L-Glutamate를 간편하고 단시간에 측정할 수 있는 glutamate sensor를 개발하기 위하여, glutamate oxidase를 여러 가지 membranes에 고정화 시키는데 적합한 조건과. 그 결과로 얻은 효소 membranes의 특성, 개발한 glutamate sensor의 반응특성 및 glutamate sensor의 정확성을 조사하였다. Glutamate oxidase를 membranes에 고정화 하는데 GA 0.25%, BSA 0.3 mg, 효소 사용량 2.0 units이상이 적당하였다. 고정화 효소의 최적 pH는 6.5이었고, chitosan membrane을 사상한 경우 가장 효소활성이 높았다. 그러나 저장 안정성이나 반응시간 등을 고려하여 preactivated nylon에 고정화시킨 효소 membrane을 glutamate sensor 개발에 사용하였다. Glutamate oxidase를 선택한 membrane에 고정화시켜 효소와 glutamate의 반응산물인 암모니아가 nonactin membrane을 이용한 암모니움이온 전극에 의하여 측정되도록 효소 sensor를 구성하였으며, sensor의 반응시간은 약 2분이었다. Preactivated membrane에 고정화된 효소는 $4^{circ}C$에서 2개월간 저장중 안정한 활성을 보였으며, 이를 사용한 glutamate sensor로 약 250회 측정할 때 까지 활성에 별 변화가 없었다, 개발된 glutamate sensor의 glutamate 측정 농도범위는 $0.1{\sim}5\;mM$ 이었다. Glutamate sensor를 체더 치즈중의 L-glutamate 측정에 응용한 결과는 HPLC로 분석한 결과와 높은 상관관계가 있어, 정확성이 인정되었다.
흰쥐태 뇌간의 세포를 배양하여 glutamate에 6시간까지 노출시 glutamate의 농도 및 노출 시간에 의존적으로 세포내 5-HT 및 5-HIAA의 함량이 감소하였고, 배양액으로 LDH의 유출이 증가하였다. Tetrodotoxin은 glutamate의 작용을 차단하지 못하였다. NMDA 수용체 통로 봉쇄제인 MK-801에 의해 glutamate의 작용이 효과적으로 차단되었고, non-NMDA 길항제인 CNQX는 효과가 없었으므로, serotonin 신경세포에 대한 glutamate의 작용은 NMDA 수용체의 자극에 의한 것으로 사료된다.
Kim, Jin-Hyuk;Shin, Hong-Kee;Chang, Hyun-Ju;Kim, Hye-Young
The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
/
제5권6호
/
pp.457-466
/
2001
Glutamate is the most common excitatory amino acid in the brain. Responsiveness of dendrites to the glutamate greatly varies depending on the application sites. Especially, a point of the maximal response to the glutamate of the dendrite is called as 'hot spot'. In our experiment, the responsiveness of the hot spot to the glutamate was investigated in the CA1 pyramidal neuron of the rat hippocampal slice. CNQX, the antagonist of AMPA receptor, blocked 95% of membrane current to the glutamate focal application $(I_{gl}).$ Train ejection of glutamate on one point of the dendrite increased or decreased the amplitude of $I_{gl}$ with the pattern of train, and the changes were maintained at least for 30 min. In some cases, glutamate train ejection also induced calcium dependent action potentials. To evoke long-term change of synaptic plasticity, we adopted ${\theta}-burst$ in the glutamate train ejection. The ${\theta}-burst$ decreased the amplitude of glutamate response by 60%. However, after ${\theta}-burst$ glutamate train ejection, the calcium dependent action potential appeared. These results indicated that the focal application of glutamate on the neuronal dendrite induced response similar to the synaptic transmission and the trains of glutamate ejection modulated the change of AMPA receptor.
