• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권5호
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• pp.407-411
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• 1989

Oxytetracycline 생산균주인 Streptomyces rimosus를 maltose 2%, NH$_4$Cl 0.5%, yeast extract 0.4 %, MGSO$_4$.7$H_2O$ 0.2% 조성의 배지를 배양초기 PH 6.5로 하여 3$0^{\circ}C$, 72시간 진탕배양하여 얻은, 세포외 protease를 유안분획, Sephadex A-50 이온교환, Sephadex G-100 gel 여과를 행하여 정제하였다. 효소의 최적온도는 5$0^{\circ}C$이며, 최적 pH는 8.0이었으며, Co$^{2+}$ 이온에 의해 활성화되며 Hg$^{2+}$, Fe$^{2+}$ 및 EDTA에 의해 저해를 받으며 casein 분자량을 23,600으로 추정하여 구한 Km값은 2.7$\times$$10^{-4}$M이었다.

• 한국식품저장유통학회지
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• 제4권3호
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• pp.301-309
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• 1997

This study was conducted to examine morphological characteristics and the content of cell wall polysaccharides of Brassica campestris var. pekinensis(baechu). First of all, the variety of scientific name and naming of parts of baechu in the literatures of kimchi showed, which will unify marks. So, we propose not so much mid-rib and leaf blade of baechu leaf as white part and green part, respectively. On the other hand, the forms of vessel elements of white part in baechu consist in ring, sclariform and reticulate thickening. The proximate compositions and contents of cell wall polysaccharides of baechu has significant differences between its cultivars. The cell wall pectin from baechu exhibited four peals with molecular weights of 2,000,000, about 100,000 and less than 10,000 by gel filteration chromatography and hemicellulose did two peaks with molecular weights of 2,000,000 and 10,000.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2002년도 생물공학의 동향 (X)
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• pp.445-448
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• 2002

The Pseudomonas fluorescens KCTC 1767, a selected and identified as potential candidate for stereo-specific resolution of rac-ketoprofen ethyl ester, was systematically investigated in order to induce the high level expression and detailed characterization of the expressing enzyme esterase. We cloned the esterase gene from chromosomal DNA of Pseudomonas fluorescens KCTC 1767 by PCR with two synthetic primers that desinged for simple purification. The recombinant esterase from Pseudomonas fluorescens KCTC 1767 exibited a high conversion rate and enantioselectivity to the (S)-ketoprofen ethyl ester as expected. The enzyme was easily purified to homogeniety by using a metal chelating affinity chromatography as a protein with poly histidine taq, and thus obtained 0.6 mg of protein from a 100 mL culture broth in a single step. The purified enzyme was steadily stable at the pH range from 7.0 to 10. The activity was also retained to be about 70% after the preincubation at $40^{\circ}C$ but over $50^{\circ}C$ lost the activity completely. The molecular mass of the esterase was estimated to be about 43 kDa on SDS-PAGE, and an identical result was also shown in gel filteration chromatography. The specific activity was calculated 27 mM/mg-protein/min by using the rac-ketoprofen ethly ester as a substrate.

• KSBB Journal
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• 제14권1호
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• pp.96-102
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• 1999

해양세균 Bacillus cereus ASK202는 특0]적으로 한천의 존재 하에서만 높은 한천분해효소 생산능을 가지는 것으로 확인되었다. 이 균주는 기본배지에서 배양하였올 경우, 그 배양상총액은 21 umts/l의 효소활성을 보였으며, 최적조건하의 발효조를 이용한 배양시에는 생산량은 160.8 umts/l로 기본배지에서보다 효소생산량이 약 7.7배 정도 증가한 결과를 보였다. 해양세균 Bacillus cereus ASK2027가 생산하는 한전분해효소(agarase)에 대하여 treeze drying, DEAE Sepharose CL-6B, Superose 6HR 10/30 column chromatography등에 의해 분리.정제한 결과 최종적으로 31.5 배의 정제도 27.8 %의 수율, 3,780 umt/mg의 specific actIvity을 지닌 정제된 효소를 얻을 수 있었다. 또한 HPLC상에서 정제된 효소가 90,000 daltons의 분자량을 지닌 단백질임을 확인하였다. 정제된 한천분해효소의 최적 pH 및 온도는 각각 6.0과 $40^{\circ}C$. 였으며, pH 5.0 ~ 10.0 및 $30^{\circ}C$에서 장기 보존하였을 경우 효소활성이 안정적으로 유지 됨을 확인하였다. 또한 정제된 한천분해효소 용액은 $Zn(NO_3)_2$의 첨가에 의해 약 16배정도 효소활성의 상승효과를 가져 왔으며, $CuSO_4,\; SnCl_2$에 대해서는 강한 저해효과를 나타내었다. 정제효소에 대한 기질특이성을 조사한 결과, agar와 agarose에 대해서만 특이적인 분해능을 나타내었으며, 그 밖의 polysaccharides에 대해서는 전혀 분해능을 보이지 않았다. 한편 정제된 한친분해효소의 Km 및 Vmax 값은 각각 $2.4mg/m\ell$와 $13.6 mg/m\ell$로 확인되 었다.

