토양에서 분리한 Bacillus sp. I-5의 cyclodextrin glucanotransferase(CGTase)는 ${\beta}-$ 및 ${\gamma}-cyclodextrin(CD)$를 주로 생성하는 효소로서 최적 반응조건은 pH 8.0, $50^{\circ}C$에서 최적 반응이었다. 생성되는 CD의 조성비는 buffer 용액에 따라 영향을 받았으며 sodium acetate의 농도를 200mM로 하였을 때 ${\gamma}-CD$의 생성은 35% 가량 증가하였다. 기질인 가용성 전분의 DE value에 따라 CD의 생성이 달라져 $3.5{\sim}6.0$범위의 DE value의 전분을 기질로 사용하였을 때 CD이 가장 많이 생성되었다. CD을 연속적으로 생산하기 위하여 CGTase를 가역적으로 용해-침전되는 담체인 hydroxypropyl methylcellulose acetate succinate에 고정화하였고 고정화된 CGTase는 pH 7.5에서 물에 용해되고 pH 6.0에서 쉽게 침전되는 특성을 나타내었다. CD의 연속적 생산은 고정화된 CGTase에 의한 CD의 생산, 반응하지 않은 기질을 glucose로 분해, glucose를 알코올로 발효시키는 단계로 하는 효소반응기를 개발하여 최종적으로 CD 혼합액과 에탄올이 생성되도록 하였다. 10%의 가용성 전분으로부터 생산된 전체 CD의 양은 3.65g이었다.
Mutational experiments were performed to imporve the cellulase productivity of Aspergillus phoenicis KU175, isolated from the southern part of Korea, as a high cellulase producer. By treatment ultra-violet light nad 4-NQO(4-Nitroquinoline-N-Oxide), mutation waas induced, and treatment ultra-violet light and 4-NQO (4-Nitroquinoline-N-Oxide), mutation was induced, and A.phoenicis KU175-115 was finally selected for its highest avicelase production. Avicelase production of the mutant was increased about 2 times compared with those of the wild strain. However, activities of other hydrolytic enzymes, such as amylase, protease and nuclease, of the mutant strain didn't show a marked difference compared with those of the nuclease, of the mutant strain didn't show a marked difference compared with the wild strain, except slight increase in ribonuclease activity and slight decrease in glucoamylase activity. Avicelases from the mutant strain selected were purified from wheat bran culture by successive salting out, followed by dialysis and column chromatography, and their charcteristics were compared with thosw of the wild strain. Avicelase was separated into three peaks in the mutant strain as well as in the case of wild strain. Avicelase II activity of the mutant strain was prominently higher than that of the wild strain, while avicelase I and III activities of those were equivalent. The optimal pH ranges and stability of avicelase II from the mutant strain were pH4-5 and pH3.5-6.0, respectively, as well as in the case of the wild strain. The optimal temperature and thermal stability of avicelase II from the mutant strain were $40{\sim}50^{\circ}C\;and\;20{\sim}55^{\circ}C$, respectively. These results were same as those of the wild strain. By the using of Eadie-Hofastee plot, $K_m\;and\;V_{max}$ of avicelase II from the mutant and the wild strain were calculated to be 2.29mg/ml and $4.84{\mu}g$ reducing sugar as glucose per min equally, from the line fitted to the data by the least square method. Activity of avicelase II from the mutant strain was slightly activated by $Mg^{++}\;but\;inhibited\;by\;Cu^{++}, \;Mn^{++}\;and\;Zn^{++}$, as well as in the case of the wild strain. Therefore, it was concluded that the mutant didn't induce the formation of another avicelase isozyme, or the changes in the properties of avicelase, but induce the changes in the productively of the same avicelase II by the action of regulatory gane.
