본 연구는 농식품의 안전성 확보 및 식중독 사고 발생 예방을 위한 연구의 일환으로 수행되었으며, 국내외의 자료를 조사하여 11가지 미생물학적 위해요소에 대해 리스크 프로파일 목록을 작성하여 추후 데이터베이스로 활용 될 수 있도록 하였다. 또한 국제 식품안전 관련 기관인 CODEX와 WHO/FAO 및 미국 일본 유럽 호주 뉴질랜드의 리스크 프로파일 선정 기준을 조사하고 국내 가용한 자료를 고려하여 식중독 원인균을 중심으로 관리의 기본이 되는 질병의 빈도와 심각성, 식품 소비 빈도, 교차오염 가능성의 세 가지 기준을 중심으로 관련 자료를 분석하였으며, 국내에서는 조사되고 있지 않으나 선진국에서 관리되고 있는 위해요소 중 앞으로 관리가 필요할 것으로 판단되는 요소를 고려하여 설정하였다. 우선순위는 발생빈도 및 위해도에 따라 세 그룹으로 나누었으며, 가장 집중적인 관리가 필요한 것으로 분석된 그룹 I에는 Norovirus, E.coli, Salmonella, Clostridium botulinum, Listeria monocytogenes를 선정하였고, 그룹 II에는 Vibrio parahaemolyticus, Staphylococcus aureus, Campylobacter jejuni, Bacillus cereus를 지정하였으며, Clostridium perfringens, Yersinia enterocolitica, Shigella spp, Cronobacter sakazakii, Hepatitis A virus를 그룹 III에 선정하였다. 본 연구에서 고려한 교차오염의 가능성은 정량화 되지 않은 '가능성'만을 염두에 두고 작성되었으며, 앞으로 농장의 GAP, HACCP을 적용하여 농식품의 수확에서부터 제품 생산 전 단계에 걸쳐 안전성이 확보된 제품을 생산할 수 있는 체계를 갖추어야 할 것이라 제안한다. 본 연구결과는 농식품의 식중독 예방과 'farm to table' 전 과정의 체계적인 위생관리시스템 도입을 위한 기초자료로 활용 될 수 있을 것이라 판단된다.
A one-step multiplex reverse transcription PCR (RT-PCR) method comprising six primer sets (for the detection of norovirus GI and GII, hepatitis A virus, rotavirus, and astrovirus) was developed to simultaneously detect four kinds of pathogenic viruses. The size of the PCR products for norovirus GI and GII, hepatitis A virus (VP3/VP1 and P2A regions), rotavirus, and astrovirus were 330, 164, 244, 198, 629, and 449 bp, respectively. The RT-PCR with the six primer sets showed specificity for the pathogenic viruses. The detection limit of the developed multiplex RT-PCR, as evaluated using serially diluted viral RNAs, was comparable to that of one-step single RT-PCR. Moreover, this multiplex RT-PCR was evaluated using food samples such as water, oysters, lettuce, and vegetable product. These food samples were artificially spiked with the four kinds of viruses in diverse combinations, and the spiked viruses in all food samples were detected successfully.
Pathogenic microbial foodborne disease outbreaks (PMFBDOs) have increased in many countries, the boom in food service establishment is not matched by effective food safety and control. In this study, we investigated the current state and the epidemic aspects of FBDOs in Korea and Japan. In Korea, the average prevalence rate of foodborne disease (FBD) was 15.0 per 100,000 population and cases per outbreak of FBD was 57.0. During the same period in Japan, the prevalence rate showed an average of 24.9, and the cases per outbreak were 16. When both prevalence rate and cases per outbreak were compared, the prevalence rate in Japan was much higher than that in Korea (p<0.01). However, average cases per outbreak of FBD in Japan were much lower than those in Korea (p<0.01). In Korea, outbreaks of FBDs were more common in spring (p<0.01), while in Japan, more frequent in summer and winter (p<0.01). Outbreaks of FBD occurred largely through restaurant and school foods (32.0% and 27.5%) in Korea. In Japan, the proportion of the outbreak cases in the restaurant and home were 23.7% and 12.1%, and cases of unknown causes of FBDs were 48.2%, respectively. Bacteria were the major causes of infection in both countries. The prevalence of PMFBDOs by Salmonella spp. Vibrio parahemolyticus and Staphylococcus aureus were much higher in Korea, while those by Camphylobacter spp. and SRSV were more common in Japan. The causes by virus were more frequent in Japan (13.7%) than in Korea (7.7%). The prevalence of FBDs in Korea and Japan showed characteristic differences, especially in the PMFBDOs due to such factors as geography, climate, culture, diet and food management.
