목 적 : Ataxia-Telangiectasia (AT) 증은 여러 가지 유전적 결함을 갖는 질병으로 방사선 민감도가 비정상적으로 상승되어 있는 것이 특징이다 AT 환자에서 공통적으로 존재하는 ATM 유전자는 현재까지 방사선 신호전달에 관여하는 것으로 알려진 Pl-3 kinase와 유사한 구조임이 알려져 ATM이 방사선 신호전달경로에 중요한 작용을 할 것으로 추정하게 되었다. 본 연구에서는 AT 세포와 정상세포에 PKCI를 과발현 시킴으로써 방사선 신호전달에 관여하는 PKC를 억제하여 이것이 방사선 민감도에 미치는 영향을 관찰하고, 방사선에 의해 유도되는 early response gene인 c-fos transcription의 차이를 측정하여 ATM과 PKCI에 의한 신호전달이 c-fos 유전자 전사에 미치는 영향을 분석하고자 하였다. 대상 및 방법 : PKCI expression vector를 작제한 후 정상세포인 LM217과 AT세포인 AT5BIVA에 transfection 시킨 후 plasmid의 genomic DNA에 결합된 것은 polymerase chain reaction (PCR) 방법으로 확인하였고 PKCI의 mRNA 발현 여부는 northern blotting으로 확인하였다. 방사선 민감도는 아포토시스로 측정하였으며 PKCI가 과발현된 각 세포주에 5 Gy의 방사선을 조사한 후 48시간에 세포를 모아 TUNEL방법으로 아포토시스 세포의 수를 측정하였다. c-fos 유전자의 전사는 reporter 유전자로 c-fos CAT plsmid를 $\beta$-gal expression vector와 같이 각 세포주에 transfection 시키고 36시간이 지난 후 CAT assay를 하여 activity를 측정하고 동시에 $\beta$-gal assay를 시행하여 transfection 효율을 보정해 주었다. PKCI, Ras의 영향을 보기 위하여는 PKCI, Ras expression vector와 c-fos CAT plasmid를 cotransfection하고 CAT activity로 측정 하였다. 결 과 : 이 실험의 결과 LM과 AT 세포에서 PKCI가 방사선 민감도에 미치는 영향과 c-fos 전사에 미치는 영향을 처음으로 보여주었다. PKCI의 과발현이 LM 세포에서는 방사선 민감도를 증가시켰지만 AT세포에서는 오히려 약간 감소시키는 작용을 나타내었다. c-fos 전사는 AT 세포에서 LM 세포에 비하여 70배 낮게 나타났는데 PKCI가 과발현 됨으로써 LM 에서는 c-fos의 전사가 감소되었지만 AT 세포에서는 영향이 없었다. Ras 단백으로 c-fos를 유도시키고 여기에 PKCI 발현 백터를 contransfection 하면 LM세포에서는 induction 이 감소되었지만 AT 세포에서는 영향이 없었다. 즉 LM과 AT 세포에서의 PKCI에 의한 반응의 차이는 Ras와 관련된 signal transduction pathway라는 것을 알 수 있었다. 결 론 : PKCI는 정상세포에서는 방사선에 의한 세포 손상을 증가시키지만 AT 세포에서는 별 영향을 보이지 않는 것을 알 수 있었으며, 두 세포간의 이러한 차이는 c-fos proto-oncogene의 전사차이로 설명할 수 있겠다. 이러한 차이가 AT 세포의 방사선 민감도의 한 원인일 것으로 생각된다.
