• 한국응용과학기술학회지
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• 제3권1호
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• pp.15-22
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• 1986

The purpose of this study was to investigate the effects of garlic diet on blood coagulation in cholesterol-fed rats. 36 male rats were divided into six groups and fed experimental diet for three weeks. Two-levels (2% and 4%) of fresh and boiled garlic were supplemented to the stock diet with 2% cholesterol and 0.25% bile salt for the experimental diet. After the rats fed with experimental diets during 3 weeks, the whole blood coagulation time, the content of plasma fibrinogen, the fibrinolytic activity and the prothrombin time were measured. The results are summarized as follows; 1. Garlic diet have no influence on body weight and food consumption in rats. 2. In the case of cholesterol-fed group, the whole blood coagulation time was decreased 24.3% compared with the normal group(A). But garlic diet group(C) was similar to the normal group(A) and groupD-F was increased 4.9-11.5%. 3. The content of plasma fibrinogen of cholesterol-fed group was higher 114.5% than that of normal gropu(A). In the garlic diets(C-F) the contents of plasma fibrinogen were increased 33.1-63.8%. 4. The fibrinolytic activity of cholesterol diet was decreased 16.2% compared with the normal group(A) but was increased 10.9-44.5% compared to the garlic diets(C-F). 5. The prothrombin time of cholesterol-fed group was decreased 8.9% compared with normal group(A) but was increased 8.0-46.3% in garlic diets(C-F). As mentioned above, the garlic diets increased whole blood coagulation time, prothrombin time and fibrinolytic activity and decreased the content of fibrinogen. For that reason it is thought that the garlic diets have a anticoagulation effect regulating the fibrinogen synthesis in liver.

• 한국양봉학회지
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• 제33권4호
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• pp.303-306
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• 2018

Drones of honeybee (Apis mellifera) have been regarded as a useful value only when mating with queen bee. However, the drone pupae have been reported to be nutritionally valuable, and a potential beekeeping product. In this study, drone pupae extracted with 5% acetic acid were used to measure anti-thrombosis related fibrinolytic activity using Strup and Mullertz fibrin plate method. As a result, the drone pupae extract showed higher effect of fibrinolytic activity(clear zone diameter 20.83mm) compared to the human plasmin (clear zone diameter 12.93mm) used as a positive control. It was suggested that the extract of drone pupae can be developed as a functional material helping prevention or treatment of various vascular diseases.

• 생명과학회지
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• 제15권6호
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• pp.987-993
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• 2005

마른 볏짚으로부터 fibrinolytic enzyme (BK)을 분비하는 균주를 분리하여 동정한 결과, Bacillus subtilis속으로 분류되었다. 분리된 균주(Bacillus subtilis BK-17를 배양하여 그 배양액으로부터 에탄올 침전, ion exchange, gel filtration 등의 과정을 거쳐 fibrinolytic enzyme (BK)를 분리 및 정제하였다. 이 정제된 효소를 SDS-PACE gel 전기영동한 결과 분자량은 약 31 kDa 이었다. BK의 활성 및 안정성에 대한 pH의 영향을 조사해본 결과, pH $6\∼8$범위에서 매우 높았고, 최적 pH는 7과 8이었다. 본 효소의 활성 및 안정성에 대한 최적 온도는 $50^{\circ}C$이었으며, $20^{\circ}C\∼50^{\circ}C$범위에서는 안정성이 그대로 유지되었지만 $60^{\circ}C\∼80^{\circ}C$범위에서는 현저히 감소하여 $50^{\circ}C$에 비해 $20\%\∼40\%$의 활성을 보였다. BK에 대한 활성 역시 안정성과 비슷한 양상을 보였고, 다만 $20^{\circ}C$에서 약 $62\%$의 활성을 보였고, 그 이후 $50^{\circ}C$까지 지속적으로 증가하여 $50^{\circ}C$에서 최대의 활성을 보였다. 실험한 금속이온들 중 1 mM의 $Zn^{2+}$와 $Ca^{2+}$에서 각각 $35\%$와 $23\%$의 저해활성을 보였지만 나머지 이온들에서는 의미 있는 영향이 없었다. 동일농도의 EDTA에 대해서는 $45\%$의 저해활성을 보였기 때문에 BK는 metallo enzyme으로 생각된다. Fibrinogen-rich fibrin plate 와 plasminogen-free fibrin plate에서의 분해활성을 검토해본 결과, 두 plate에서 비슷한 분해활성을 보였다. 따라서 본 효소는 plasminogen activator type 보다는 fibrin에 직접 활성을 가지는 것으로 생각된다.

