The results of our observation in May 2000 indicated that the SeaWiFS algorithm (O'Reilley et al., 1998), which was adopted for OSMI data processing, overestimated the actual chlorophyll values. This was rather unexpected in that there were good reasons to expect that the bio-optical properties of East/Japan Sea belonged to Case 1 water and in such case, the OC2 algorithm would give unbiased estimates of actual chlorophyll a values. In November 2000, a cruise conducted bio-optical surveys in the same area. This time we added HPLC (High Performance Liquid Chromatography) method for measuring chlorophyll a concentration to the standard fluorometric method, which we hale been using during the past Fluorometric method with acidification is known to result in under/overestimation of chlorophyll values in many parts of the world oceans, while it is easier and cheaper than HPLC method. To our surprise, the comparison of HPLC chlorophyll and fluorometric chlorophyll values show that fluorometric values gave an underestimation up to 50%. This error was due to the presence of accessory pigments such as chlorophyll b. Considering this error, our precious result of May 2000(Yoo et al., 2000) might have to be reinterpreted. Calculation of reflectance at 490 and 555nm, however, indicated that this is not still enough to explain the discrepancies.
연폭로자에 있어서 연에 의한 생물학적 영향을 평가하는데는 요중 ${\delta}$-ALA 배설량이 아주 좋은 지표로 이용된다. 현재 이것은 Ehrlich's reagent와 ALA-pyrrole의 증색반응으로 측정하는 비색법이 주로 사용된다. 그러나 이 방법은 aminoacetone 같은 ALA 유사물질에 의하여 요중 배설량이 과다하게 측정된다. 한편 최근 개발된 fluorometric HPLC에 의한 요중 ${\delta}$-ALA 배설량의 분석은 아주 예민하고도 특이적인 것으로 알려져 있다. 따라서 본 연구는 혈중연과 다른 연폭로 지표를 측정하여 연폭로 수준이 다른 117명의 피검자에서 비색법과 HPLC 법에 의한 ${\delta}$-ALA 배설량을 측정하여 두 방법 간의 관련성을 조사하기 위하여 시도하였으며 결과는 다음과 같다. 1. 비색법에 의한 요중의 ${\delta}$-ALA 배설량은 HPLC 법에 비하여 전체적으로 2.15배, 혈중연 $20{\mu}g/dl$ 이하에서 2.47배, $21-40{\mu}g/dl$에서 2.53배, $41{\mu}g/dl$ 이상에서는 1.86배 높은 것으로 측정되었다. 2. 비색법에 의한 요중 ${\delta}$-ALA 배설량과 혈중연 및 혈중 ZPP 농도와의 상관은 0.571, 0.629였으며, HPLC 법은 0.610, 0.637로 통계적 유의성이 있었다(p<0.01). 3. 비색법과 HPLC 법에 의한 요중 ${\delta}$-ALA 배설량 간의 상관은 0.848 이었으며, 요비중으로 보정하였을 때는 0.852였으며 통계적으로 유의하였다(p<0.01). 4. HPLC 법에 의한 요중 ${\delta}$-ALA 배설량을 종속변수로 하고 비색버버을 독립변수로 하였을 때 희기방정식은 (ALA-UHP)=-0.245+0.536 (ALA-UCO)(p<0.0001)였으며, 요비중 1.024로 보정하였을 때의 희기방정식은 (SP ALA-UHP)=-0.525+0.599 (SP ALA-UCO)(p<0.0001)였다. 상기와 같은 결과에서 현행 산업안전보건법 시행규칙에서 연중독 진단을 행하는 경우 HPLC로 요중 ${\delta}$-ALA 배설량을 측정한다면 연중독 진단 기준의 개정이 필요할 것으로 생각된다.