c-fos 유전자는 전사조절인자로서 주로 c-jun family와 결합하여 heterodimers를 형성하며 AP-1 조절 부위를 가지는 유전자들의 전사를 조절하는 것으로 알려져 있다. 이 유전자의 발현은 myoblasts를 비롯한 여러 세포의 분화와 성장을 조절하며 최근 돼지에서 육질에 영향을 미치는 근섬유와 관련된다는 보고가 있다. 본 연구는 소에서 육질과 c-fos 유전자와의 관계를 알아보기 위한 기초자료로서 총 1,443 bp의 mRNA 염기서열을 최초로 소에서 밝혔으며 여러 조직과 기관에서의 발현양상도 살펴보았다. 한우의 c-fos 유전자의 염기서열을 사람, 돼지 및 쥐와 비교하여 본 결과 각각 89.8%, 93.5%와 87.0%의 높은 상동성을 보였다. 이 유전자의 발현은 근육중 갈비에서 가장 많은 발현량을 보였고, 조직에서는 비장에서 가장 많은 발현량을 보이는 것을 알 수 있었다. 이 연구에서 밝혀진 c-fos 유전자는 SNP의 추가분석에 의해 한우에서 육질의 향상과 관련이 있는 후보유전자로 쓰일 수 있을 것으로 사료된다.
In birds, the photoperiodic seasonal breeding involves encephalic photoreception at the initial step of triggering the well-known endocrinal cascade. Especially in Japanese quail (Coturnix coturnixjaponica), the reproductive neuroendocrine function responds to a single long day, and hypothalamic regions are known to be important for the reproductive response. However, little is known about where and how the light and time signals are integrated to detect daylength information and transduced to the endocrinal responses. To gain insights into this issue, we are interested in the c-Fos expression in the hypothalamus of the Japanese quail. Meddle and Follett (1997) previously identified two hypothalamic regions where c-Fos-like immunoreactivities were induced in response to a long day by using an antibody to carboxyl terminal region of human c-Fos (Lys$^{347}$ -Leu$^{367}$ ). In the present study, we used a different anti-c-Fos antibody recognizing a region from Lys$^{128}$ to Ala$^{152}$ of human c-Fos, and found in long-day- stimulated quails many c-Fos-like immunoreactive nuclei localizing within two regions, nucleus anterior medialis hypothalami and nucleus periventricularis hypothalami, which are distinct from those identified in the previous study. Then, we focused on the difference in the cross-reactivities of the antibodies used, and determined the whole coding sequence of quail c-Fos to compare the antigenic sequences of the two antibodies with the amino acid sequence of quail c-Fos. We found that the antibody we used would recognize quail c-Fos more specifically than that used in the previous study.
Immunohistochemical technique of the c-fos primary gene protein, Fos, was used to analyze the effects of external factors on the neuronal activities in the periaqueductal gray(PAG) of the intact rats, sham-operated rats and post-operated stress control rats. In addition, the number of Fos positive neurons has been evaluated to verify the effects of cannula implantation and veratridine treatment on the neuronal activities in PAG area. The results were summerized as follow : 1. There was no significant difference in the number of Fos positive neurons observed in the caudal and middle portion of lateroventral PAG from cannula implanted rats and sham operated rats. 2. The number of Fos positive neurons in the PAG was not changed by the stress induced by connection of collecting tube to rats for 12 hours as compared to that of intact rats. 3. In the saline treated group, the Fos immunoreactivity in the PAG did not changed at 30 minutes and 1 hour after saline treatment as compared to that of intact rats. However, the number of Fos positive neurons was significantly increased at 2 hours after treatment compared to that of saline treated rats at 30 minutes after treatment. 4. The Fos immunoreactivity was dramatically increased at 30 minutes, 1 hour and 2 hours after veratridine treatment as compared to those of saline treated groups. The number of Fos immunoreative neurons showed the maximal level at 2 hours after veratridine treatment. 5. The Fos positive neurons induced by saline and veratridine treatment were mainly distributed in front of the microdialysis window. These results suggest that new microdialysis demonstrated in this study improves efficiency and accuracy to confine the neuronal activity in front of microdialysis window site. Moreover, this directional specificity allows us to locate probe tips adjacent to the brain area of the interest site rather than centering the probes within that brain area. Finally, This microdialysis method can be used to dialyse the neurotransmitters using concious and freely moving rats.
