This experiment was carried out to investigate in vitro maturation rate of pig follicular oocytes cultured from 30 to 48hr in TCM 199 supplemented with gonadotropins(FSH, LH) and estradiol-17$\beta$ and in vitro fertilization with ejaculated sperm preincubated in BO medium containing 2mM caffein and development of IVF oocytes. The results obtained in this experiments were as follows ; 1. In addition of hormones, in vitro maturation rate of follicular oocyte increased gradually from 36hr and 74.47% at 48hr in addition of hormones, but there was no differences among in vitro maturation rates after 36hr of culture. 2. Penetration rate of pig oocytes matured in FSH+LH+E2 and FSH+E2 was 71.8%, 71.0% and significantly increased by the addition of hormones. 3. Percentage of developed oocytes was 44.4% for oocytes matured in FSH+LH+E2-added medium and 48.7% for oocytes matured in FSH+E2-added medium, respectively. 4. Two to 16 cells stage embryos were obtained only when pig oocytes matuerd in vitro in hormones-added medium and 72hr after IVF. 5. From present results, it is concluded that gonadotropins and estradiol17$\beta$ can enhance in vitro fertilization and subsequent development as well as in vitro maturation pig follicular oocytes.
Three experiments were conducted with follicular oocytes, to compare some somatic cells, growth factors and media for in vitro maturation of bovine oocytes. In the first experiment, the type of somatic cells had no effects on in vitro maturation of bovine follicular ooctyes. In the second experiment, oocytes were matured in TCM199 su, pp.emented with growth factors on IVM of bovine follicular oocytes, then all were co-cultured with cumulus cells. The proportion of used oocytes that developed to expanding blastocysts was 22.2%, 20.2%, 17.7%, 22.2%, 24.4% and 20.2% after maturation in TCM199 su, pp.emented with control, insulin, IGF-I, IGF-Ⅱ, FGF and EGF, respectively. In the third experiment, oocytes were matured in BO, Ham's F10 and TCM199, then all were fertilized in BO, and embryos cultured in BO, Ham's F10 and TCM199, respectively. Cleavage rates in BO were 90%, had higher than in Ham's F10(80%) or in TCM199(64%). But production of expanding blastocysts in TCM199(21%) or Ham's F10(20.6%), had higher than in BO(4.6%).
This study was conducted to investigate the effect of hormones on in vitro maturation of porcine follicular oocytes. The results obtained were as follows : 1. The maturation rates of oocytes cultured in medium containing FSH 1, 10, 50 and 100$\mu\textrm{g}$/ml were 44.6, 58.5, 42.6 and 37.9%, respectively. And those were no difference to maturation rates among the medium containing FSH. However, the maturation rate(13.7%) of oocytes cultured without FSH was significantly(P<0.05) lower than those of oocytes cultured with FSH. 2. The maturation rates of oocytes cultured in medium containing hCG 0, 1, 10, 50 and 100IU/ml were 12.2, 11.9, 17.9, 21.9 and 45.6%, respectively. The maturation rate of oocytes cultured with 100IU/ml hCG was significantly(P<0.05) higher than those of oocytes cultured with 0~50IU/ml hCG concentrations. 3. The maturation rates of oocytes cultured in medium containing E2 0, 1, 10, 50 and 100$\mu\textrm{g}$/ml were 13.7, 10.5, 14.9, 11.4 and 5.9%, respectively. There were no differences to maturation rates among the E2 concentrations. 4. The FSH+hCG treatment was the highest maturation rate in medium containing different combination of FSH, hCG and E2.
The intrafo1licular echoes of cumulus oophoruses within ovarian follicles were assessed with the use of ultrasound in 86 women taking part in an in vitro fertilization(IVF) or gamete intrafallopian transfer(GIFT) program, stimulated with pure follicle-stimulating hormone(FSH)/human menopausal gonadotropin(hMG)/human chorionic gonadotropin (hCG). When intrafo1licular echoes were clearly separated from the follicular wall or relatively dispersed within the follicle, they were considered to be a dissociated cumulus, and when they were only slightly prominent from the follicular wall, they were suspected to be a nondissociated cumulus. A cumulus was seen in 62.1% of the follicles larger than 10 mm diameter and 75.1% of them were dissociated. The larger the follicles in size, the more the cumuluses in number and dissociation. The number of follicles and intrafollicular echoes per woman was not different whether or not she would be pregnant, but the number of dissociated cumuluses was significantly more in pregnant women. The number of observed dissociated cumuluses correlated significantly with the number of recovered mature oocytes. When an intrafollicular echo is seen, it can be taken as evidence of a sign of maturity of that particular follicle and oocyte. Ultrasonographic monitoring of intrafollicular echoes and follicular size is very helpful to predict follicular maturation in ovulation stimulation cycles.