To proceed mass production and improve its quality, we fermented potatoes using pilot system and investigated the changes in components during fermentation. After liquefaction and saccharification of potatoes by Nuruk(group I), crude enzyme(group II) and glucoamylase(group III), sugar contents in all groups were 18brix equally. However sugar contents in group(II) and group(III) after 24hrs decreased deeply to 7.2 and 8.8 % respectively, after 24hrs. Alcohol content in group(I) increased slowly and was the highest such as 6.8% after 48hrs. Fusel oils in all groups were n-propanol, isobutanol and isoamylalcohol. The major fusel oil in all groups was isoamylalcohol. At the early stage of fermentation, free sugars were glucose, maltose and lactose. Glucose decreased deeply during fermentation and at latter of the fermentation, galactose was detected in all groups. The contents of total free amino acid were 516.57~569.98 mg% in group(I), 193.97~292.11 mg% in group (II) and 186.31~270.53 mg% in group(III). The contents of aspartic acid, serine, glutamic acid, alanine, arginine, and histidine were high in all groups.
열에 의한 호화전분을 사용하는 에탄올 발효공정에서 증자과정을 생략하기 위한 방법으로 알칼리호화 및 생전분으로 부터 직접 발효시키는 가능성을 여러가지 전분종류에 따라 검토하였다. 5.4% NaOH를 사용하여 전분을 호화시키고 $H_{2}SO_4$와 $KH_{2}PO_4$용액을 사용하여 중화시켰다. 이어상법에 따라 에탄올 발효를 시킨 결과 $CO_2$발생속도에 있어서는 화학적 호화방법에 비해 약간 떨어지나 최종 에탄올함량은 동일하였다. 한편 생전분에 당화효소와 효모를 첨가하고 동시 당화, 발효시켰을때 쌀의 생전분은 가열호화시킨 전분과 $CO_2$생성속도 및 최종 에탄올함량이 거의 비슷하였다. 옥수수, 보리, 타피오카 및 고구마등의 생전분은 초기의 $CO_2$생성속도가 늦었고 발효종료에 걸리는 시간은 길었으나 최종 에탄올함량은 종류에 따라 비슷하거나 약간 떨어졌다. 감자생전분은 분해, 발효시 초기의 $CO_2$발생속도와 발효율이 현저히 낮았다.
토양으로부터 생 쌀보리 분해 효소 생산능이 있는 170주의 곰팡이와 4주의 방선균을 분리하여 이중 생 쌀보리 분해 효소 생산능이 가장 높은 No. 281 균주를 선정하여 동정한 결과 Rhizopus sp.로 밝혀졌으며, 밀기울을 기본 배지로 한 효소 생산 조건을 검토한 결과 효소 생산 최적 온도는 3$0^{\circ}C$, pH는 4.5-5.0 이고 배양 시간 5일 후에 최고의 역가를 보였다. 생쌀보리를 이용한 무증자 알코올 발효 실험에서는 분리한 Rhizopus sp. No. 281의 효소를 이용했을 때가 시판 효소보다도 에탄올 생성이 2% 증가된 결과를 나타내었다.
액화 실험에서 BAN과 Termamyl을 비교할 때 전반적으로 Termamyl이 우수했으며 Termamyl을 (0.00625% ~0.025% 범위로 첨가하였을 때 첨가량 증가에 따른 액화반응 촉진이 뚜렷이 관찰되였다. Termamyl 240uc의 경우 타파오카에 대해 최소 0 0.0125 (v/w)% 이상이 필요하였고, 반응시간은 2 시간 정도가 석당하였다. 최적온도는 $90∼95^{\circ}C$이었고 pH는 5.8 부근이 최척이였다. 반응초기 점도가 매우 높게 나타나는데 호화속도를 약간 줄이가 위해 초기 온도를 $70^{\circ}C$정도로 낮추는 갯이 좋았다. 당화실험에서는 Novo AMG 및 국내 도일 산엽 당 화효소 모두 액화된 타피오카 용액을 잘 당화시켰다. 그러나 Novo AMG와 도일 당화효소의 활성은 기 질 에 따라 약간썩 탈랐다. 즉 이당류인 말토오스를 기 질 로 할 때는 Novo AMG의 단위 부피당 활성이 도일 당화효소의 약 1.2배이였으나, 전분을 기질로 할 때는 활성비가 1.5배였다. 경시적으로 볼 때 초기에는 당화 속도가 빨랐고 포도망이 축적되는 후기에는 당화속도 가 감소하였다. 당화의 최적온도는 약 $55∼60^{\circ}C$ 부근이었고 pH는 조절하지 않는 경우 (pH 5.7)와 조절 한 경우 (pH 4.3)간에 차이가 없었다. 85% 이상의 당화를 위해서는 타피오카 샤용량에 대해 Novo AMG 400uc을 기준으로 O.0625(v/w)% 이상, 그 리고 10시간 이상의 반응사간이 필요하였다.