Effect of single administration of Polygala tenuipolia was examined on short-term memory in step through test and the intensity of the immunoreactive c-Fos protein induced by oral administration of ethanol. The acquisition of memory was significantly reduced by ethanol, and ethanol amnesia was remarkably reversed following oral administration of Polygala tenuifolia. c-Fos protein in normal rat brain was highly expressed in order of thalamus, pariental cortex, hippocampus, hypothalamus, amygdaloid and cingulate cortex. The expression of Fos protein was remarkably suppressed by single administration of ethanol. The inhibitory effect of ethanol on expression of Fos protein was reversed by single administration of Polygara tenuipolia, especially tissues of limbic areas such as amygdala, parietal cortex and CA3 of hippocampus. These results suggested that the amelioration process of Polygala tenuipolia on ethanol amnesia seems to be involve the expression of c-Fos protein in partly.
The present study was designed to investigate the effect of low power GaAlAs laser on spinal Fos expression related to the anti-nociceptive effect of laser stimulation. Low power GaAlAs laser was applied to either acupoint or non-acupoint for 2 hour under light inhalation anesthesia. Spinal Fos expression in the dorsal horn was compared to that obtained in inhalation anesthesia control group. Furthermore, we analyzed the effect of the local treatment of lidocaine on the spinal Fos expression evoked by low power GaAlAs laser stimulation. The results were summarized as follows: 1. In the normal animals, only a few Fos like immunoreactive(Fos-IR) neurons were evident in the lumbar spinal cord dorsal horn. Similarly, following prolonged inhalation anesthesia, Fos-IR neurons were absent in the dorsal horn of the lumbar spinal cord. In animals treated with laser stimulation, Fos immunoreactive neurons were increased mainly in the medial half of ipsilateral laminae I-III at lumbar segments L3-5. These findings directly indicated that prolonged anesthesia used in this study did not affect the Fos expression in the spinal cord dorsal horn of intact animals and low power laser stimulation dramatically produced Fos expression in the spinal cord laminae that are related to the anti-nociceptive effect of laser stimulation. 2. In acupoint stimulated animals, 10mW of laser stimulation, not 3mW and 6mW intensity, significantly increased the number of Fos immunoreactive neurons in the spinal dorsal horn(p<0.05). However, laser stimulation on acupoint more dramatically increased the number of Fos immunoreactive neurons in the spinal cord rather than laser stimulatin on non acupoint. These result suggested that laser stimulatin on acupoint was more effective treatment to activate the spinal neuron than non acupoint stimulation. 3. The local treatment of lidocaine totally suppressed the activity of spinal neurons that were induced by lower power 1aser stimulation. These data indicated that the anti-nociceptive effect of laser stimulation was absolutely dependent upon the peripheral nerve activity in the stimulated location. In conclusion, these data indicate that 10mW of low power laser stimulation into acupoint is capable of inducing the spinal Fos expression in the dorsal horn related to the anti-nociceptive effect of laser stimulation, Furthermore, the induction of spinal Fos expression was totally related to the peripheral nerve activity in the laser stimulated area.
포유류의 자궁조직은 발정주기를 통하여 역동적으로 변화하고 있으며 이러한 자궁조직의 분화는 시상하부-뇌하수체-생식소를 잇는 축에 의해 조절되는 스테로이드 호르몬에 의해 이루어진다. 그러나 에스트로겐 (E)이 어떤 유전자를 발현하여 자궁 내의 변화를 일으키는지는 아직 자세히 알려지지 않고 있다. 본 연구는 난소를 절제한 성숙한 흰쥐에 E을 처리한 후 자궁조직 내에서 c-fos, c-jun 및 hsp25 mRNA의 발현 변화를 Northern blot analysis방법을 사용하여 연구한 것이다. c-fos및 c-jun 암원유전자의 mRNA발현은 E처리 후 1시간 이전부터 증가하기 시작하며, 3시간 이내에 최고치에 도달한 후 급격히 감소하여 기저수준으로 되돌아갔다. 반면에 hsp25 mRNA수준은 E처리 후 3시간 대에서 최고치를 나타내나 증가된 발현량이 서서히 감소하며 12시간이 지난 후 까지도 정상대조군에 비해 높은 수준으로 유지되었다. 이러한 E의 영향이 선별적인지를 검증하기 위하여 E의 길항제인 tamoxifen을 사전처리하고 E을 추가로 처리하여 c-fos, c-jun및 hsp25 mRNA의 발현이 최고치에 이르렀던 3시간대에 자궁조직을 얻어 각각의 유전자 발현량을 조사한 결과 E에 의해 증가되었던 c-fos, c-jun 및 hsp25 mRNA의 수준이 억제됨을 확인하였다. 이러한 결과는 E이 자궁조직에 영향을 미치는데 초기의 일시적인 변화를 보이는 암원유전자인 c-fos 및 c-jun이 중요한 역할을 하리라는 것을 시사하며 hsp25의 경우는 좀더 늦은 반응에 관여하거나 c-fos및 c-jun에 의하여 간접적으로 조절을 받을 수도 있음을 보여 주는 것으로 사료된다.