The follicles (1.8 to 7.8 mm in diameter) were recovered from the ovaries in marketed pigs and the number of granulosa cells, the diameter of oocytes obtained from different development stages of the follicles and follicular fluid levels were determined. Correlations between size measurements and cell counts as well as the diameter of antral follicles and oocytes were also investigated. The results indicated that, while expanding in size, follicle numbers decreased with a greater atretic proportion. Granulosa cells increased in numbers continuously and remained unchanged beyond the size of 200 ${mm}^3$ in non-atretic follicles, whereas a sudden drop of granulosa counts was observed in atretic follicles. Follicular fluid, on the other hand, linearly increased its volume with follicle size and differed little between those of non-atretic and atretic follicles. Diameters of oocytes in non-atretic follicles increased to its maximum when follicles expanded to 150 ${mm}^3$ and maintained its size during later follicular expansion. It is concluded that, for in vitro culture, the optimal size of porcine follicle should be between 150 to 180 ${mm}^3$if they are collected from pre-pubertal gilts of marketing size slaughtered in an abattoir.
Follicular fluid meiosis-activating sterol (FF-MAS) has been suggested as a positive factor which could improve the oocyte quality and subsequent embryo development after in vitro fertilization. However, FF-MAS is a highly lipophilic substance and is hard to detect in studying the relationship between MAS and quality of oocyte maturation. The present study focused on the expression of lanosterol 14${\alpha}$-demethylase (LDM), a key enzyme that converts lanosterol to FF-MAS, on mouse oocyte maturation and its potency on development. LDM expression was strong in gonadotropin-primed germinal vesicle stage oocytes, weak after germinal vesicle breakdown (GVBD), and then strong in MII stage oocytes. The LDM-specific inhibitor azalanstat significantly inhibited oocyte fertilization (from 79.4% to 68.3%, p<0.05). Also, azalanstat (5 to 50 ${\mu}M$) decreased the percentage of blastocyst development dosedependently (from 78.7% to 23.4%, p<0.05). The specific inhibition of sterol ${\Delta}14$-reductase and ${\Delta}7$-reductase by AY9944 accumulates FF-MAS and could increase blastocyst development rates. Additionally, in the AY9944 group, the rate of inner cell mass (ICM)/ total cells was similar to that of in vivo development, but the rate was significantly decreased in azalanstat treatment. In conclusion, LDM, the key enzyme of FF-MAS production, may play an important role in fertilization and early development of the mouse embryo, especially in vitro.
북방개구리 여보 난자의 배경계를 이용하여 calcium의 이동과 관련이 있는 것으로 알려진 lanthanum ion (La3 +)이 난자의 성숙에 미치는 효과를 조사하였다. La3 +을 배양액에 처리하면 (O.O1-1.O mM)농도에 의존하여 난자의 성숙이 유도되었으며, 배양후 9-12시간애에 핵붕괴가 일어났다. La3 +처리는 자발적 성숙을 일으키는 난자의 성숙을 촉진하였으며, 3시간 동안의 처리로도 성숙 유도 효과가 있었다. La3 +에 노출된 여포들의 progesterone 수준을 RIA로 측정하여 본 결과 이 이온의 효과가 호르몬의 새성과는 무관하다는 것을 알았다. La3 +에 의한 난자의 핵붕괴는 forskolin(9 $\mu$ M)이나 cyclobeximide (0.01 - 1.0 - $\mu$g/2 ml)에 의하여 억제되었다. La3 +에 의한 성숙과정에 나타나는 단백질 양상 및 인산화 양상의 변화는 progesterone에 의한 것과 같은 경로를 거치는것과 같았다. 이로보아 La3 +의 자극에 의한 성숙과정이 progesterone에 의한 것과 같은 경로를 거치는 것으로 보이며 따라서 Ca2+이 난자의 성숙 조절에 중요한 역할을 한다는 것을 알 수 있었다.
