• 분석과학
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• 제20권5호
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• pp.393-399
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• 2007

본 연구에서는 갈락토오즈의 현장검사(point-of-care testing, POCT)를 위한 일회용 갈락토오즈 바이오센서 개발에 관해 논하고자 한다. Galactose oxidase(GAO)와 horseradish peroxidase(HRP) 두 효소를 0.05 M phosphate 완충용액에 용해시킨 후 스크린 프린팅(screen printing) 방법으로 제작한 전극위에 고정화하여 센서를 제작하였다. 이렇게 제작된 센서를 이용하여 $100{\mu}L$ 이하의 시료를 이용하여 갈락토오즈를 90초 이내에 측정하였다. 전극에서의 반응을 최적화하기 위하여 GAO 효소가 가장 우수한 활성을 나타내는 pH 7.0 완충용액을 이용하여 GAO와 HRP 효소를 1:1로 고정화하고, 1mM 1,1'-ferrocene-dimethanol 전자전달매개체를 도입하여 센서를 제작하였다. 유리 탄소전극의 경우 100 mV (vs Ag/AgCl), 스크린 프린트된 전극의 경우 -100 mV(vs Ag/AgCl)의 인가전압을 적용하였다. 본 연구에 의해 개발된 센서는 $0{\sim}400{\mu}M$의 갈락토오즈 농도에 대하여 우수한 직선성($r^2$ = 0.997, S/N = 3)을 나타내었고 낮은 인가전압을 적용하여 갈락토오즈를 측정하므로, ascorbic acid, uric acid 그리고 acetaminophen과 같은 방해물질의 영향을 최소화 할 수 있었다. 또한 갈락토오즈 표준 용액에 대하여 만족할 만한 재현성을 나타내었다(CV = 5%).

• KSBB Journal
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• 제11권3호
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• pp.270-275
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• 1996

재조합 효모를 이용한 포도당산화효소의 대량생산 에 관한 기초연구를 실시하였다. 분비신호를 포함한 포도당산화효소 유전자는 Aspergillus niger로부터 polymerase chain reaction을 이용하여 클로닝한후 G GALl과 GALlO promoter를 이용하여 s. cerevi siae strain 2805에서 말현시킨 결과 GALl promoter를 사용한 형질전환체(yGOD1-l)에서 높은 효율 의 효소생성을 나타냈다. 플라스크 배양 결과 1% galactose를 포함한 YEP 배 지 에셔 최고 6 IU/mL 의 포도당산화효소를 생산하였으며 재조합 포도당산 화효소의 세포내 위치를 비교한 결과 A. niger와는 달리 발현된 효소가 80% 이상 배지로 분비됨을 확인하였다. 재조합 포도당산화효소의 열 안정성을 측정한 결과 표준품과 비교하여 $50^{\circ}C$까지 큰 차이를 보이지 않고 높은 활성을 유지하는 것으로 확인되었다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제22권6호
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• pp.792-796
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• 1993

The synthesis alcohol-oxidase[EC 1.1.3.13] was investigated in the yeasts, Candida boidinii CBS 8106 and C. boidinii CBS 2428, during growth on different carbon sources. Alcohol-oxidase was undetectable in all strains submitted to the test in the mineral salts medium containing 1.0% glucose, but its production was rapidly increased when the carbon source was changed glucose to 1.0% methanol after 24hrs of incubation. When cells were grown on the various carbon sources (glucose, xylose, lactose, glycerol, galactose, saccharose, sorbose, lactic acid or acetic acid), the alcohol-oxidase activity was undetected. These carbon sources together with methanol yielded far better synthesis of alcohol-oxidase than in the case of carbon sources alone. Alcohol-oxidase was active towards alcohol of shorter alkyl-chain length than C5 and unsaturated alcohols. Its affinity for these alcohols decreased with the increasing length of the alkyl-chain. The apparent Km values for the methanol of Candida boidinii CBS 8106 and C. boidinii CBS 2428 were 1.96 and 1.21, respestively.