This study sought to investigate any additive or interactive effects that soy isoflavones may have on the ecosystem of the gut, which is influenced by fructooligosaccharide (FOS) in colon-cancer model rats. Male Sprague-Dawley rats treated with 1,2-dimethylhydrazine were given experimental diets containing 0, 3, 6, or 9% FOS with or without 0.1% soy isoflavone for 12 weeks. In addition to the effects of FOS dosage on the gut ecosystem, dietary supplementation with soy isoflavone reduced the number of colonic aberrant crypts (ACs). The fecal weight, fecal pH, and gut transit time significantly decreased in a dose-dependent manner in rats fed FOS and the fecal concentration of bifidobacteria was higher in rats fed FOS than in control rats. The fecal output of total short-chain fatty acids, acetate, and propionate was significantly increased by the presence of FOS and was negatively correlated with the number of ACs, whereas the fecal output of butyrate showed no significant correlation with FOS dosage. The addition of soy isoflavone to the diet did not result in any significant differences in gut ecosystem parameters. Therefore, we conclude that the suppressive effect of soy isoflavone on ACs was not associated with the intestinal ecosystem, which was significantly altered by the dosage of FOS.
We investigated the effect of fish oil (FOS) on growth performance, ruminal metabolism and fatty acid composition and physical characteristics of longissimus muscle in 10 steers and 10 bulls of Korean cattle. Concentrates diet was supplemented with FOS at 5% of the diet. FOS contained 3.34% eicosapentaenoic acid (EPA) and 24.87% docosahexaenoic acid (DHA) of total fatty acids by weight. Average daily weight gain and feed efficiency were not affected (p>0.871) by FOS, but feed intake was decreased. FOS had lower (p<0.003) pH and higher (p<0.001) $NH_3$-N than that of control. There was a treatment effect (p<0.001) for serum cholesterol concentrations. FOS increased (p<0.009) concentrations of n-3 fatty acids, including linolenic, EPA and DHA in longissimus muscle. Physical traits were significantly (p<0.015) changed by feeding FOS except for pH and lightness (L). We concluded that the fatty acid composition and physical properties of the muscle in fattening Korean cattle can be altered by feeding 5% FOS.
Both direct and indirect environmental stress to brain were increase the expression of transcription factor c-fos in various populations of neurons. In this study, we examined whether the intraperitoneal injections of lidocaine at doses inducing convulsion within 10 min increased the level of c-fos mRNA and protein in forebrain areas. In situ hybridization using $[^{35}S]UTP-labeled$ antisense c-fos, cRNA increased c-fos mRNA levels though hippocampal formation, piriform cortex, septum, caudate-putamen, neostriatum, and amygdala within 2 hr. In parallel with the mRNA expression, c-FOS protein immunoreactivity was also observed in the same forebrain areas. In contrast to the seizure activity and widespread neuronal degeneration following a kainate treatment, injections of lidocaine did not produce neuronal death within 3 days. The present study indicates that lidocaine induces convulsion and c-fos expression without causing neurotoxicity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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