소 초기배의 체외생산을 위한 소 난포란 회수를 극대화할 수 있는 방법을 확립하기 위해 여러 가지 방법에 의해 채취된 난자의 발생능력을 검토하였다. 전통적인 흡입법(대조구), 개발된 회수법(slicing) 및 이들을 결합한 방법(결합법)을 비교하였다. 총 245개의 난소로부터 1,641개의 난포란을 실험에 이용하였다. 회수된 난자는 TCM199과 소 태아혈청을 기초로 한 배양액에서 24시간 체외성숙시켜 급속염색법에 의해 핵성숙을 판별하고, 7% 에탄올에 의해 활성화된 처녀발생란의 전핵형성 유무에 의해 세포질 성숙을 평가하였다. 회수된 평균 난자수는 난소당 흡입법, slicing 및 결합법이 각각 1.87, 11.05 및 7.88개를 얻어 새로 개발된 slicing에 의해 회수율을 5.9배 (11.05/1.87) 증가시킬 수 있었다. 핵 성숙은 흡입법 92.9%, slicing 79.1%와 결합법 71.7%였다. 비록 흡입법에 의해 회수된 난자의 핵 성숙율이 높았지만 난소당 얻을 수 있는 성숙 난자의 수는 slicing할 경우 5배까지 증가시킬 수 있었다. 세포질 성숙의 지표인 전핵의 형성율은 대조구 75%, slicing 67%, 그리고 결합법 62.5%였다. 이같은 결과는 개발된 slicing법에 의해 도살장 난소로부터 보다 많은 수의 난자의 회수가 가능하며 이들의 핵성숙 및 세포질 성숙도 정상적으로 일어나며 난소당 전핵 초기배 수를 증가시킬 수 있음을 보여준 것이다. 아울러 증가된 난자수로 인하여 초기배의 생화학적 분석 및 외래유전자의 미세주입을 위한 지속적으로 안정된 초기배의 공급체계가 확립되었다.
본 연구는 재래산양에 있어서 과 배란 처리에 의한 oocyte의 회수방법과 양질의 oocyte 회수 체계를 확립하기 위하여 과 배란 처리 후 회수시간이 난포의 발달과 난자의 회수율에 미치는 영향을 조사하였다. 공시동물은 체중 15~25 kg 전${\cdot}$후의 성숙한 미경산 재래산양으로서 발정동기화를 위하여 CIDR를 10일간 질내에 삽입하고 과배란 처리는 FSH를 CIDR 삽입 8, 9, 10일째에 12시간 간격으로 70 mg을 감량 투여하였다. $PGF_{2\alpha}$는 FSH와 함께 8일째에 투여하였으며, CIDR는 10일째에 제거와 동시에 hCG 400 IU를 투여하였다. 난자의 회수는 hCG 투여 후 29~50시간째에 시간대별로 외과적인 방법으로 실시하였다. hCG 투여 후 회수시간에 따른 in vivo란의 회수에 있어서 각각 5.93${\pm}$2.88(29~34시간), 6.82${\pm}$0.95(35~40시간) 및 7.33${\pm}$1.54개(41~50시간)로서 차이가 없었다. 회수율에 있어서는 35~40시간째에 회수하였을 때가 49.7%로서 29~34시간 및 41~50시간째에 38.2% 및 29.5% 보다 유의적(P<0.05)으로 높았다. 두당 회수 난자 수는 각각 2.27${\pm}$0.76, 3.39${\pm}$0.75 및 2.17${\pm}$1.40개로서 차이가 없었다. hCG 투여 후 29~34, 35~40, 및 41~50시간에 관찰된 난포 수는 두당 11.75${\pm}$2.45, 11.87${\pm}$1.34 및 9.20${\pm}$1.50개였다. 또한 배란된 성숙난자의 채란 율은 각각 70.2, 74.7 및 54.3%로서 41~50시간째에 회수하였을 때가 가장 낮았다. 두당 회수율에 있어서도 8.25${\pm}$1.34, 8.87${\pm}$1.10 및 5.00${\pm}$1.30개로서 회수시간에 따른 유의적인 차이는 없었다. 회수한 난포내 미성숙 난자의 등급에 있어서 회수시간대별 1등급은 각각 24.2, 19.5 및 12.0%였으며, 2등급의 경우는 41~50시간이 4.0%로서 29~34시간과 35~40시간의 14.4% 및 16.2%보다 유의적(P<0.05)으로 낮았다.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.