Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a technique to visualize specific DNA/RNA sequences within the cell nuclei and provide the presence, location and structural integrity of genes on chromosomes. A confocal Whole Slide Imaging (WSI) scanner technology has superior depth resolution compared to wide-field fluorescence imaging. Confocal WSI has the ability to perform serial optical sections with specimen imaging, which is critical for 3D tissue reconstruction for volumetric spatial analysis. The standard clinical manual scoring for FISH is labor-intensive, time-consuming and subjective. Application of multi-gene FISH analysis alongside 3D imaging, significantly increase the level of complexity required for an accurate 3D analysis. Therefore, the purpose of this study is to establish automated 3D FISH scoring for z-stack images from confocal WSI scanner. The algorithm and the application we developed, SHIMARIS PAFQ, successfully employs 3D calculations for clear individual cell nuclei segmentation, gene signals detection and distribution of break-apart probes signal patterns, including standard break-apart, and variant patterns due to truncation, and deletion, etc. The analysis was accurate and precise when compared with ground truth clinical manual counting and scoring reported in ten lymphoma and solid tumors cases. The algorithm and the application we developed, SHIMARIS PAFQ, is objective and more efficient than the conventional procedure. It enables the automated counting of more nuclei, precisely detecting additional abnormal signal variations in nuclei patterns and analyzes gigabyte multi-layer stacking imaging data of tissue samples from patients. Currently, we are developing a deep learning algorithm for automated tumor area detection to be integrated with SHIMARIS PAFQ.
A telesounder is a device that can monitor the appearance of fish in the sea on land and store fish detection data. This study was conducted to monitor the appearance of fish resources in coastal or near seas by using LTE communication for data transmission of the telesounder. The purpose of this study was to develop a prototype telesounder that can monitor the appearance of fish groups in the waters about 50 km away from the coast and store fish detection data. In this study, the prototype telesounder including a fish finder, communication device and battery for stable operation at sea was developed. The stability of telesounder buoy, data transmission/reception and expected use time were investigated. The expected use time of the telesounder using LTE communication with a lithium battery (12 V, 120 Ah) was about 274 hours under the conditions of 10 minutes off and 10 minutes on, about 520 hours under the conditions of 30 minutes off and 10 minutes on, and about 142 hours under continuous conditions. As a result of the sea test, it was found that the telesounder can be used in the sea area moved about 34 km from the land and the telesounder buoy was evaluated to have secured basic stability (buoyancy balance, waterproof, antenna strength, etc.) for operation in a marine environment.
Single-cell gel electrophoresis (comet assay) was used to detect DNA single strand break in blood cells from several marine fish species. Three fish species were collected from Georgia coastal area. Mummichog, Fundulus heteroclitus showed higher DNA damage than sea bass, Lateolabrax japonicus and trout, Oncorhynchus masou masou under the same experimental conditions. Mummichogs had more alkaline-labile sites on their DNA than other fish species. The comet assay with mummichog blood cells at pH 12.5 showed a dose-response curve with the increasing concentrations of hydrogen peroxide. While the isolated leucocytes showed no increase of DNA damage after in vitro exposure to 2-methyl-1,4-naphthoquinone (MNQ), erythrocytes showed dose-dependent DNA damage. These results indicate that the comet assay can be applied successfully as a bioassay using erythrocyte for environmental monitoring.
Chromosome rearrangements induced in human lymphocyte after in vitro exposure to chromium were analysed by the use of fluorescence in situ hybridization(FISH) with triple combination of composite whole chromosome-specific probe for chromosome 1, 2 and 4. Chromosome aberrations was scored by the Protocol for Aberration Identification and Nomenclature Terminology (PAINT). Stable translocation was the most frequent type of aberrations and dicentrics and insertions were also observed. Chromium treatment enhanced the frequencies of stable translocations and color junctions in a dose-dependent manners, but no distinct increase of dicentrics and insertions was seen. The ratio of the yields of translocation to the yields of dicentric varied between 13 to 27. The presents results demonstrate fluorescent in situ hybridization (FISH) is useful for detecting chromosomal rearrangements induced by chromium.
An analytical method was developed for the determination of phenol (P) and the seven substituted phenols in water samples and fish tissue samples collected from three streams located in eastern Gangwon State in spring and summer. The phenols were extracted and then derivatized to phenyl acetates using acetic anhydride. The derivatives were subsequently identified and quantified using gas chromatography coupled with mass spectrometry. P and 4-nitrophenol (4NP) were found at relatively high levels in water, ranging from below the method detection limit (MDL) to 3.32 ㎍/L and from < MDL to 4.91 ㎍/L, respectively. P and 4NP were also the dominant compounds in the fish tissue, ranging from < MDL to 407 ㎍/kg and from < MDL to 870 ㎍/kg, respectively. Phenol concentrations were significantly higher in spring than in summer. The ecological risk quotient calculated for P was higher than 4NP but not high enough to pose any risk of adverse effects to fish health.