본 연구에서는 발효과정 중 누룩의 일반성분 및 효소 활성변화를 측정하고, 단백질의 분해정도와 밀 단백질에 민감한 환자의 혈청과 반응성을 관찰하였다. 누룩의 수분함량은 발효 1일 24.20%였으며 발효가 진행됨에 따라 미생물의 이용과 증발로 인해 감소되어 발효 15일에는 13.60%를 나타내었다. 누룩 발효 중 총당과 환원당의 함량은 발효시간이 경과함에 따라 증가하는 경향을 나타내었다. 누룩의 발효 초기 조단백질 함량은 1.58%였으나 발효가 진행됨에 따라 다소증가하여 발효 15일에는 2.05%로 나타났다. 또한 누룩의 조지방 함량은 발효 초기 1.32%였으며 발효 15일에는 2.24%로 다소 증가함을 나타내었다. ${\alpha}$-Amylase 활성은 발효 초기 1,416.67 U/g에서 발효 15일에는 2,833.00 U/g으로 급격히 증가하였으며, glucoamylase 활성은 발효 초기 497.90 U/g에서 발효 10일 경과 후 705.40 U/g으로 최대 활성을 보였으나 그 후 완만한 감소를 나타내었다. 누룩의 산성 protease 활성은 발효 초기에는 검출되지 않았으나 발효 10일에 75.00 U/g으로 급격히 증가하기 시작하여 발효 15일에는 327.00 U/g에 도달하였으며 중성 protease 활성도 발효 10일에 90.00 U/g으로 급격히 증가하기 시작하여 15일에는 354.00 U/g로 검출되었으며 이후에도 계속 증가하였다. 반면에 알칼리성 protease 활성은 검출되지 않았다. 발효가 진행됨에 따라 누룩 중 고분자 단백질이 각종 미생물에 의해 분해되어 저분자의 펩타이드 밴드가 생성되었으며 밀 민감성 환자의 혈청과 반응하는 밴드도 점차 감소하여 발효 15일에는 거의 검출되지 않았으므로 누룩 중 밀 단백질의 항원성이 감소하였음을 확인할 수 있었다. 따라서 본 연구를 통해 누룩은 영양학적 측면뿐만 아니라 효소학적 측면의 장점까지 겸비한 효율적인 한국 고유의 발효 식품용 스타터(starter)로써 전통주 제조에 필수적이며, 누룩의 고분자 단백질이 발효에 의해 저분자 펩타이드로 분해됨을 확인함으로써 밀 민감성 환자들을 위한 다양한 가공식품용 소재로 활용이 기대된다.
거미줄곰팡이인 R. oryzae N174를 이용한 액체종국 배양기술을 개발하기 위해, 밀기울 농도별(0, 5, 10, 15 및 20%)로 액체종국을 제조하여 이들의 품질 특성을 조사하였다. 배지에 밀기울 첨가량이 많을수록 균사체량이 많아졌을 뿐 아니라 산도, 아미노산도가 증가하는 특성을 보였다. 또한, 밀기울을 5% 첨가한 군에서 ${\alpha}$-amylase와 glucoamylase의 활성도가 높았으며 acidic protease의 경우에는 15% 밀기울 첨가 배지에서 활성도가 높았다. 배양시간 별(0, 24, 48, 72 및 96 hrs) 효소 활성은 48~72시간에 효소활성이 가장 높은 것으로 나타났다. R. oryzae N174 액체종국 최적조건은 5~15% 밀기울 배지에서 48~72시간 배양이 최적조건이었다. 이를 토대로 밀기울 액체종국을 제조하여 저장온도와 저장 기간을 달리하여 저장한 후, 밀누룩 제조시 종국으로서 적합한지를 구명하고자 하였다. 제조된 밀누룩의 효소 활성뿐만 아니라 pH, 산도 및 환원당 함량을 비교 분석한 결과, 저장온도와 상관없이 하루 정도 저장한 액체종국을 사용하여 만든 밀누룩에서 높은 수치를 보였다. 저장조건에 따른 형태학적 변화를 살펴본 결과, 저장된 액체종국에서 균사체의 생육과 포자의 생성유무에 따라 밀누룩의 효소 활성에 영향을 미칠 것이라는 예상과는 달리 각 효소의 활성과 균사체의 생장, 포자의 생성과는 큰 차이가 보이지 않았다.