• 한국수산과학회지
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• 제28권2호
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• pp.227-236
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• 1995

국내산 갈조류로부터 생리 기능성이 우수한 수용성 식이섬유 소재를 개발하기 위한 기초자료를 얻기위해 다시마와 미역(엽상체와 포자엽 각각)으로부터 fucoidan을 추출, 정제하여 그 특성을 조사하였다 Fucoidan의 추출 조건은 pH 2.0의 산성 추출액으로 $65^{\circ}C$I에서 1시간 씩 3회 추출을 하였고 cetylpyridinium chloride를 사용하여 부분 정제하였다. 부분 정제 fucoidan의 수율은 다시마 $2.71\%$, 미역포자엽 $6.65\%$, 미역 엽상체$0.40\%$였다. 특히 미역포자엽의 수율이 가장 높은 반면에 미역 엽상체는 가장 낮아 부위에 따른 차이가 매우 큼을 알 수 있었다. DEAE-Sephadex A-25 이온 교환 칼럼으로 부분 정제 fucoidan을 분획한 결과 다시마, 미역포자엽 모두 3종의 fraction으로 분획되었고 각 fraction은 전기 영동상에서 2종 이상의 band가 검출되어 불균일함을 알 수 있었다 이온 교환 칼럼으로 분획한 주fraction을 다시 알콜 분별 침전법으로 재분획한 결과 다시마와 미역포자엽은 에탄올농도 $60-70\%$에서 침전된 fraction이 cellulose acetate 전기 영동 및 gel filteration chromatography상에서 균일성을 나타내었다. 균일하게 정제된 fucoidan의 fucose : galactose : 황산기의 mole 조성비는 다시마, 미역포자엽이 각각 1 : 0.31 : 2.43,1 : 0.87 : 1.99였다. 분자량은 다시마가 31,000, 미역포자엽이 38,000으로 비교적 적었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제16권4호
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• pp.259-264
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• 1988

Pseudomonas sp.로 동정된 토양분리균의 inulinase를 ammonium sulfate 분획, DEAE Sephadex A-50 Chromatography, Sephadex G 100 및 Sephadex G200 gel여과 등의 과정을 거쳐 정제 한 결과 inulinase PI과 PII의 두 isoenzyme으로 분리되었으며 각각 약 24배와 17배 정제되어 단일단백질로 분리되었다. PI, PII 두 isoenzyme은 다같이 sucrose, raffinose 및 levan은 분해하지 못하고 inulin만을 endo-type로 분해 절단하는 $\beta$-2,1-fructanfructano hydrolase(EC 3.2.1.7)임이 밝혀졌다. 효소활성 최적온도는 두 효소가 같은데 비해 (55$^{\circ}C$), 최적 pH는 PI이 pH5.5, PII가 pH6.0으로 약간의 차이를 보였다. Inulin에 대한 Km값은 PI ; 2$\times$$10^{-3}$M, PII : 5$\times$$10^{-3}$M로써 PI효소가 PII보다 약간 높은 친화력을 보였다.

• The Korean Journal of Ecology
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• 제26권5호
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• pp.263-266
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• 2003

This research investigated the process of removing cadmium and tested the detoxification mechanism of the cadmium-binding peptide (Cd-BP) from Rumex crispus. Phytochelatin-like cadmium-binding peptide (PC-Cd-BP) of Rumex crispus was purified and identified. Rumex crispus was exposed to 4.3 mg Cd/L for seven days. Heat-treated supernatant fraction taken by root tissues showed traces of PC-Cd-BP An analysis of the material through Gel-filteration chromatography on the Sephadex G-75 column showed two symmetrical Cd-BP peaks. The major peak with the smaller molecular weight was further purified by $C_{18}$ reverse-phase HPLC to produce apparent homogeneity. The amino acid composition of Cd-BP from Rumex crispus included cysteine (22.6%), glutamate and glutamate acid (20%), and glycine (12%). It was similar the amino acid composition of most PC. The molecular weight of the purified peptide was determined at 568-706 Da by MALDI-TOF MS. Therefore, the Cd-BP of Rumex crispus was PC-Cd-BP consisting of isopeptides.