돼지축사에서 채집해온 6개의 육성돈의 분변에서 식중독 유발 바이러스인 HAV와 HEV를 검출하였으며, HAV는 88.3%의 검출율을 보였으며, HEV는 33.3%의 검출율을 보였다. 결과에는 제시하지 않았으나, 염기서열 분석결과 HEV는 사람에게 전염이 가능한 유전자형인 III형이었으며, 실험적으로 사람의 간세포인 PLC/PRF/5에 접종하였을 때 증식이 됨을 확인하였다. 식중독 유발 바이러스인 HAV와 HEV는 오염된 식품이나 물을 섭취하거나 교차 오염에 의해 전염이 가능하기 때문에 돼지축사에서 위생상태의 개선뿐만 아니라 육류를 섭취하기 전인 운송 및 가공과정까지 식중독 유발 바이러스에 의한 교차오염을 막는 노력이 필요하다. HAV와 HEV 모두 검출된 분변에서 HAV를 순수분리하고 빠르게 검출하기 위해 IMS-RT-PCR을 적용하였으며, 항원-항체 반응에 의해 순수하게 HAV만을 분리할 수 있었다. 또한 HAV만이 순수분리 되었는지 재확인하기위해 세포감염을 통해 증식된 바이러스를 확보한 후 nested RT-PCR을 수행한 결과, HAV만을 순수 분리할 수 있음을 확인하였다. 이는 IMS 활용기술이 단순히 항체를 교체함으로써 다른 특정 식중독 유발 바이러스의 다양한 시료에서 바이러스 순수분리 및 검출에 활용 가능성이 있음을 확인하였다.
The objective of this study was to evaluate the probability of norovirus foodborne illness by raw oyster consumption. One hundred fifty-six oyster samples were collected to examine the norovirus prevalence. The oyster samples were inoculated with murine norovirus and stored at 4℃-25℃. A plaque assay determined norovirus titers. The norovirus titers were fitted with the Baranyi model to calculate shoulder period (h) and death rate (Log PFU/g/h). These kinetic parameters were fitted to a polynomial model as a function of temperature. Distribution temperature and time were surveyed, and consumption data were surveyed. A dose-response model was also searched through literature. The simulation model was prepared with these data in @RISK to estimate the probability of norovirus foodborne. One sample of 156 samples was norovirus positive. Thus, the initial contamination level was estimated by the Beta distribution (2, 156), and the level was -5.3 Log PFU/g. The developed predictive models showed that the norovirus titers decreased in oysters under the storage conditions simulated with the Uniform distribution (0.325, 1.643) for time and the Pert distribution (10, 18, 25) for temperature. Consumption ratio of raw oyster was 0.98%, and average consumption amount was 1.82 g, calculated by the Pert distribution [Pert {1.8200, 1.8200, 335.30, Truncate (0, 236.8)}]. 1F1 hypergeometric dose-response model [1 - (1 + 2.55 × 10-3 × dose)-0.086] was appropriate to evaluate dose-response. The simulation showed that the probability of norovirus foodborne illness by raw oyster consumption was 5.90 × 10-10 per person per day. The annual socioeconomic cost of consuming raw oysters contaminated with norovirus was not very high.
Noroviruses, members of the family Caliciviridae, are often found in shellfish grown in polluted water and are emerging as a leading cause of foodborne disease worldwide. As the presence of norovirus in food commodities becomes an important medical and social issue, there are increasing needs for designing improved detection methods for the virus. In this study, we tested the Agilent 2100 Bioanalyzer for the analysis of norovirus DNA amplified from oyster samples. Microchip electrophoresis provided us with more accurate information, compared to conventional agarose gel electrophoresis, in the resolution and quantification of amplified products. The development of an improved method for food-associated noroviruses would contribute to a rapid identification of contaminated food and improve our understanding of the modes of food contamination and norovirus transmission.
Hepatitis E Virus (HEV) infection is a worldwide disease and the primary cause of acute viral hepatitis in the world. It can be isolated from many different species including pigs. HEV is a zoonotic pathogen and foodborne disease. The main animal reservoir is domestic pigs. It is usually asymptomatic in pig but it is a public health concern, causing acute hepatitis in humans of varying severity. This study focused on the presence of HEV in pig and pork product. One hundred feces and one hundred fifty serum samples were randomly collected from pigs in slaughterhouses in Gwangju from November in 2018 to February in 2020. In addtion, seventy-five pork products were collected from markets in Gwangju. Feces and pork product samples were examined for the presence of HEV RNA using an reverse-transcription realtime PCR (RT-qPCR) assay. Serum samples were tested for the presence of HEV-specific IgG antibodies using Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). HEV antigen and antibody positive rates were 3.0% (3/100) and 19.3% (29/150), respectively, in Gwangju and nearby areas such as Jeonnam and Jeonbuk. However, HEV antigen was not detected from any of pork product in this study. In conclusion, the prevalence of HEV should be continuously monitored because HEV was sporadically detected in Gwangju and nearby areas.
