This study aimed to evaluate the potential allergenicity of Cry proteins in insect-resistant genetically modified (GM) maizes (Bt11, MON810, and MON863) using serum screening tests. Serum samples were obtained from Korean children (0-15 years old) with allergic symptoms who had positive maize-specific IgE. The levels of serum specific IgE was measured by the Phadia ImmunoCAP system and considered as positive when they are 0.35 kU/L or higher. Cry proteins (Cry1Ab in Bt11, mCry1Ab in MON810, and Cry3Bb1 in MON863) were expressed in Escherichia coli and purified for serum screening. The reactivity of purified Cry proteins was confirmed by IgE immunoblots in 50 patients (maize-sensitized patients). There was no reaction between Cry proteins and sera from maize-sensitized patients. Our results suggest that these Cry proteins are not likely to cause allergic reactions. Further studies using more sera from patients with true clinical allergies are needed to evaluate the potential allergenicity of novel proteins in GM maize.
The regulation of labelling criterion for genetically modified (GM) foods has been enforced since 2001 in Korea. Therefore, GM soybean (GMS) or GM maize (GMM) processed foods must be labeled as GMO derived. We surveyed to see whether this regulation is kept relevantly or not and the distributive statue of GM processed foods. Using the method of polymerase chain reaction (PCR) based on endogenous gene (Le1n, SSIIb), promoter gene (P35S), terminator gene (NOS) and transgenic gene (RRS, Bt11, Bt176, GA21, T25, Mon810), we detected GMS and GMM processed foods circulating at the market in Busan area. Out of total 100 samples, 38 items were showed to be contaminated with recombinant gene by qualitative PCR. Among 82 domestic and 18 imported items, 32 (39.0%) and 6 (33.3%) items were detected with GM ingredients respectively. Also among the 80 soybean and 20 maize processed foods, 23 (28.7%) and 15 (75.0%) foods were sensitive to detect GMS and GMM ingredients respectively. For the qualitative PCR positive foods, we chased identity preservation (IP) certificates. And we verified that the PCR positive crops were grown up, harvested and shipped separately from GMO but just mixed with GMO in the threshold of the non attentional contamination levels (3%). Thus we can not find out any regulation-violent case at all. The results of this study will help to keep the regulations of GM labelling and be informative to consumers who want to know the laboratory results of GMO testing.
The risk from genetically modified (GM) plants results from the possibility of gene contamination producing adverse effects on biological diversity by introducing herbicide or insect resistance into related plants or weeds (NAS 2002). The concern about the leakage of genes from GM plants into the environment has primarily focused on pollen that could be wind-borne for long distances. During the period of fisk assessment in Japan, physical containment is applied as a measure of reducing gene flow via the dispersal of pollen from GM plants into the surrounding environment In this study, we tried to estimate the effect of physically contained greenhouse covered by 1-mm fine mesh to reduce pollen dispersal by researching cross pollination rate between non-GM yellow maize in a greenhouse and silver maize outside the greenhouse.
For the quantitative analysis of genetically modified (GM) maize in processed foods, primer sets and probes based on the 35S promoter (p35S), nopaline synthase terminator (tNOS), p35S-hsp70 intron, and zSSIIb gene encoding starch synthase II for intrinsic control were designed. Polymerase chain reaction (PCR) products (80~101 bp) were specifically amplified and the primer sets targeting the smaller regions (80 or 81 bp) were more sensitive than those targeting the larger regions (94 or 101 bp). Particularly, the primer set 35F1-R1 for p35S targeting 81 bp of sequence was even more sensitive than that targeting 101 bp of sequence by a 3-log scale. The target DNA fragments were also specifically amplified from all GM labeled food samples except for one item we tested when 35F1-R1 primer set was applied. A reference plasmid pGMmaize (3 kb) including the smaller PCR products for p35S, tNOS, p35S-hsp70 intron, and the zSSIIb gene was constructed for real-time PCR (RT-PCR). The linearity of standard curves was confirmed by using diluents ranging from $2{\times}10^1{\sim}10^5$ copies of pGMmaize and the $R^2$ values ranged from 0.999~1.000. In the RT-PCR, the detection limit using the novel primer/probe sets was 5 pg of genomic DNA from MON810 line indicating that the primer sets targeting the smaller regions (80 or 81 bp) could be used for highly sensitive detection of foreign DNA fragments from GM maize in processed foods.