2000년 1 월부터 2000년 10월까지 가두리 양식장에서 Vibrio vulnificus를 검출하였고 이들의 억제 방법을 연구하였다. 이 세균의 검출은 선택적 분리법과 vvhA 유전자를 확인하는 방법을 이용하였다. V. vulnificus는 수온이 $17^{\circ}C$이상인 5월부터 검출되었고 $19^{\circ}C$ 이상인 6월부터 9월까지는 대부분의 시료에서 검출되었다. V. vulnificus를 제어하기 위한 방법 중 냉동 및 냉장 처리는 살균효과를 나타내지 못했다. Citric acid도 균의 생장을 억제하지 못했으나, 500 mg/1이상의 EDTA가 첨가될 경우 균이 완전히 사멸되었다. 분말 광촉매인 산화티타니움은 자외선을 조사할 경우 15분~1 시간 이내에 이 세균을 완전히 사멸시키는 효과를 나타내었다. 산화티타니움을 유리 구슬에 코팅한 광촉매 장치를 이용하여 0.2/min의 turnover rate로 사멸효과를 얻었다.
We develop a time-temperature indicator (TTI) that can determine whether thawing of fish and other fishery products has occurred during frozen storage. A polypropylene tube with an internal diameter of 3 mm was prepared and cut to a length of 14 to 20 mm. One end of the tube was thermally sealed and 0.1% acetic acid was injected into the other end; the tube was then frozen at $20^{\circ}C$. Then the open side of the frozen tube was blocked by sinking the tube into a 10% gelatin solution. The tube was attached to a polyvinyl packaging bag along blue litmus paper and the bag was put into a freezer at $-20^{\circ}C$. After freezing, the bag was removed to an ambient temperature of $20^{\circ}C$, and the time dependence of the color change of the litmus paper was observed. The color changed from blue to red, with the length of the red region increasing with time. Our TTI can be used as a part of a visible detection system and the detection program can conduct the elapsed time analysis on the length of the red region of the litmus paper indicating the degree of thawing. Thus, the TTI is a useful tool in the temperature management of frozen fish and fishery products.
어류의 감염 조직으로부터 edwardsiellosis의 원인균인 Edwardsiella tarda를 whole cell 자체로 직접 검출할 수 있는 solid phase ELISA법을 연구하였다. A. hydrophila ATCC7966, V. anguillarum HUFP5001, Y. ruckeri 11-4, E. ictaluri 및 Streptococcus sp. NG8206 등의 어병세균에 대해 ELISA법으로 실시한 교차반응 분석에서 A. hydrophila ATCC7966 균주와 V. anguillarum HUFP5001 균주가 E. tarda Edk-2에 대한 토끼 항혈청에 대해 높은 교차반응을 나타내었으나, 항혈청을 A. hydrophila ATCC7966 FKC로 흡착시킴으로써 교차반응을 제거할 수가 있었다. 그러나, 응집항체가 측정 결과와는 달리, ELISA 분석에서는 E. tarda 분리 균주간의 교차반응이 매우 높은 것으로 나타났다. Tissue homogenate내에 있는 항원을 검출함에 있어, 조직내의 지질이나 단백질 성분이 함께 분석용 plate에 coating되어 감도가 훨씬 감소하므로 ELISA법의 적용을 위해서는 감염 조직의 homogenate를 PBS에 100배 이상 희석한 후 진단을 실시해야 하는 것으로 나타났다. Tissue homogenate내에 있는 생균을 항원으로 하여 직접 검출할 때에는 검출한계가 $1{\times}10^3$ cells/ml로 나타나 FKC 항원의 사용에 비하여 더 증가된 감도를 보여주었다. 결론적으로 본 ELISA법은 양식장에서 발생한 edwardsiellosis를 진단함에 있어서 특이적이고 신속하며 민감한 방법으로 확인되었다.
The distributions of sanitary indicative bacteria and pathogenic bacteria in seawater and four species of farmed fishes, including oliver flounder (Paralichthys olivaceus), black rock fish (Sebastes schlegeli), red sea bream (Pagrus major) and sea bass (Lateolabrax japonicus), collected at fish farms located in the southern coastal area of Korea were investigated from May to October in 2004. The detection rates of fecal coliform and Entirococcus spp. of sanitary indicative bacteria in all samples were $38.9\%$ and $23.8\%$, respectively. The occurrence of fecal coliform was highest of $58.3\%$ in Busan, Geoje and Wando area, followed Yeosu $33.3\%$, Jeju $12.5\%$, Tongyeong $11.1\%$. The occurrence of Enterococcus spp. was highest In Wando area ($45.8\%$), followed by Yeosu ($33.3\%$), Tongyeong ($22.2\%$), Busan ($16.7\%$), Geoje and Jeju ($12.5\%$). The detection rate of fecal coliform was higher than that of Enterococcus spp., except in the Tongyeong area. There was no difference in the detection rate of fecal coliform from May to October, but the detection rate of Enterococcus spp. increased with seasonal warming seawater temperature. Among the pathogenic bacteria, the detection rate of Vibrio alginolyticus ($49.2\%$) in all samples was highest, followed by V. parahaemolyticus ($36.5\%$), Staphylococcus aureus ($6.3\%$), Salmonella sp. ($2.4\%$). However, V cholerae, V. vulnificus and Shigella sp. were not detected in all tested samples. The detection rates of V. parahaemolyticus and V. alginolyticus increased with seasonal warming seawater temperature from May to August.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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