• 한국동물번식학회:학술대회논문집
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• 한국동물번식학회 2002년도 춘계학술발표대회 발표논문초록집
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• pp.52-52
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• 2002

The objective of this study was to determine the developmental competence of in vitro matured bovine oocytes after intracytoplasmic sperm injection(ICSI) with frozen-thawed epididymal spermatozoa. The ovaries were obtained from slaughtered Korean native cows. Oocytes matured in vitro for 24 hrs were fertilized by ICSI with frozen-thawed epididymal spermatozoa. After ICSI, one group of oocytes was activated with 7% ethanol for 5 min, and second group was not activated. The follicular oocytes were cultured in TCM-199 medium containing hormones and 10% FCS for 24-30 hrs in a incubator with 5% CO₂ in air at 38.5℃. (omitted)

• 한국수정란이식학회지
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• 제17권1호
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• pp.55-59
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• 2002

ICSI시 동결 융해한 부고환 정자의 이용 가능성을 알아보고자 난자의 배양시 체외성숙율과 활성화 처리를 한 난자와 동결 융해한 부고환 정자로 ICSI시 체외발생율을 조사하였으며, 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 난포란을 회수 후 24시간 배양하였을 때 배양 시간에 따른 GV, MI, M II로의 체외성숙율은 각각 7/60(11.7%), 5/60(8.3%), 48/60(80.0%)였고 30시간 배양 시간에 따른 GV, MI, M II로의 체외성숙율은 각각 3/60(5.0%), 4/60(6.7%), 53/60(88.3%)였고 퇴화란은 각각 2/60(3.3%)와 1/60(1.7%)였다. 2. 동결 융해한 부고환 정자를 이용하여 활성화 처리를 한 난자에 ICSI를 하였을 때 상실배와 배반포로의 체외발생율은 각각 12/46(26.1%), 22/46 (47.8%)로서 비활성화처리 난자군 5/39 (12.8%), 10/39(25.6%)에 비해 높은 체외발생율을 나타냈다. 3. 활성화 처리를 한 난자에 신선정자, 부고환 정자 및 동결 융해한 부고환 정자로 ICSI시 체외 발생율은 각각 24/45(53.3%), 15/40(37.50%), l1/43 (25.6%)로서 신선정자에 비해 동결 융해한 부고환 정자처리군은 체외발생율은 약간 낮았지만 이용 가능성이 있음을 확인하였다.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제28권3호
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• pp.155-159
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• 2004

This study was carried out to investigate the general characteristics and viability of sperm after freezing and thawing and the pregnancy rates after artificial insemination with thawed semen. The rates of viable sperm after slow and rapid freezing were 87.4±3.85% and 70.8±4.45%, respectively which were significantly lower than that of fresh semen control (91.7±3.45%). The mean concentration of epididymal sperm after dilution in 1.0 ml saline and. 3.0 ml extender in a various concentrations of cryoprotectants was 124.5±48.3 x 10/sup 6/ (range of 45 x 10/sup 6/ to 280 X 10/sup 6/ /ml). There was a significant difference not in the percentage of acrosome-reacted sperm, but in the percentage of capacitated sperm, between fresh and frozen-thawed epididymal semen. When frozen-thawed after diluting with tris-buffer extender containing glycerol, DMSO and ethylene glycol with concentration of 2 to 6%, the rates of epididymal sperm exposed to different cryoprotectants ranged from 14.4±4.7% to 20.7±5.8%, 17.8±5.2% to 36.5±4.9%, and 14.4±4.6% to 18.5±5.3%, respectively which were lower compare to fresh semen control. The pregnancy rate after artificial insemination with frozen semen was 70.6%, whereas that with fresh semen was 90.0% in dogs with naturally induced estrus.