본 연구에서는 FCV 현탁액에 물리, 화학적 위생처리 후 복합효소처리라는 전처리과정을 적용한 뒤 real-time RT-PCR법을 이용하여 살균효능을 분석하였다. RT-PCR 이전에 $37^{\circ}C$에서 30분 동안 PK와 RNase A를 처리함으로써 UV, 열, 염소, 에탄올, 과초산계열 제품에 의해 불활성화 된 바이러스들은 음성 결과를 나타내었고, real-time RTP-CR법을 통해 살균 효능을 정량분석한 결과, 복합효소처리를 했을 경우 무처리구보다 더 높은 살균 효능을 보이는 것을 확인할 수 있었다. 이로써 Nuanualsuwan S. 등의 선행연구에서와 같이 PK와 RNase A로 전처리하는 단계를 통하여 물리, 화학적 위생처리에 의해 손상되지 않은 바이러스가 RT-PCR법에 의해 증폭되는 것을 방지함으로써 Real-time PCR법에 대한 검출 감도를 높일 수 있음을 확인하였다. 또한, FCV를 검출하기 위해 사용된 RT-PCR과 real-time RT-PCR 두 방법 중에서도 real-time RT-PCR법이 가장 신속하면서도 민감도 높은 결과로 도출되었다. 따라서, 유전자 분석 이전에 복합효소처리는 물리, 화학적 위생처리에 의해 불활성화 된 바이러스의 RNA가 transcription 또는 증폭되는 것을 방지하기 위한 수단으로 real-time RT-PCR법과 결합됨으로써 노로바이러스를 비롯한 식중독 바이러스를 검출하는데 효과적으로 적용될 것으로 판단된다. 또한 식품현장에서 전기영동 과정없이 신속하게 살아있는 바이러스만을 수치적으로 정량화함으로써 식품안전에도 기여할 것으로 사료된다.
2018년 6월 12일 충청북도 옥천군 소재 A고등학교에서 노로바이러스의 유행을 지연신고하는 사례가 발생하였고, 이에 대한 원인과 전파양식 등을 규명하고 예방 및 관리대책을 마련 하기 위하여 역학조사를 수행하였다. A고등학교 학생 183명을 대상으로 설문조사, 환례자 60명, 조리종사자 10명을 대상으로 세균 10종 및 바이러스 5종에 대한 검체검사를 실시하였다. 설문조사는 최초환자 발생일 6월 5일을 기준으로 3일 전인 6월 2일부터 12일까지의 식단을 이용하여 환자-대조군 조사를 시행하였다. 학생, 교직원, 조리종사자 785명 중 환례는 61명으로 노로바이러스의 발병률은 7.8% 이었다. 위험요인 분석에서 정수기 음용수가 유의한 변수이었다. 검체검사에서 학생 2명, 정수기 음용수, 환경검체에서 동일 유형의Norovirus GI-8이 검출되었다. 이번 유행의 원인으로 본관, 기숙사, 급식실 정수기 음용수가 오염되고 그로 인해 원인병원체 노로바이러스의 전파가 이루어졌다고 판단하였다. 이번 연구는 6월 5일 첫 환례자가 발생했음에도 신고가 7일이 경과한 6월 12일 지연신고 되어 장관감염증 확산 조기차단이 이루어지지 않아 환례자가 더 많이 발생한 것으로 추정된다. 향후 학교급식 시 발생하는 수인성 및 식품매개성질병으로부터 학생을 보호하고 집단발생을 예방하기 위하여 학생의 증상을 가장 우선적으로 파악이 가능한 담임선생님과 보건교사의 공조체제 개선, 보건교사 부재 시 대응방안, 보건교사의 학교 감염병 집단발생에 대한 인식제고를 위한 시스템 보완이 이루어져야 할 것이다. 또한 질병관리본부의 기본 역학조사서 서식에 지연신고에 대한 사유를 기록하는 항목을 추가하여 지연신고에 대한 원인에 대한 규명과 그에 따른 대책을 마련해야 할 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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