• Journal of Electrochemical Science and Technology
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• 제11권3호
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• pp.310-317
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• 2020

A development of disposable strip-type galactose sensor for point-of-care testing (POCT) was studied, which was constructed using screen-printed carbon electrodes. Galactose levels were determined by the redox reaction of galactose oxidase in the presence of potassium ferricyanide as an electron transfer mediator in a small sample volume (i.e., less than 1 µL). The optimal performance of biosensor was systematically designated by varying applied potential, operating pH, mediator concentration, and amount of enzyme on the electrode. The sensor system was identified as a highly active for the galactose measurement in terms of the sensitivity (slope = 4.76 ± 0.05 nA/µM) with high sensor-to-sensor reproducibility, the linearity (R² = 0.9915 in galactose concentration range from 0 to 400 µM), and response time (t_95% = <17 s). A lower applied potential (i.e., 0.25 V vs. Ag/AgCl) allowed to minimize interference from readily oxidizable metabolites such as ascorbic acid, acetaminophen, uric acid, and acetoacetic acid. The proposed galactose sensor represents a promising system with advantage for use in POCT.

• 한국식품영양과학회지
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• 제18권4호
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• pp.435-443
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• 1989

Pichia pastoris의 배양조건과 배지의 탄소원에 따른 alcohol-oxidase의 생성기능과 alcohol-oxidase의 기질특이성을 실험하기 위하여 P. pastoris CBS 2612와 P. pastoris CBM 10의 2균주에 대하여 실험하였다. 배양조건에 따른 효소생성은 glucose를 탄소원으로 첨가한 mineral salt medium에서 균체를 정상기까지 배양하여 methanol이 함유된 배지에서 재배양하는 2단계 배양법의 경우가 균체를 직접 methanol배지에 배양한 경우보다 효율적이었으며 생성된 총효소량도 전자의 경우가 후자에 비해 약 1.7배 정도 많았다. 다음 탄소원에 따른 효소생성능을 비교하였다. 먼저 직쇄alcohol을 탄소원으로 사용한 경우 methanol을 제외한 ethanol, propanol, butanol 그리고 pentanol에서는 효소가 생성되지 않았고 또한 이 직쇄alcohol을 methanol과 혼합한 경우에도 극미량의 생성에 그쳤다. 여러가지 탄소화합물(glucose, xylose, lactose, glycerol, galactose, saccharose, sorbose, lactic acid, acetic acid)을 탄소원으로 사용하면 methanol에 의해 생성된 효소량보다 훨씬 작았으나 이들을 methanol과 혼합 사용하면 효소생성량은 급격히 증가하였고, 특히 xylose, lactose 그리고 lactic acid의 경우는 methanol 단독 사용시보다 오히려 다량 생성되었다. 시험 2균주 중에서도 어떤 경우에서든지 P. pastoris CBS 2612가 alcohol-oxidase 생성능이 더 좋은 것으로 나타났다. 효소의 기질특이성은 효소를 기질에 반응시킬때는 교반을, 그리고 효소 활성측정은 alcohol-oxidase가 methanol을 분해하여 생성한 formaldehyde를 직접 정량 하였을 경우 탄소쇄가 7개 이하인 직쇄alcohols과 불포화alcohols, 그리고 일부2급alcohols(isobutyl alcohol, isoamyl alcohol)에도 특이성이 있었다.

• 한국동물학회지
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• 제26권3호
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• pp.155-170
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• 1983