Han, Sung Min;Kim, Young Tae;Won, Ok Jae;Choi, Kyung Hwa;Rho, Young Hee;Park, Kee Woong
농업과학연구
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제43권2호
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pp.215-220
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2016
The global cultivation area of genetically modified crops (GM crops) has been increasing every year. Cultivation of GM crops is not only beneficial to the economy but also has positive effects on the environment in decreasing the use of agrochemicals, chemical fertilizers, and agricultural machinery. However, there have been controversies about the admixture of GM crops and non-GM crops and the unintentional release of GM crops to the environment. Especially in Korea, where consumption of agricultural products is import-dependent, the economic importance of GM crops has been a significant issue. The Act on import and distribution of GM crops was established in 2001 to start the management of GM crops in Korea. Recently, the imported amount of GM crops to Korea has reached over 10 million tons and is increasing very rapidly; consequently, the potential environmental impact of GM crops is becoming a big issue in Korea. In Japan, the discovery of imported GM canola plants around ports in 2005 raised awareness of the unintentional release of GM crops. In Korea, GM maize plants were also found in port and feed factory surroundings from 2005 to 2007. It is now necessary to monitor imported GM crops by tracing distribution, transport process for practical environmental risk assessment. Possible gene transfer from GM crops to non-GM crops should also be investigated in the cultivation area and the surroundings as well.
본 연구에서는 유전자 변형 옥수수(GM 옥수수)에 특이한 단크론성 항체를 개발하고 이에 대한 특성을 확인하는 연구를 수행하고자 하였다. 먼저 형질전환 대장균으로부터 PAT 단백질을 발현시킬 수 있는 시스템을 확립하였고, 재조합 PAT 단백질을 대량 생산하여 항원으로 사용하였다. 준비된 항원을 면역한 결과 재조합 PAT 단백질의 항원성은 매우 높은 것으로 확인되었으며, 세포융합과 클로닝을 통해 12 종의 hybridoma를 확립하였고 western blot 결과 10 종의 hybridoma가 재조합 PAT 단백질과 강한 반응성을 나타내었다. 10종의 hybridoma가 생산하는 항체가 실제 GM 옥수수에 반응하는지를 추가의 western blot으로 분석한 결과 2종의 단크론성 항체(PATmAb-7 and PATmAb-12)가 재조합 PAT 단백질뿐만 아니라 실제 GM 옥수수 중 PAT와 반응하는 것으로 확인되었다. 항체를 대량 생산하고 정제한 후 2종의 항체는 SDS-PAGE 상에서 대표적인 항체의 분리패턴(heavy와 light chain)을 나타내었고, 전형적인 $IgG_1$과 ${\kappa}$ type으로 확인되었다. 정제된 단크론성 항체는 특성을 조사한 결과 다른 GMO에서 발현될 수 있는 재조합 단백질과 non-GM 옥수수 추출물에는 반응성이 없고 PAT 단백질에만 특이적으로 반응하는 것을 확인할 수 있었다. PATmAb-7 를 이용한 간접효소면역분석법의 검출한계는 0.3 ng/mL 수준으로 기준의 유전자변형 콩 면역분석법과 비교했을 때 높은 민감도를 나타내었다. 이상의 결과로 볼 때 개발된 2종의 항체(PATmAb-7 and PATmAb-12)는 GM 옥수수에서 발현되는 PAT 단백질에 특이적으로 반응하는 항체로 확인되었고, 2종의 항체를 이용한 면역분석법과 바이오센서의 개발 가능성을 제시할 수 있었다.