• 한국수정란이식학회지
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• 제30권4호
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• pp.271-276
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• 2015

The aim of the study was to investigate the ability of sperm derived from the epididymis in regard to sperm motility, sperm penetration to oocyte and subsequent development of the embryo. Frozen-thawed sperm from epididymis showed similar percentage of motile sperm (VSL ${\geq}25{\mu}m/sec$) as compared to that of commercial sperm (control). Sperm penetration of frozen-thawed epididymal and commercial sperm was not significantly different. Moreover, cleavage and blastocyst rates were similar in both epididymal and control. Sperm derived from the epididymis also showed fertilizability and subsequent embryonic development.

• 한국가축번식학회지
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• 제21권3호
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• pp.247-253
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• 1997

본 연구는 돼지난포란의 체외수정시 정소상체 미부정자의 형태학적 정상정자 비율에 따른 수정율과 배발달율을 조사하고자 실시하였다. 그 결과는 다음과 같다. 1. 정소상체 미부정자의 형태학적 정상정자 비율을 10%, 10~30%, 50%로 구분하여 수정율과 배발달율을 조사하였던 바, 50%에서 각각 64%, 26%로 나타나 다른 두 군보다 현저히 높게 나타났다 ( 10%: 27%, 6%, 10~30%: 36%, 5%) (p<0.01). 2. 50% 이상의 정상정자를 가진 정소상체 미부정자를 100% (5$\times$105 cells/ml)로 조정하여 수정하였던 바, 정소상체 미부정자군의 수정율과 배발달율 (63%, 27%)은 동결 융해된 사출정자군 (56%, 35%)과 유사한 결과를 나타냈다. 3. 또한, 정소상체 미부정자군에서 난자와 정자의 비율 (1:6000, 1:6650, 1:7700, 1:10000)에 따라 수정률과 배발달율을 조사하였던 바, 난자당 정상정자 비율이 1:6000 (68%, 32%), 1:6650 (89%, 31%)일 때 가장 높은 수정율과 배발달율을 나타내었다. 따라서, 정소상체 미부정자의 형태학적 정상정자 비율이 50%일 때, 동결 융해된 사출정자와 유사한 배발달을 얻을 수 있으며, 이러한 결과로 미루어 볼 때, 정소상체 미부정자를 체외수정에 사용함에 있어서 정자의 형태학적 평가가 선행되어진다면 더욱더 효과적인 배발달을 유기할 수 있을 것으로 사료된다.

• 한국가축번식학회지
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• 제21권3호
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• pp.239-246
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• 1997

본 연구는 돼지 난포란의 체외수정시 정소상체 미부정자의 형태학적 정상정자 비율에 따른 수정능의 차이를 조사하기 위하여 실시하였다. 그 결과는 다음과 같다. 1. 정소상체 미부로부터 회수된 전체의 정자중 형태학적 정상정자의 비율에 따른 ( 10%, 10~30%, 50%) 정자침입율과 다정자침입, 전핵형성율 그리고 난자에 침입한 평균 정자수를 조사하였던바, 50%의 정자침입율과 다정자침입은 82.4%와 87.4%로 10% (29.7%, 22.6%)와 10~30% (20.3%, 37.0%)보다 유의하게 높게 나타났다 (p<0.01). 또한, 공시된 난자의 전핵형성율도 50%이상의 형태학적 정상정자를 가진 실험군에서 유의하게 높게 나타났다(p<0.01). 2. 50% 이상의 정상정자를 가진 정소상체 미부정자를 100% (5$\times$105 cells/ml)로 조정하여 수정시킨 후 그 결과를 동결 융해된 사출정자와 비교하였던 바, 다정자침입과 전핵형성율은 정소상체 미부정자 (86.7%, 35.1%)와 동결 융해된 사출정자 (86.0%, 39.4%)간에 차이를 나타내지 않았으나, 정자침입율은 정소상체 미부정자가 79.7%로 동결 융해된 사출정자의 95.5%에 비해 유의하게 낮게 나타났다(p<0.01) 3. 또한, 정소상체 미부정자군에서 난자와 정자의 비율 (1:6000, 1:6650, 1:7700, 1:10000)에 따라 정자침입율과 다정자침입 그리고 전핵형성의 차이를 조사하였던 바, 수정시 난자당 정자의 수가 증가할수록 정자침입율, 다정자침입 그리고 난자에 침입한 평균 정자 수는 함께 증가하는 것으로 나타났다. 그러나, 전핵형성율은 난자당 정자의 수가 1:6000과 1:6650에서 높게 나타났다. 이상의 결과는, 돼지 난포란의 체외수정시 정소상체 미부정자를 사용했을 때, 50% 이상의 형태학적 정상정자를 가진 정자를 사용하면 동결 융해된 정자와 유사한 수정율을 얻을 수 있었으며, 정자의 형태학적 평가는 좀더 효율적인 수정능획득을 위해 선행되어져야 한다는 것을 시사한다고 하겠다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제28권3호
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• pp.297-302
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• 2013