• KSBB Journal
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• 제9권1호
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• pp.55-62
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• 1994

Aspergillus niger 균체로부터 황산암모늄 분별침전, 이온교환 크로마토그래피, 한외여과, 소수성 크로마토그래피 과정을 거쳐 glucose oxidase( EC 1.1. 3.4)를 순수 정제하였다. 최종 정제과정인 소수성 크로마토그래퍼에 의해 소수성은 다르나 glucose oxidase의 활성을 갖는 A, B fraction이 얻어졌고, 그의 비활성도는 각각 2,191, 1,273units/mg이었다. A와 B는 분자량 78,000의 당단백질임이 확인되었으나, HPLC 겔 여과로 측정한 분자량, 최대 흡수 파장, 등전점 등에 차이를 보였다. 효소 A는 $\beta$-D-glucose를 특이적으로 산화하였고, 촉매 활성에 대한 최적 온도 는 $30^{\circ}C$, 최적 pH는 3.5이었으며, SDS에 대하여 비교적 강한 저항성을 나타내었고, 촉매 기능은 10mM $Hg^{2+}$에 의해 급격히 억제되었다. 화학 수식 실험 결과 cysteine/ cystine중의 SH기가 glucose oxidase의 활성에 관여하고 있음이 시사되었다.

• 한국식품과학회지
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• 제22권4호
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• pp.461-465
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• 1990

양조간장 중의 항산화료력을 가진 물질을 분리하고 그 특성을 알기위하여 Sephadex G-10, 50, 100을 이용하여 양조간장을 겔여과하고 각 획분에 대한 항산화성과 관련된 특성을 측정하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 양조간장을 Sephadex G-10에서 분획한 결과 갈색도가 가장 높은 멜라노이딘 획분(MF-I)에서 항산화효력이 가장 컸고, 이 부분은 질소를 함유하고 있었으며 환원력이 매우 큰 물질이었다. Sephadex G-10에서 항산화 효력이 가장 큰 MF-I을 동결 건조하여 Sephadex G-50에서 재분획 한 결과, 갈색물질은 광범위한 범위에서 분획되었고 저분자의 멜라노이딘 부분(MF-II)에서 항산화성 및 환원력이 가장 크게 나타났다. 이 MF-II 획분을 다시 Sephadex G-100에서 재분획하여 항산화효력이 비교적 크고 환원력이 매우 큰 한 획분(MF-III)을 분리하였으나 환원력을 제외한 갈색도 및 항산화력은 상대적으로 낮았다. 그리고 양조간장의 항산화성 관련 물질의 구조적 특성을 알아보기 위해 분리한 각 획분의 UV-VIS 및 IR spectra를 측정한 결과 항산화성이 큰 각 획분(MF-I, MF-II 및 MF-III)의 UV-VIS spectra는 $260{\sim}320\;nm$에서 완만한 peak를 나타내는 전형적인 멜라노이딘의 특성을 나타내었다. 그리고 IR spectra의 경우 특징적인 OH기 및 amine기 구조를 지니고 있었고 이들이 항산화성을 갖는 기능기로 추정되었다.

• 한국균학회지
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• 제27권2호통권89호
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• pp.100-106
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• 1999

Agrocybe cylindracea의 배양방법별 균사체 및 다당류 생산수율비교 실험에서는 모두 진탕배양이 효과적이었다. 다당류의 정제는 조단백다당류를 이용하여 DEAE-cellulose column에 의한 1차 정제를 행하였고, 최종으로 Sepharose 2B를 이용한 2차 정제를 실시하여 최종적으로 균사체내다당류(ACIPDG, ACIPAG)와 균사체외다당류(ACEPDG, ACEPAG)를 얻었다. ACEPDG는 총당 75.8%, ACEPAG는 총당 65.4%를 함유하였으며, ACIPDG는 총당 89.2%, ACIPAG는 총당 54.2%의 조성을 보였다. 다당류 분획물들의 분자량을 측정한 결과, 모두 10만이 넘는 거대분자로 ACEPDG 300KDa에서 ACIPAG 600KDa까지 나타났다. 다당류의 조성을 HPLC로 분석한 결과, ACEPDG분획물은 glucose, inositol이 검출되었으며 ACIPDG, ACEPAG, ACIPAG 분획물은 glucose, fructose, inositol이 검출되었다.