In this study, 543 samples of press hams, sausages, processed ground meat and processed cheese acquired from retail markets in Seoul and Gyeonggi province in Korea from 2005 to 2010 were monitored using a one-step multiplex polymerase chain reaction (PCR) method that involves the amplification of specific soya or maize endogenous genes and the amplification of 35S promoter (p35S) and nopaline synthase terminator (tNOS) for GMO detection. Among the 543 samples, 477 samples were amplified for maize and/or soybean endogenous genes. Although one sausage sample collected in 2008 showed amplification of tNOS, the result was assumed to be false positive based on the results from further tests of other sausage samples of the same brand. Our results demonstrate the absence of GM soya and/or maze of livestock products in the Korean market during 2005-2010. In addition, the one-step multiplex PCR using previously constructed primer sets appears to be useful as a screening method for the detection of GMOs in processed livestock products. However, more specific methods should be established and employed to detect the event-specific GM gene for positive reaction samples by screening tests in processed livestock products.
식약처는 유전자변형식품의 사전 안전관리를 위하여 "식품위생법"에 따라 안전성 심사를 거쳐 안전성이 입증된 식품만 수입 유통되도록 의무화하고 있으며, 승인받지 않은 품목은 수입통관단계에서 검사를 실시하여 국내에 유입되지 않도록 관리하고 있다. "유전자변형식품등의 안전성 심사 등에 관한 규정"에 따라 제출된 안전성 자료에 대해 '유전자변형 식품등 안전성 심사위원회'에서 심사하고, 국민 의견을 수렴하여 승인 여부를 결정한다. 또한 안전성 승인이 되었더라도 10년이 경과된 유전자변형식품은 다시 안전성 심사를 하여 안전성을 재확인하고 있다. 우리나라에서는 1999년 안전성심사를 시작하여 2000년에 최초로 유전자변형 콩을 승인하였으며, '19년 4월 현재 안전성 심사를 통해 승인된 유전자변형식품은 총 199건이다(농산물 169건, 미생물 6건, 식품첨가물 24건). 앞으로도 식약처에서는 최초 안전성 심사 뿐 아니라, 승인 후 10년이 경과되는 유전자변형식품 품목에 대한 안전성 재심사를 통해 안전성을 재확인할 계획이며, 기존에 개발된 제초제내성, 해충저항성 유전자변형식품 외에 새로운 특성을 부여한 유전자변형식품의 개발 증가에 따라 이들 품목의 안전성 심사를 위하여 CODEX, OECD 등 국제적인 규제 조화를 바탕으로 심사항목 정비 등 사전안전관리를 강화할 계획이다.
1994년 처음으로 GM 토마토인 Flavr Savr가 시장에 나온 이후, 2010년 현재 140여 품목의 GM식물이 전 세계적으로 상업화되었다. GM식물들에 대한 안전성 승인여부의 확인 및 표시제관리를 위하여 이들 GM식물내로 도입된 삽입유전자의 정보를 이용한 검정방법이 도입되었으며, 또한 도입유전자의 발현된 단백질을 분석하기 위하여 정성 및 정량을 위한 면역학적 방법이 도입되었다. 본 총설에서는 국내 외적으로 개발된 콩, 옥수수, 카놀라, 면화 등의 GM식물에 적용된 multiplex PCR, real-time PCR 방법과 최신 개발 중인 microarray, 나노기술 등을 활용한 방법들을 조사하였다.
Do Yu, Kang;Myung Ho, Lim;Soo In, Sohn;Hyun Jung, Kang;Tae Sung, Park
농업과학연구
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제48권4호
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pp.1051-1065
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2021
Recent times have seen sustained increases in genetically modified (GM) crops not only for cultivation but also for the utility of food and feed worldwide. Domestically, commercial planting and the accidental or unintentional release of living modified (LM) crops into the environment are not approved. Many detection methods had been devised in an effort to realize effective management of the safety of agricultural genetic resources. In order to develop event-specific polymerase chain reaction (PCR) markers for LM crops, we analyzed the genetic information of LM crops. Genetic components introduced into crops are of key importance to provide a basis for the development of detection methods for LM crops. To this end, a total of 18 varieties from four major LM crop species (maize, canola, cotton, and soybeans) were subjected to an analysis. The genetic components included introduced genes, promoters, terminators and selection markers. Thus, if proper monitoring techniques and single or multiplex PCR strategies that rely on selection markers can be established, such an accomplishment can be regarded as a feasible solution for the safe management of staple crop resources.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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