압출처리시 일어나는 탈지대두분의 팽화율, 하적밀도, 수분흡수율 변화들을 지표로 하여 압출처리한 탈지대두분과 종래의 증자법에 의한 탈지대두로 발효, 숙성시킨 양조간장을 비교, 분석하였다. 각각의 최적 물리적 조건에서 압출처리한 탈지대두로 만든 고오지는 고오지 내부와 외부에서 균사의 발육이 잘 일어났으나 증자에 의한 탈지대두로 만든 고오지는 표면에서만 균사의 발육이 일어났다. 양조간장에 있어서 총질소는 대조구와 비교해 큰 차이는 없으나 포몰태 질소는 30% 정도 높은 값을 나타냈으며, 간장의 색도 또한 대조구보다 더 진한 색을 나타내었다. 양조간장의 아미노산 조성은 탈지대두분의 원료처리 방법에 따라 큰 차이는 없었으나, 총아미노산 함량은 대조구보다 $10{\sim}15%$ 높게 나타났다. 또한 대조구와 비교하여 특별한 이미나 이취가 없음을 관능검사를 통해 알 수 있었다.
In this study, investigated the effects of four strains belonging to Aspergillus oryzae on the quality of Kochujang. In the Koji and Kochujang making, investigated the difference of enzyme production of each strain, the change of each component and color during the aging, and tested the sensory taste. The results obtained were as follows; 1. Protease activity (acid, neutral) in wheat flour Koji was high in the case of Aspergillus $oryzae-S_1$ and Aspergillus oryzae - M of short stalked type. The strain Aspergillus $oryzae-S_1$ showed maximum activity after two days of Koji making, while the strain Aspergillus oryzae - M showed low activity till two days, but showed maximum activity after three days-four days of Koji making. 2. In $\alpha$-amylase activity, strain Aspergillus $oryzae-S_1$, Aspergillus $oryzae-S_2$ and Aspergillus oryzae - M showed high activity after two days of Koji making. Aspergillus oryzae-NB strain showed slower ${\alpha}$ - amylase activity than that strains. 3. In glucoamylase activity, all strain tested showed high activity after three days of Koji making, but st rain Aspergillus oryzae - NB showed slower activity than ot - hers. 4. In protease activity (acid, neutral) during the aging of Kochujang, strain Aspergillus $oryzae-S_1$ and Aspergillus oryzae - M of short stalked type showed higher activity than that of long stalked type. 5. Amino type nitrogen contents during the aging of Kochujang was very higher in the case of strains Aspergillus $oryzae-S_1$ and Aspergillus oryzae - M of short stalked type than other strains, and each contents was 315mg% and 337mg% after aged for ninty days. 6. The results that analysed free sugar of Kochujang aged for ninty days with HPLC were; glucose 5.84~7.13%, fructose 4.13~5.00%, rhamnose 0.91~1.04%, maltose 0.72~0.92% and presence of xylose was recognized. 7. The results that analysed alcohols of Kochujang aged for ninty days with gas chromatography were; ethanol 1.51~1.78%, n-propyl alcohol 1.13~1.20mg%, iso-amyl alcohol 3.5~4.4mg%. 8. In the sensory test of Kochujang aged for sixty days and for ninty days, the case of strains Aspergillus oryzae-M and Aspergillus $oryzae-S_1$ of short stalked type showed good taste, while the case of strains Aspergillus $oryzae-S_2$ and Aspergillus oryzae-NB of long stalked type showed good flavor and color.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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