The neuroprotective effect of betaine, one of the , components of Lycii Fructus, on glutamate-induced neurotoxicity in primary cultured chicken brain cells were examined. Betaine was found to attenuate glutamate-induced neurotoxicity at the concentration of 5-10 mM in both morphological and chemical aspects. The pretreament of chicken brain cells with 5-10 mM betaine for 2 hr at the 12th day of culture before the 40 min-exposure to 500${\mu}$M glutamate significantly increased the survival rate of nerve cells in chicken brain. Betaine could also raise the decreased LDH-level due to the neurotoxicity induced with 100${\mu}$M glutamate in chicken braill cells. LDH value was decreased to 63% of control level in chicken brain cells at the time of 48 hr after the exposure to glutamate. However, the pretreament of chicken brain cells with 5 mM betaine for 2 hr before the exposure to glutamate could prevent the decrease of LDH-level in brain cells showing 90% of control level. Nevertheless, tile remarkable neuroprotective effect of betaine on the glutamate-inducer in neurotoxicity in cultured chicken brain cells could not be observe when betaine was simultaneously administered with glutamate.
Exogenously applied oxygen free radical generating agent, pyrogallol, highly elevated extracellular glutamate accumulation and augmented N-methyl-D-aspartate (NMDA)-induced glutamate accumulation in cerebellar granule neuronal cells, but did not in astrocytes. Superoxide dismutase remarkably decreased the pyrogallol-induced glutamate accumulation, but either NMDA or kainate antagonists did not. In addition, pyrogallol did not affect the NMDAinduced intracellular calcium elevation. Pyrogallol partially blocked glutamate uptake into astrocytes. These results suggest that oxygen free radicals elevate extracellular glutamate accumulation by stimulating the release of glutamate as well as blocking the glutamate uptake.
Changes in the release and uptake of glutamate in cerebellar granule and glial cells of offspring of lead-exposed mothers were determined. In cultured cerebellar granule cells exposed to lead for 5 days, glutamate release was less influenced upon N-methyl-D-aspartate (NMDA) stimulation than that in the control. Although the NMDA-stimulated release of glutamate in cerebellar granule cells prepared from lead-exposed first generation pups was not different from that of the control group, the S-nitroso-N-acetylpenicillamine (SNAP)-stimulated release of glutamate in cerebellar granule cells obtained from lead-treated pups was less elevated than that in the control. Furthermore, in cerebellar granule cells obtained from lead-exposed second generations pups, glutamate release did not respond to both NMDA and SNAP stimulation. In cerebellar glial cells exposed to lead, the basal glutamate uptake was not changed. However, the L-trans-pyrollidine-2,4-dicarboxylic acid (PDC)-blocking effects was significantly reduced. In glial cells obtained from lead-exposed pups, the glutamate uptake was also less blocked by PDC than that in the control. Further decreases in PDC-blocking effects were observed in cerebellar glial cells obtained from lead-treated second generation pups compared to those from the control group. These results indicate that lead exposure induces the changes in the sensitivities of the glutamate release and uptake transporter. In addition, these results suggest that lead exposure might affect the intracellular signalling pathway and transmission in glutamatergic nervous system.
Objectives : The water extract of Gwibitang (GBT) has been traditionally used for treatment of psychologic disease and brain damage in Oriental Medicine, This study was designed to investigate the effect of GBT on the glutamate-induced toxicity of rat C6 glial cells. Methods : The cultured cells were pretreated with GBT and exposed to glutamate, The cell damage was assessed by using MTT assay and Hoechst, IC-l staining, Results : GBT had protective effects in glutamate-induced cytotoxicity, which was revealed as apoptosis characterized by chromatic condensation and the loss of mitochondrial membrane potential in C6 glial cells. However, GBT and glutamate had no effect in the activation of caspase family cysteine proteases including caspase-3, -8 and -9 proteasesin C6 glial ce]]s, GBT significantly recovered the depletion of GSH and inhibited the generation of $H_2O_2$ by glutamate in C6 glial cells. In addition, both GBT and antioxidants such as GSH and NAC protected the glutamate-induced cytotoxicity in C6 glial cells, indicating that GBT possibly has antioxidative effect. Moreover, GBT also inhibited the glutamate-induced degradation of $IkB{\alpha}$ in C6 glial cells, This result suggest that GBT has some inhibitory effects on the transcriptional activation of $NF-_{k}B$. Conclusions : GBT has protective effects in glutamate-induced cytotoxicity via an antioxidative mechanism.