溫熱處理에 대해서 細胞가 反應하여 適應하는 過程을 細胞膜水準에서 연구하기 위해서 培養中인 纖維芽細胞性 腫瘍細胞를 이용하여 細胞週期, 細胞密度 및 溫熱處理에 따른 膜表面蛋白質의 變化를 lactoperoxidase를 이용한 iodination과 galactose oxidase를 이용한 tritiation 方法을 서서 分析하였다. 細胞週期와 細胞密度에 따라 膜表面蛋白質은 定量的 變化를 보였는데 $G_1$期에서는 LETS 蛋白質과 高分子蛋白質이 크게 增加하였고 細胞密度의 증가에 따라서는 125K 蛋白質의 增加와 130K 및 100K 蛋白質의 減少가 特異하게 나타났다. 溫熱處理후의 시간경과에 따른 변화를 보면 處理직후 80K 이상의 蛋白質은 모두 사라지고, 24시간 지나면 70K 蛋白質이 현저한 增加를 보였지만 48시간이 경과하면 다시 減少하고 高分子蛋白質들이 原狀으로 回復되었다. 또한, 溫度를 $39^\\circ\\sim45^\\circC$까지 증가시켜 보았을 때 70K 蛋白質이 $41^\\circC$에서 가장 큰 폭으로 增加하는 特異한 현상이 관찰되었다. 아울러 이 70K 단백질은 trypsin을 처리하면 사라졌는데 galactose oxidase로 tritiation하였을때도 iodination하였을 때와 동일한 變化樣相을 보였다. 이러한 결과와 細胞質蛋白質과 比較한 缺課로 미루어 볼 때, 70K 蛋白質은 膜表面蛋白質이며 糖蛋白質이고 또한 HSP 70과 같은 蛋白質인 것으로 推定되었다. 이 蛋白質의 細胞膜에 있어서의 가능한 機能과 腫瘍細胞가 正常細胞에 비해서 溫熱處理에 敏感한 原因등에 관해서 考察하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권5호
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• pp.461-467
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• 1989

Hansenula polymoypha의 배양조건과 배지의 탄소원에 따른 alcohol-oxidase의 생성능을 비교하기 위하여 H. polymorpha CBS 4732, H. polymorpha CBM 11, 그리고 H. polymorpha Cooney의 3균주에 대하여 실험하였다. 배양조건에 따른 효소생성은 glucose를 탄소원으로 첨가한 mineral salt medium에서 균체를 정상기까지 배양하여 methanol이 함유된 배지에서 재배양하는 2단계 배양법의 경우가 균체를 직접 methanol 배지에 배양한 경우보다 효율적이었으며 생성된 총효소량은 전자의 경우가 후자에 비해 1.9배정도 많았다. 다음 탄소원에 따른 효소생성능을 비교하였다. 먼저 직쇄 alcohol을 탄소원으로 사용한 경우 mothanol을 제외한 ethanol, propanol, butanoL, 그리고 pentanol에서는 효소가 생성되지 않았고 또한 이 직쇄 alcohol을 methanol과 혼합한 경우에도 극미량의 생성에 그쳤다. 여러 가지 탄소화합물 (glucose, xylose, lactose, glycerol, galactose, saccharose, sorbose, tactic acid acetic acid)을 탄소원으로 사용하면 methanol에 의해 생성된 효소량의 1/10 정도 생성되었고 이들을 methanol과 혼합사용하면 효소생성량은 급격히 증가하였고, 특히 lactose와 tactic acid의 경 우는 methanol 단독사용시 보다 오히려 다량 생성되었다. 시험 3균주 중에서는 어떤 경우에서든지 H. polymorpha CBS 4732가 alcohol-oxldase 생성능이 가장 좋은 것으로 나타났다.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2005년도 생물공학의 동향(XVI)
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• pp.471-471
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• 2005

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2005년도 생물공학의 동향(XVII)
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• pp.765-766
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• 2005

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제22권4호
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• pp.373-381
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• 1994

An actinomycete strain, HSL-613 was isolated -from soil and identified by International Streptomyces Project (ISP) and chemotaxonomic methods. The spore chain of the strain HSL-613 appears in a spiral shape, and its spores are spherical shape with smooth surface. The cell wall contains LL-diaminopimelic acid (DAP). Menaquinone MK-9 (H$_{6}$, H$_{8}$) and iso- and anteiso-branched fatty acids were detected from whole cell extract. Sugars identified from whole cell extract include galactose, glucose, mannose and ribose, which are distinct from general sugar patterns of Streptomyces. Average G+C content in the chromosome is 59%. 5S rRNA of HSL-613 consists of 120 nucleotides as determined by comparing with that of a type strain Streptomyces griseus subsp. KCTC 9080. Through morphological, physiological, and chemical characterization, HSL-613 was identified and named as Streptomyces sp. HSL-613.