The in vitro maturation rate of vitrified-thawed canine oocytes was $30.8{\pm}3.4%$. The in vitro maturation rate of vitrified oocytes was lower than that of the control ($52.0{\pm}2.5%$, p<0.05). The in vitro maturation rate of vitrified-thawed oocytes were significantly (p<0.05) lower than those of fresh oocytes. The in vitro maturation and developmental rates of the vitrified-thawed oocytes were $17.5{\pm}2.5%$ and $8.8{\pm}3.4%$, respectively. This results were lower than the control group ($43.6{\pm}3.2%$ vs $20.0{\pm}3.0%$). SOD1 gene expression of 1~2 mm of follicle size were higher than those of above 6 mm follicle size. SOD2 gene expression of 1~2 mm of follicle size were significantly higher than those of above 6 mm follicle size (p<0.01). The expression pattern of SOD1, 2 was constantly expressed in both groups but strongly expressed in follicles (1~2 mm) group when compared to the above 6 mm follicles. SOD gene expression between groups the fresh and vitrified oocytes groups were significant differences in rates. However, RGS gene expression between groups the fresh and vitrified oocytes groups were no significant differences in rates.
Ultrastructural studies of vitellogenesis in oocytes and follicle cells during oogenesis in female Protothaca (Notochione) jedoensis were investigated by histological and transmission electron microscope observations. In early vitellogenic oocytes, combined activities of the Golgi complex, mitochondria and rough endoplasmic reticulum in the cytoplasm are associated with autosynthetic vitellogenesis. Furthermore, at this time, many coated vesicles at the basal region of the oolemma of the oocyte lead to the formation of vesicles through endocytosis in the cytoplasm. Through the formation of the coated pits on oolemma during vitellogenesis, the uptake of extrafollicular precursors (nutritive materials) occurs in coated vesicles by endocytosis. Therefore, it is assumed that these exogenous materials are involved in heterosynthetic vitellogenesis. During late oogenesis, exogenous yolk precursors (yolk granules), lipid droplets and proteinaceous yolk granules are present in the cytoplasm of late vitellogenic oocytes. In mature oocytes, small yolk granules appear intermingled and form large mature yolk granules. Thus, two processes of vitellogenesis occur in oocytes by way of endogenous autosynthesis and exogenous heterosynthesis. The follicle cells attached to the oocytes appear to play an integral role in vitellogenesis in this study.
This study aimed to recover the ovarian function through in vitro culture of preantral follicles from aged mice. First, we isolated the preantral follicles from ovaries of sixty-seven-week old B6D2F1 mice with decreased fecundity to know how many follicles were present in them, which was 6 preantral follicles including 2 primary, 2 early secondary and late secondary follicles from 8 aged mice. It was confirmed that a few follicles (~2) were present in aged mice through histological analysis compared to adult mice as control. The 9 days of in vitro culture of preantal follicles showed in vitro growth and induced maturation after treatment with hCG (2.5 IU/mL) and EGF (5 ng/mL). Cumulus cells in the cumulus-oocyte complexes (COCs) were removed using hyaluronidase and oocytes at the germinal vesicle (GV) and GV breakdown (GVBD) were obtained from preantral follicle culture of aged mice in vitro. In conclusion, these observations demonstrated that there still were a few preantral follicles in the ovaries of 67 week-old mice, which we were able to culture in vitro and oocytes were obtained from them. This study proposed an in vitro culture system using preantral follicle as a therapeutic strategy for fertility preservation in humans for assisted reproductive medicine.