흰쥐 대뇌겉질로부터 별아교세포를 배양하여 흥분성아미노산인 L-glutamate에 의하여 유발되는 세포종창(astrocytic swelling)에 대한 ginsenosides의 억제효과를 검토하였다. Glutamate(0.5 mM)를 세포에 가하고 1시간동안 배양하면 swelling을 일으켜, 세포내의 물의 용적([$^3$H]OMG의 uptake량으로 측정)은 대조세포에 비하여 약 2배의 증가를 나타냈다. Glutamate와 함께 ginsenosides Rb$_2$와 Rc를 가하고 배양하면 glutamate에 의한 astrocytic swelling이 용량의존적으로 감소하였다. 세포는 Rb$_2$와 Rc(0.5 mg/ml)에 24시간까지 노출시켜도 MTT reduction이 감소하지 않는 것으로 보아 이 ginsenosides에 의한 swelling의 억제효과는 세포막의 손상에 의한 것이 아님을 알 수 있었다. Rb$_2$와 Rc는 glutamate에 의한 세포내 $Ca^{2+}$농도의 상승을 억제하였다. 따라서 Rb$_2$와 Rc는Ca$^{2+}$의 유입을 억제하므로서 glutamate에 의한 astrocytic swelling을 억제하는 것으로 생각된다.
Objective : The water extract of Yukgunja-tang(YGJT) has been traditionally used in treatment of qi deficiency and phlegm in Oriental medicine. However, little is known about the mechanism by which YGJT protects neuronal cells from injury damages. Therefore, this study was designed to evaluate the protective effects of YGJT on C6 glial cells by glutamate-induced cell death. Methods : The present study describes glutamate, which is known as an excitatory neurotransmitter, related with oxidative damages, and YGJT, which shows protective effects against glutamate-induced C6 glial cell death. One of the main mediators of glutamate-induced cytotoxicity was known on the generation of reactive oxygen species(ROS) via activation of NADPH oxidase (NOX). The protective effects of antioxidant(NAC) and NOX inhibitor(apocynin) on the glutamate-induced C6 glial cells were determined by a MTT reduction assay. Result : YGJT inhibited glutamate-induced ROS generation via inhibition of NOX expression on glutamate-stimulated C6 glial cells. Furthermore, YGJT attenuated glutamate-induced caspase activation. These results suggest that YGJT could be a new potential candidate against glutamate-induced oxidative stress and cell death. Conclusion : These findings indicate that in C6 glial cells, ROS plays an important role of glutamate-induced cell death and that YGJT may prevent cell death from glutamate-induced cell death by inhibiting the ROS generation.
Background: Glutamate is the main excitatory neurotransmitter. Excessive glutamate causes excitatory toxicity and increases intracellular calcium, leading to neuronal death. Parvalbumin is a calcium-binding protein that regulates calcium homeostasis. Quercetin is a polyphenol found in plant and has neuroprotective effects against neurodegenerative diseases. Objectives: We investigated whether quercetin regulates apoptosis by modulating parvalbumin expression in glutamate induced neuronal damage. Methods: Glutamate was treated in hippocampal-derived cell line, and quercetin or vehicle was treated 1 h before glutamate exposure. Cells were collected for experimental procedure 24 h after glutamate treatment and intracellular calcium concentration and parvalbumin expression were examined. Parvalbumin small interfering RNA (siRNA) transfection was performed to detect the relation between parvalbumin and apoptosis. Results: Glutamate reduced cell viability and increased intracellular calcium concentration, while quercetin preserved calcium concentration and neuronal damage. Moreover, glutamate reduced parvalbumin expression and quercetin alleviated this reduction. Glutamate increased caspase-3 expression, and quercetin attenuated this increase in both parvalbumin siRNA transfected and non-transfected cells. The alleviative effect of quercetin was statistically significant in non-transfected cells. Moreover, glutamate decreased bcl-2 and increased bax expressions, while quercetin alleviated these changes. The alleviative effect of quercetin in bcl-2 family protein expression was more remarkable in non-transfected cells. Conclusions: These results demonstrate that parvalbumin contributes to the maintainace of intracellular calcium concentration and the prevention of apoptosis, and quercetin modulates parvalbumin expression in glutamate-exposed cells. Thus, these findings suggest that quercetin performs neuroprotective function against glutamate toxicity by regulating parvalbumin expression.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.