Cryopreservation of epididymal spermatozoa offers a potential tool for rescuing genetic material from males of genetically elite populations. Castration, catastrophic injury, sudden death or any other event that makes semen collection or mating impossible may prematurely terminate a stallion reproduction. Stallion epididymal spermatozoa vary widely in the loss of progressive motility, acrosomal integrity, and viability during freezing and thawing. The objective of this work was to investigate the effect of (1) freezing package types on cryopreservation efficiency, (2) thawing temperatures (37, 56 or $70^{\circ}C$) on Computer Assisted Sperm Analysis (CASA) parameters and (3) post-thawing incubation time (0, 1, 2 or 4h) on castrated stallion epididymis. Post-thawed sperm motility ranged between 59.69% and 64.28% ($56^{\circ}C$ and $37^{\circ}C$) in various thawing temperatures. When stallion epididymis sperm was frozen, straw was better than freezing tube on VCL (Velocity of Curvilinear Line) and VAP (Velocity of Average Path) parameter. Higher percentage of motility was observed at $37^{\circ}C$ thawing temperature even though no significant difference was observed among various temperatures. The motility, VCL, ALH (Amplitude of Lateral Head displacement), VAP, BCF (Beat-Cross Frequency) and STR (Straightness index) parameter of post-thawed sperm were significantly decreased by increasing the incubation time for all thawing temperatures. The present study showed that type of freezing package (Straw vs. Freezing tube) was not significantly different on cryopreservation efficiency. Furthermore, stallion epididymal spermatozoa frozen-thawed at $37^{\circ}C$ for 1 min resulted the highest proportion of motility and velocity movement. In addition, motility and viability of frozen-thawed stallion epididymal spermatozoa were also decreased by incubation.

• 한국가축번식학회지
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• 제26권2호
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• pp.105-110
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• 2002

본 연구는 소형견의 불임 해결과 번식효율 증진을 위해 소형견 난소 난포로부터 채취한 난자를 활성화 처리후 부고환 정자로 ICSI시켰을 때 체외발생율을 조사하기 위하여 수행하였다. 1. 난포란을 회수 후 24, 48시간 배양하였을 때 배양시간에 따른 GV, MI, MII로의 체외발생율은 각각 14/30(46.7%), 2/30(6.7%), 8/30(26.7%)였고 48시간 배양 시간에 따른 GV, MI, MII로의 체외발생율은 각각 l1/30(36.7%), 3/30(10.0%), 9/30(30.0%)였다. 2. 난포란을 회수 후 48시간 배양하였을 때 배양액에 따른 MII로의 체외발생율은 SOF액(10/30, 30.3%)에서의 배양이 TCM-199액(7/30, 23.3 %)보다 높은 체외발생율을 나타냈다. 3. 활성화 처리 난자에 부고환 정자로 ICSI를 하였을 때 상실배와 배반포로의 체외발생율은 각각 3/16(18.8%), 4/16(25.0%)로서 비활성화 처리 난자군의 3/13(23.1%), 1/13(7.7%)에 비해 높은 체외발생율을 나타냈다. 4. 활성화 처리 난자에 신선정자, 부고환 정자 및 동결 융해한 부고환 정자로 ICSI를 하였을 때 체외발생율은 각각 8/18(44.4%), 5/16(31.3%), 2/14(14.3%)로서 동결 부고환 정자 처리군은 신선정자 처리군에 비해 낮은 체외발생율을 나타냈다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제33권4호
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• pp.321-326
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• 2018