Abundance and distribution of phytoplankton in seawater at southwestern East/Japan Sea near Gampo were investigated by HPLC analysis of photosynthetic pigments during summer of 1999. Detected photosynthetic pigments were chlorophyll a, b, $c_{1+2}$ (Chl a, Chl b, Chl $c_{1+2}$), fucoxanthin (Fuco), prasinoxanthin (Pras), zeaxanthin (Zea), 19'-butanoyloxyfucoxanthin (But-fuco) and beta-carotene (B-Car). Major carotenoid was fucoxanthin (bacillariophyte) and minor carotenoids were Pras (prasinophyte), Zea (cyanophyte) and But-fuco (chrysophyte). Chl a concentrations were in the range of $0.16-8.3\;{\mu}g/land$ subsurface chlorophyll maxima were observed at 0-10m at inshore and 30-50 m at offshore. Thermocline and nutricline tilted to the offshore direction showed a mild upwelling condition. Results from size-fraction showed that contribution from nano+picoplankton at Chl a maximum layer was increased from 18% at inshore to 69% at offshore on average. The maximum contribution from nano+picoplankton was found as 87% at St. E4. It was noteworthy that contribution from nano+picoplanktonic crysophytes and green algae to total biomass of phytoplankton was significant at offshore. Satellite images of sea surface temperature indicated that an extensive area of the East/Japan Sea showed lower temperature ($<18\;^{\circ}C$) but the enhanced Chi a patch was confined to a narrow coastal region in summer, 1999. Exceptionally high flux of low saline water from the Korea/Tsushima Strait seemed to make upwelling weak in summer of 1999 in the study area. Results of comparisons among Chi a from SeaWiFS, HPLC and fluorometric analysis showed that presence of Chi b cause underestimation of Chi a about 30% by fluorometric analysis but overestimation by satellite data about 30-75% compared to HPLC data.
A high-performance liquid chromatographic method with fluorometric detection was evaluated for analysis of ofloxacin in plasma. Biological fluids (plasma, $200\;{\mu}L$) were prepared for assay by protein precipitation with chlorofurm. The detection of ofloxacin and triamterene as an internal standard were performed at 358 nm for excitation and 495 nm for emission. The HPLC separation was carried out on Ultrasphere ODS column (4.6 mm${\times}25\;cm,\;5\;{\mu} m$) with acetonitrile $(45\%)$-phosphoric acid $(1.5\%)\;containing\;0.3\%$ sodium laurylsulfate as the mobile phase. The flow-rate was 1.0 mL/min. The calibration graphs were linear from 3.0 to 80 ng/mL with r=0.998. The minimal detectable concentration in plasma was 1.5 ng/mL. The proposed technique is reproducible, selective, reliable and sensitive.
N-glycanase처리에 의해 얻어진 1-amino-oligosaccharide를 FMOC-Cl로 표식 하는 방법을 확립하였다. 이 방법에 의해 얻어진 FMOC-표식 oligosaccharides는 기존의 방법보다 약 4배의 감도를 나타내었다. Amido 80 column을 사용한 분석에 의하여, Man 5-9 GlcNAc 2 amines의 5개의 성분은 각각 분리되어 용출 되었으며, 회수율은 기존의 방법과 거의 같았다. 1-amino-oligosaccharides는 0.05 pmol에서 1.5 pmol 사이에서 직선적인 관계를 나타내었으며, 2-aminopyridine에 의한 표식과 비교하였을 때, 안정된 화합물을 형성하고 있으며, 감도가 높아 미량의 oligosaccharides의 분석에 매우 적합한 것이 확인되었다.
감성과학에서 인간의 감성을 손쉽게 측정할 수 있는 기술이나 기법 등은 매우 중요한 분야이다. 최근 마음의 변화는 몸의 변화를 수반한다(정신신경증면역내분비학, psychoneuroimmunoendocrinology)는 전제하에 인간 감성을 체액을 통해서 측정하는 시도가 이루어지고 있다. 몸의 변화 중에 최근까지 가장 많이 연구된 것은 스트레스에 관한 것으로 이를 측정하는 지표로는 코티졸(cortisol)이라는 물질이 널리 알려져 오고 있다. 코티졸을 측정하는 기존의 방법을 열거하면 High Performance Liquid Chromatography (HPLC), fluorometric assay, reverse phase chromatography 등이 대표적인데 모두 시간이 많이 걸리고 가격이 비싸며 휴대용이 아니기에 POCT (point of care testing)에 적합하지 않다. 이에 본 연구진은 소형 초고주파 공진 소자를 만들어 타액 속의 코티졸을 측정할 수 있는 항체를 고정하고 이것이 코티졸과 결합할 때 나오는 공진신호를 읽음으로써 환자의 타액 속 코티졸을 쉽고 빠르게 측정할 수 있는 기법을 소개한다. 본 연구를 위해 제안된 공진소자는 밀리미터 크기의 소자로서 제작이 용이하며 간단한 형태이다. 최종적으로 소자표면상에 결합되는 코티졸 농도변화(100, 10, 1, 0.1 ng/ml)에 따라 거의 선형적인 주파수응답(11, 10, 9, 7 MHz) 특성을 보인다. 100 pg/ml에 해당하는 적은 코티졸의 양까지 거의 실시간에 가까운 빠른 시간 안에서 쉽게 검출이 가능하며, 뿐만 아니라 표지(labeling)가 필요 없는 장점을 가지고 있다. 이러한 농도에 따른 주파수 변화를 기반으로 하는 코티졸 감성지표센서는 무선단말시스템에 적용될 수 있는 가능성과 응용성을 가지고 있다.
