핵전이 기술을 이용하여 Aspergillus nidulans에서의 종내잡종들을 얻어내고 이들의 섬유질 분해효소계 활성 및 핵형분석을 통하여 이 방법에 의한 균주개량의 가능성을 조사하였다. A. nidulans 야생균주와 영양요구성 돌연변이주 FGSC 475로부터 추출한 핵을 FGSC 514의 원형질체에 각각 전이시킨 결과 4.8% 및 10.1%의 잡종형성율을 나타냄으로써, 0.6%의 융합빈도를 보인 원형질체 융합법보다 핵전이법이 잡종형성에 더 효과적임을 알 수 있었다. 또한 형성된 잡종들에서 cellulase및 xylanase system과 mannanase 중 일부분의 효소성분의 활성이 향상된 균주가 분리되어 이 방법에 의한 우수 섬유질분해 균주개발의 가능성을 확인할 수 있었으며, 형성된 잡종의 핵형은 이배체 또는 이수체로 분석되었다.
Petunia hybrida와 Nicotiana sanderae의 원형질체를 융합하여 체세포잡종식물을 얻고자 융합산물의 배양에 의해 얻은 개체들에 대해 유전분석을 하였다. 재분화 개체중 융합된 것으로 인정되는 개체의 peroxidase pattern은 두 모본의 band를 모두 가진 개체(A-D patterns)에서 나타난 band중 p. hybrida에서 나타난 band 이외에 최상부에 1개의 band가 추가되었는데 이는 융합을 판별할 수 이는 중요한 marker 로서 가능성이 있으며, aspartate aminotransferase isoenzyme pattern은 두 모본의 양상이 모두 나타나거나 N. sanderae의 상부 band가 소실된 개체도 있었다. 염색체 검경에서 P.hybrida는 2n=14, M sanderae는 2n=18개로 나타났으며, 동위효소검정에서 체세포 잡종일 것으로 추정되는 개체들은 2n=32-36으로 나타났다. 표현형 관찰에서 체세포잡종으로 인정되는 개체의 형태적 특징은 두 모본의 중간형태를 나타내었다.
Lymphocytes that secrete antibodies can be made immortal by fusing them with myeloma tumor cells (cell fusion) and cloning the hybrids (hybridomas). Each clone is a long-term source of substantial quantities of a single highly specific antibody (monoclona
원형질체 융합으로 주름버섯목 느타리버섯과 민주름버섯목 잔나비걸상버섯과의 이목간 체세포잡종을 36균주 얻어 꺽쇠연결체 clamp connections있는 2균주와 꺽쇠연결체 없는 3균주의 자실체를 형성하였다. 꺽쇠연결체 없는 융합주는 한천배지나 액체배지에서는 자실체를 얻을 수 없었다. 그러나 톱밥배지에서 균사가 완전히 성장한 후 일정한 광과 온도를 유지한 결과 꺽쇠연결체가 있는 균사가 새로이 성장하였으며 거의 완전하게 다시 성장한 후 원기가 유도되고 자실체가 성숙하였다. 버섯자실체 특성은 느타리버섯과 유사하였으며, 갓 색택은 느타리와는 다소 다르게 나타났다. 3균주의 담자포자로 유전형질의 분리와 유전자재조합을 조사한 결과 꺽쇠연결체 있는 2균주는 비정상적인 분리 현상을 보였는데, 양친에 없는 ane, rib, ane rib 표지를 가진 것이 나타났다. 3종류의 random primer를 이용하여 핵산 연쇄 중합반응 polymerase chain reaction(PCR)에 의한 4개 체세포잡종의 염색체 DNA의 다형화현상을 조사한 결과 느타리친과 유사한 양상을 가졌으나 비양친의 밴드를 나타내었으며 primer #87, #125의 1.2kbp, 0.6kbp에서 각각 뚜렷하게 구분되었다. 4개 체세포잡종의 미토콘드리아 DNA의 제한효소 EcoR1과 HindIII의 절단결과 2균주는 느타리와 동일하였으며 2균주는 양친과 다른 양상을 나타내었다. 원형질체 융합주, 융합주 자실체로부터의 조직배양주, 융합주의 담자포자 발아주, 양친주를 포함하여 총16균주를 등전점 전기영동으로 동위효소 esterase를 분석한 결과 융합주 6균주중 5균주는 느타리와 유사하였으며 1균주는 양친과 전혀 다른 새로운 밴드양상으로 이들 모두 양친과 뚜렷이 구분되었다. 융합주와 자실체 조직배양주는 밴드양상이 거의 유사하였으나 $F^2$는 다소 차이가 나타났다.