Objective: The purpose of this study was to investigate growth performance, carcass traits, meat quality and hair follicle development of growing Rex rabbits as affected by different environmental enrichment materials. Methods: A total of one hundred and twenty Rex rabbits were randomly assigned to four groups; reared in conventional cages (not enriched) and in enriched cages with either willow stick (WS), rubber duck, or a can containing beans (CB), for 44 days. Results: The average daily gain of the CB group was the highest and had a significant difference from that of the other groups (p<0.05). The spleen and cecum weight of the CB group was greater than those of the WS and control groups (p<0.05). The redness (Commission Internationale de l'Eclairage a*) of the meat sample of the control group was lower than those of the enriched cage groups (p<0.05). Moreover, the hue value of the CB group was significantly lower than that of the other groups (p<0.05). The tenderest meat belonged to the CB group. In addition, more secondary (p<0.05) and primary follicles were found in the CB group than in the control group. Conclusion: Environmental enrichment increased the average daily gain and improved some carcass traits, meat quality, and hair follicle density. Among the three environmental enrichment materials, CB could be recommended for rabbit husbandry.
Journal of Practical Agriculture & Fisheries Research
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v.16
no.1
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pp.115-122
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2014
Korean native cattles (Han woo) are divided yellow, tiger(blinder), and black by coat color. Chikso has tiger coat color, which cultured about 1,700 heads within Korea. However there were a few researches reported about preservation and production. This study was conducted to investigated that the effect of follicle stimulating hormone (FSH) dosage(240 mg and 280 mg) on the embryo production, pregnancy and calf birth weights. There were no difference total embryo and transferable embryo between FSH 240 mg or 280 mg treatment, but pregnancy rate was increased 46% in embryos derived from 280 mg group than 240 mg group's 29.6%. The birth weight of Chikso calves was similar between artificial insemination(25.6 kg) and embryo transfer(24.8 kg) groups.
Proceedings of the Korean Society of Developmental Biology Conference
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2003.10a
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pp.75-75
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2003
Transition of the resting primordial follicle to the growing primary follicle is a critical process for female reproduction, but its mechanism is poorly understood. The present study was conducted to investigate gene expression profile at the primordial-primary follicle transition process. We isolated total RNA of female mouse ovary at day1 (contains only primordial follicles) and day5 (contains primordial and primary follicles) and synthesized cDNA using annealing control primers (ACP; Seegene, Inc., Seoul, Korea). ACP provides annealing specificity and sensitivity to the template and allows to identify only authentic differentially expressed genes (DEGs). We used total 80 ACPs for PCR, observed PCR products on 2% agarose gel, cloned 42 DEGs using TOPO TA cloning vector, sequenced, and analyzed by BLAST search. Sequences of 34 clones significantly matched database entries while 4 clones were novel and 4 clones were EST. Two of 34 genes were specifically expressed only in day 5 ovaries (Sui1-rs1, Apg3p/Aut1p-like), and rest of 32 genes were expressed in both stages but were differential in amount. Differential expression was confirmed using semiquantitative RT-PCR, and there was no false positive. Anx11 and Pepp2-pending were highly expressed genes in day1-, while BPOZ, Ches1, Kcmf1, NHE3, Nid2, Ninj1, SENP3 and Survivin were highly expressed genes in day5-ovary. List of genes would provide insight for further study of mechanism regulating primordial-primary follicle transition.
Follicular atresia is a universal and characteristic phenomenon of both non-mammalian and mammalian vertebrates. Generally it is estimated that greater than 99% of follicles become atretic in higher domestic animals and human. The number of selected follicles developing to the preovulatory stage are thus fewer. Follicles can become atretic at any stage of development. The previous studies emphasized on descriptive and retrospect aspects of a limited population of the fully grown preovulatory follicle. The main efforts in ovarian physilogical researches are focused on follicular development culminating in ovulation but recent advances have resulted in a better understanding of atresia. Nowadays, recent studies are concentrated on the induction of atresia in a selected population of follicles and of the associated cellular, endocrine, biochemical and molecular changes. The factors initiating atresia and follicle selections are worthy of investigations. Another intriguing question is whether one can predict when a follicle will become atretic, i.e., what biochemical markers indicate that a follicle is destined for atresia. It is generally agreed that atretic process may vary even in antral follicles at different stages of their differentiations and among species. The dicisive factors are follicular responsiveness and the hormonal milieu. Some generalizations can be made on the basis of experimental induction of atresia. Alteration of the pattern of follicular steroid production is associated with the initiation stage of atretic process. Atresia appears to be a process unfolding gradually and affecting progressively in increasing number of functions and components of the follicle. The oocyte may be the latest to be afflicted in the atretic process. The high steroidogenic activity of atretic follicles lends support to the notion that atresia is not necessarily a degenerative process and that atretic follicles may play an essential role in ovarian physiology. The simultaneous occurence of growth and atretic processes may render the search for regulatory mechanisms involved in atresia difficult extremely. The questions such as how follicles are selected to undergo ovulation rather than atresia or what the mechanism of atresia is remain unanswered. However, the factors regulating or modifying ovarian hormonal milieu for the initiation of follicular growth and maturation or of atresia are being elucidated.