4종류의 남해안 해면 Galichondria sp., H. okadai, H. japonica 및 Haliclona permollis 중의 항균, 항곰팡이 물질을 paper disk plate법으로 검색하였다. 항균물질은 4종류의 해면에 모두 존재하였으나 항곰팡이 물질은 Halichondria sp.와 H. okadai의 $CH_2Cl_2$와 BuOH구에만 나타났다 이들 두 종류의 해면(184kg)을 아세톤으로 추출하여 각종 column을 이용하여 정제 후 핵자기공명 및 질량분석 등 각종 기기분석을 통하여 benzoic acid, okadaic acid(OA), dinophysistoxin-1(DTX1)의 3성분을 항균, 항곰광이 물질로 동정하였다. 한천 배지상에서의 OA및 DTX1의 미생물 생육저지능력은 비슷하였으며 특히 곰팡이에 대하여 저지효과가 크게 나타났다. 9-Anthryldiazomethane(ADAM)을 이용한 형광 HPLC법을 개발하여 해면중의 OA 및 DTX1을 분석한 결과 이들 성분은 H. okadai 및 Halichondria sp. 에만 존재하였다. 또한, 이들 두 종류의 해면중의 함량은 습중양 1kg당 OA가 $550{\~}600{\mu}g,\;DTX1$이 $400{\~}490{\mu}g$이었다.
Food poisoning accident occurred on May, 1996 at Oepo, Geoje County, Kyeongnam Province, Korea, and two persons were died within a few hours after ingestion of the soup prepared with wild mussel, Mytilus edulis, harvested on the sea rock. Paralytic shellfish poisons (PSP) were elucidated as the responsible toxins for the food poisons accident because the wild mussels caught after three days at the near place from the accident contained high toxicity of PSP ranged $650\~1000MU/g$ of edible meat by mouse bioassay. Gonyautoxin-1+4 $(42.7\%)$ and C1+C2 $(40.0\%)$ were detected as the major toxins in the mussels by fluorometric HPLC method. Although, the poison extracted out with drip during freezing and thawing, and the toxicity gradually decreased by boiling for 20 minutes, over 30 MU/g of toxins remained in the soup and meat, which indicated that they could be able to make food poisoning.
We have employed chemical modification to identify amino acids essential for the catalytic activity of alliinase (EC 4.4.1.4) from garlic (Allium sativum). Alliinase degrades S-alkyl-L cysteine sulfoxides, causing the characteristic odor of garlic. The activity of alliinase was rapidly and completely inactivated by N-bromosuccinimide(NBS) and slightly decreased by succinic anhydride and N-acetylimidazole. These results indicate that tryptophanyl, lysyl, and tyrosyl residues play an important role in enzyme catalysis. The reaction of alliinase with NBA yielded a characteristic decrease in both the absorbance at 280 nm and the intrinsic fluorescence at 332 nm with increasing reagent concentration of NBS, consistent with the oxidation of tryptophan residues. Kinetic analysis, fluorometric titration of tryptophans and correlation to residual alliinase activity showed that modification of only one residue present on alliinase led to complete inhibition of alliinase activity. To identify this essential tryptophan residue, we employed chemical modification by NBS in the presence and absence of the protecting substrate analogue, S-ethyl-L-cysteine (SEC) and N-terminal sequence analysis of peptide fragment isolated by reverse phase-HPLC. A fragment containing residues 179-188 was isolated. We conclude that Trp182 is essential for alliinase activity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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