidative stress model of PCV2 infection in a porcine lung cell line (3D4/2 cells) and mice, the levels of nitric oxide (NO), reactive oxygen species (ROS), total glutathione (T-GSH), reduced glutathione (GSH), and oxidized glutathione (GSSG) and the activities of xanthine oxidase (XOD), myeloperoxidase (MPO) and inducible nitric oxide synthetase (iNOS) were determined to evaluate the regulatory effects of PNS on oxidative stress. Results: PNS treatment significantly reduced the levels of NO and ROS, the content of GSSG and the activities of XOD, MPO, and iNOS (p < 0.05), while significantly increasing GSH and the ratio of GSH/GSSG in infected 3D4/2 cells (p < 0.05).Similarly, in the in vivo study, PNS treatment significantly decreased the level of ROS in spleen lymphocytes of infected mice (p < 0.05), increased the levels of GSH and T-GSH (p < 0.05), significantly decreased the GSSG level (p < 0.05), and decreased the activities of XOD, MPO, and iNOS. Conclusions: PNS could regulate the oxidative stress of immune cells induced by PCV2 infection in vitro and in vivo.
본 연구는 단삼 분획추출물로부터 in vitro와 in vivo상에서 QR과 GST의 활성 유도와 GSH의 함량변화를 지표로 암예방 효과를 측정하였다. Hepalcla7 세포에 대한 in vitro상에서의 실험결과 QR 활성 유도율은 70% EtOH 추출물 50 ${\mu}g/ml$ 처리군에서 2.5배로 가장 높은 유도율을 나타내었고, GST 활성 측정은 EtOAc추출물 50 ${\mu}g/ml$농도에서 1.4배의 유도율을 나타내었다. GSH 생성변화를 살펴본 결과에서는 $H_2O$추출물, 70% EtOH 추출물 그리고 water layer 추출물 50 ${\mu}g/ml$ 농도에서 높은 생성율을 나타내었다. 이상의 결과에서 QR활성과 GSH 함량변화에서 높은 증가효과를 나타낸 70% EtOH 추출물을 관류법으로 마우스에 투여하여 in vivo 상에서의 QR과 GST의 활성 변화와 GSH 함량을 측정한 결과 QR, GST활성과 GSH함량이 250 mg 투여시 각각 1.7배 및 1.5배의 활성 증가와 1.4배 함량증가를 측정할 수 있었음으로 70% EtOH추출물은 암예방효과가 가장 높은 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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