The objective of this study was to compare of different isolation method of mouse preantral follicles, and to examine in vitro development of mouse preantral follicles isolated by different method. Preantral follicles were mechanically or enzymatically extracted from mouse ovaries. Mechanical isolation method used fine gauge needles and enzymatic method of isolating follicles used collagenase. The recovered preantral follicles were cultured for 10 days in alpha-minimal essential medium (${\alpha}$-MEM) + 5% FBS + Insulin-Transferrin-Selenium (ITS) + 100 mIU/ml FSH. The collected primary follicles by enzymatic treatment were higher than mechanical method. Others stage preantral follicle by mechanical isolation were higher than enzymatic method. After 10 days of culture, no statistical differences were shown in survival rates of preantral follicle among the 2 culture groups. The metaphase II rates of the oocytes were significantly higher (p<0.05) in mechanical method (17.8%) than in enzymatic method (5.1%). These results suggest that the isolation method of choice depends on the target stage preantral follicles and mechanical isolation is an optimal method of preantral folliclesin a culture of mouse preantral follicle.
Granulosa cells, which surround the oocyte within the ovarian follicle, play an essential role in creating conditions required for the development of oocytes and follicles. The solute carrier family (SLC) is comprised of influx transporters of steroidal hormones, various drugs, and several other substrates. The differential expression of selected DEGs was confirmed using in situ hybridization analysis. SLC23A3 and SLC39A10 were highly expressed in the ovary. The SLC39A10 gene was expressed in the primordial follicle stage, but SLC23A3 was expressed in the growing follicle stage. Contrastingly, the expression of SLC23A3 was increased in granulosa cells at the growing follicle stage. The differential expressions of SLC23A3 and SLC39A10 between the primordial and primary follicles were additionally confirmed by using follicle isolations. The gene expression profile from the present study may provide insight for future studies on the mechanism(s) involved in primordial-primary follicular transition and suggestions to promote follicular development in ovarian dysfunction.
Ji, Mi-Ran;Cheong, Hee-Tae;Yang, Boo-Keun;Lee, Chae-Sik;Park, Choon-Keun
Reproductive and Developmental Biology
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v.34
no.3
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pp.217-221
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2010
When fully grown oocytes are removed from their follicles, they can resume meiosis and mature spontaneously under in vitro conditions. However, nuclear maturation under in vitro condition is not accompanied by complete cytoplasmic maturation, which is essential for successful fertilization and the initiation of zygotic development. This study analyzed change of proteins in follicular fluids during the porcine follicular development. Follicular fluids were collected from follicles of diameter 1~2 mm, 2~6 mm and 6~10 mm in ovary of slaughtered pigs. Total proteins were extracted from follicular fluids by M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent. We confirmed totally 27 same spots, 1 spot from follicle fluid of 2~6 mm follicle and 5 spots from follicle fluid of 6~10 mm in diameter were analyzed by MALDI mass spectrometry and searched on NCBInr. In results, spot No. 28 from 2~6 mm follicle was Ig lambda chain C region, and spot No.32 and 33 from 6~10 mm was Apolipoprotein A-(APOA4). Spot No.29 and 31 were failed to analyze. These results indicate that the porcine oocyte during in vitro maturation depend on specific different expressed proteins may play an important roles in the sequence of molecular events in porcine oocyte maturation and follicular development.
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