In this study, two epididymal spermatozoa recovery methods in relation to sperm number, motility, viability and acrosome reaction were examined. Seven bulls were castrated and 7 testicles with epididymides were transferred to the laboratoy. Epididymis in each bull was randomly used for flushing and mincing methods with semen extender (Optixcell, IMV, France). The recovered spermatozoa with adjusted sperm concentration to $40{\times}10^6cells/mL$ was diluted with optixcell and cryopreserved. In experiment 1, the difference in the total number of spermatozoa using flushing and mincing methods was insignificant (2570.0 and $2505.2{\times}10^6cells/mL$, respectively). For experiment 2, the percentage of motile spermatozoa and motility parameters between flushing and mincing methods were studied through the use of sperm class analyzer after frozen-thawing. The percentage of total motile sperm between flushing and mincing methods was almost the same with $89.5{\pm}12.8$ and $91.4{\pm}7.9%$, respectively. The same is the case with experiment 3 wherein the viability and acrosomal integrity of frozen-thawed epididymal spermatozoa by flushing and mincing was insignificantly different. The results from the study showed that both flushing and mincing methods can be used for epididymal spermatozoa recovery in bull.

• 한국가축번식학회지
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• 제26권3호
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• pp.229-234
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• 2002

본 연구는 불임견의 번식장애를 해결할 목적으로 개 정소상체로부터 채취한 정액을 tris-buffer로 원심분리하여 정장을 제거한 RSP-T 희석 정자의 일반성상과 동결방법 및 glycerol 농도가 동결융해 후 생존성에 미치는 영향과 난자와 정소상체 정자를 매정시켰을 때 정자침입율을 조사하기 위하여 수행하였다. 1. WES, RSP-S 및 RSP-T 희석 정소상체 정액의 정자수는 각각 4.25 $\pm$ 0.25(X$10^{6}$ Cells/$m\ell$), 3.85 $\pm$ 0.20(x$10^{6}$cells/$m\ell$), 4.05 $\pm$ 0.28(X$10^{6}$cells/$m\ell$)이었고, 활력은 50.55 $\pm$ 2.75%, 67.25 $\pm$2.55%, 78.75$\pm$3.55%이었고, 기형정자율은 49.45$\pm$2.25%, 37.75 $\pm$ 2.10%, 24.25 $\pm$ 1.55%이었다. 2. RSP-S와 RSP-T 희석 정소상체 정액을 완만 동결을 했을 때 생존율은 각각 35.00 $\pm$2.35%, 45.50 $\pm$2.15%와 초급속동결시의 생존율은 16.50 $\pm$ 3.55%, 22.55 $\pm$ 3.95%이었다. RSP-T 희석 정소상체 정액을 동결시 내동제에 glycerol 농도를 2.0~8.0% 첨가하여 동결했을 때 생존율은 각각 9.25 $\pm$ 1.55%~17.50$\pm$2.50%로서 신선정액의 25.50% 4.50%~34.00$\pm$5.15%에 비해 낮은 생존율을 나타냈다. 3. 동결 융해한 정소상체 희석정자의 평균 수정 능 획득 율과 첨체반응 및 생존정자수는 각각 13.00 $\pm$ 2.35%, 3.55 $\pm$ 0.85%, 15.50 $\pm$ 1.90% 였고, 신선 정소상체 정액의 45.25$\pm$5.75%, 7.06 $\pm$0.25%, 49.20$\pm$6.80%이었다. 신선 및 동결 수정 능 획득 정자를 난자와 매정시켰을 때 난자내 정자의 침입율은 각각 39.25 $\pm$4.72 %와 34.24$\pm$3.93%였고, 난자당 정자의 침입 수는 각각 1.30$\pm$0.33개, 1.10$\pm$0.50개이었다.