Cellulose utilising hybrids between Cellulomonas fimi and Bacillus pumilus were isolated after PEG mediated protoplast fusion. 33% (w/v) PEG #6, 000 and 50mM $Ca^{++}$were optimum concentration. The intergeneric fusion frequency was 3.2$\times$10$^{-7}$ xtracellular CMCase and $\beta$-glucosidase activities were detected from one hydrid unlike only CMCase was detected from Cellulomonas fimi.
Stable intergeneric hybrids involving allodiploid were obtained through protoplast fusion and nuclear transfer between the auxotrophic mutans of two basidiomycetes. Ganoderma lucidum and Corolus versicolor.
에탄올 발효능이 우수한 Saccharomyces에 속하는 4 균주를 가지고 여러 조합의 mating-pair 또는 fusion-pair를 만들고 이들 pair들로부터 만들어진 hybrid주들의 에탄올 생성능과 생존능을 통계적으로 분석한 결과, 에탄올 생성능에서는 차이가 없었으나, 생존능의 경우는 [S. kluveri $khl{\times}S.$ cerevisiae cp3]의 균주조합이 가장 우수한 hybrid를 낼 수 있는 것으로 나타났다. 실제로 에탄올 생성능과 잔당, 효율, 생존능에서 두루 우수한 균주는 [S. kluveri $khl{\times}S$ cerevisiae cp3] 조합에서 얻어진 융합주 clone No. 3가 에탄올 생성능 10.11%(w/v) 또는 12.81%(v/v), 잔당 3.53%(w/v), 생존능 62.65%, 발효 효율 92.2%로서 가장 발효능과 생존능이 우수한 균주로 선정되었다.
For breeding of a new rootstock for eggplant production, somatic hybrids between two species, Solanum integrifolium and S. sanitwongsei were obtained through protoplast fusion. The former species has been commonly used for rootstock for eggplant production in Japan. Eggplants on these rootstocks are more productive than ungrafted plants, but are susceptible to bacterial wilt caused Ralstonia solanacearum. While the latter species is resistant, the growth of eggplants on this rootstock is rather slow and low yield. Protoplast of both species were isolated from cotyledons, and inactivated with iodoacetamide or UV-irradiation, then fused electrically. The fused products were then cultured. Regenerated plantlets were then transplanted on soil then maintained in a green house. The plants were classified into four groups. Those in the first group showed morphological characters intermediate of the parentalspecies. The plants bore fruit with viable seeds. The plants showed a chromosome number of 2n=48, the sum of those of the parental species, and are suggested to be symmetric fusion products. While plants in the other groupswas less vigorous and showed chromosome number 2n= 68 to 72 suggesting asymmetric fusion products by genomic in situ hybridization(GISH). Isozyme pattern of shikimate dehydrogenase (SKDH; EC 1.1.1.25), isocitrate dehydrogenase (IDH; EC 1.1.1.41) and phosphoglucomutase (PGM; EC 2.7.5.1) showed that 24 regenerated plants in three groups were somatic hybrids. Analysis of random amplified polymorphic DNA (RAPD) showed that 43 S. integrifolium-specific and 57 S. sanitwongsei-specific bands were all found in 24 plants. Both somatic hybrids and its S1 plants were found to be resistant to bacterial wilt, and eggplant grafted these plants using for rootstocks were more productive than grafted mother plants. Now, S1 progenies are used for commercial eggplant production in Osaka Prefecture.
원형질체 융합에 의한 화합성 및 불화합성 종간 체세포 잡종을 얻었다. 화합성 종간인 Pleurotus ostreatus와 P. florida의 융합체는 이질핵체(heterokaryon)를 형성하였고, 불화합성 종간인 P. cornucopiae + P. florida, P. ostreatus + Ganoderma applanatum, P. florida + Ganoderma lucidum, 그리고 P. ostreatus + Flammulina velutipes는 합핵체(synkaryon)를 형성하였다. 이질이핵체는 동일한 양상의 자실체를 형성하는데 비해 합핵체는 유사분열상의 꺽쇠연결체 형성, 한쪽 친과 유사한 자실체 형성, 비정상적 유전형질 분리 및 유전자재조합 현상을 나타내었다. 화합성 및 불화합성 계통간 융합체의 RAPD 분석결과 화합성 종간 융합체는 동일한 DNA 패턴을 나타내었고, 불화합성 종간 융합체는 한쪽 친과 유사한 DNA 양상이면서 비양친 DNA 밴드도 형성하였다. 합핵체의 패턴은 microgenome insertion type과 macrogenome insertion type으로 구분되었다. 합핵체의 자실체 발생은 융합 모균주 양친의 자가임성에 의존하는데 이는 느타리의 동형핵체 자가임성과 유사한 양상이었고, 교배형 전환과 관련이 있는 것으로 사료된다. 여기서는 이러한 관점에서 논할 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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