• 한국생명과학회:학술대회논문집
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• 한국생명과학회 2006년도 제47회 학술심포지움 및 추계국제학술대회
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• pp.118.2-118.2
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• 2006

• 생명과학회지
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• 제15권3호
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• pp.434-438
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• 2005

멸치 액젖을 이용하여 ammonium sulfate침전, ion exchange, gel filtration, ethanol침전등의 과정을 거쳐 혈전분해 효소(myulchikinase, MK)를 분리 및 정제하였다. 이 정제된 효소를 SDS-PACE gel 전기영동한 결과 분자량은 약 28 kDa 이었다. MK의 활성에 대한 특성을 조사한 결과 NaCl $30\%$까지 활성이 $80\%$이상 유지되는 것으로 보아 내염성 효소로 판단된다. 온도에 대한 효소활성을 조사한 결과, MK의 온도에 대한 안정성은 $40^{\circ}C$까지는 안정하였으나 $50^{\circ}C$이상의 온도에서는 급격하게 활성 떨어졌고, 최적온도는 $40^{\circ}C$였다 MK의 활성은 $pH6\~9$범위에서 매우 안정하였고, 최적 pH는 8이였다. 또한 2가 금속 양이온에 대한 효과는 $Hg^{2+} (1mM)$에 의하여 완전히 활성저해를 보였고, $Zn^{2+}(1mM)$에 의하여 약 $50^{\circ}C$의 저해되는 것을 알았다. Fibrinogen-rich plate와 Fibrinogen-free plate에서 활성을 측정 한 결과, Fibrinogen-rich plate에서는 fibrin 분해능이 있었지만 Fiberinogen-free Plate에서는 분해활성이 없는 것으로 보아 본 효소는 plasminogen activator type의 혈전용해효소로 사료된다.

• 농업과학연구
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• 제36권1호
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• pp.111-122
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• 2009

부들 화분(포항(蒲黃))의 혈전 용해능을 검토하기 위하여 부들 화분을 물 추출하여 혈전 분해능이 있음을 확인하였다. 부들 화분의 혈전용해효소를 DEAE-cellulose, Sephadex G-150을 이용한 gel filteration, HPLC로 정제하여 acrylamide gel electrophoresi로 정제를 하였다. 정제효소는 HPLC와 전기영동에 의하여 순수하게 정제되었음을 확인하였고 비활성은 38U/mg로서 정제도는 86.4배이었고 분자량은 75kDa이었다. 정제효소의 최적 pH는 4.0이었고 pH 4.0-6.0에서 안정하였으며 정제효소의 최적온도는 $55^{\circ}C$이었고 $30-60^{\circ}C$에서는 안정하였으나 $70^{\circ}C$ 부터 활성이 현저히 저하하여 $80^{\circ}C$ 이상에서는 완전히 실활하였다. 기질특이성은 fibrin을 가장 잘 분해하였고 fibrin, whole casein, ${\kappa}$-casein, ${\alpha}$-casein, ${\beta}$-casein, BSA순으로 나타났다. Casein을 기질로 하였을 때 Km value는 0.44 mM 이었으며 casein에 대한 친화력이 높은 것으로 나타났다. 효소활성에 미치는 금속이온의 영향은 $K^+$, $Na^+$, $Mg^{2+}$ 등은 효소반응에 영향을 미치지 않았으나 $Zn^{2+}$, $Fe^{2+}$는 심하게 저해작용을 나타내었고 정제효소는 PMSF, iodoacetic acid 및 SDS에 의하여 심하게 저해되는 것으로 보아 serine protease로 추정되었다.

• 한국식품과학회지
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• 제41권6호
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• pp.687-693
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• 2009

잊혀져가고 있는 전통주의 우수함을 알리고자 한국의 전통 반가주인 삼해주를 제조하고 시판되고 있는 곡주와 비교 실험하며, 생리활성 및 세포독성에 관한 연구를 진행하였다. 기존의 문헌에 소개된 방법을 변형하여 3가지 종류의 삼해주를 제조하였으며, 시중에서 곡주 5종을 구입하여 실험하였다. DPPH 라디칼 제거능과 아질산염 소거능은 곡주 G가 가장 뛰어났으며, ABTS 라디칼 제거능은 삼해주가 가장 우수하였다. 삼해주 중에서는 C 시료가 DPPH 라디칼 제거능, 아질산염 소거능, ABTS 라디칼 소거능이 가장 뛰어났다. 혈전용해능의 경우 삼해주 A-C가 13-17U로 다른 곡주에 비해 그 활성이 높게 나타났다. 각 시료에 대하여 10-160배까지 단계적으로 희석하여 HeLa, A549, L-132 세포에 처리하였을 때, 인체유래 자궁암 세포주인 HeLa 세포의 경우 10배 희석액에서 삼해주가 강한 세포 독성을 보였고, A549 세포의 경우 10배 희석액에서 삼해주의 세포독성 효과가 크나 시료에 따라 그 편차가 심하였다. L-132의 경우 10배 희석액에서 삼해주의 세포독성 효과가 다른 시료에 비해 강하였으나, 다른 암세포에 비해 약한 것을 알 수 있다. 본 연구의 결과에 의하면 삼해주에 존재하는 미지의 약리 성분이 생리 활성 및 암세포의 성장에 영향을 미치는 것으로 판단되었다. 이는 삼해주 제조 시 사용된 누룩과 오랜 발효 기간에 의한 영향으로 생각되며, 누룩에 대한 연구가 더 진행되어야 할 것으로 여겨진다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제28권2호
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• pp.275-283
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• 2018

Ischemic stroke can result from blockage of blood vessels, forming fibrin clots in the body and causing irreparable brain damage. Remedial thrombolytic agents or anticoagulants have been studied; however, because the FDA-approved tissue plasminogen activator has low efficacy and side effects, it is necessary to develop safer and more effective treatment candidates. This study aimed at assessing the fibrinolytic and anticoagulation features of a novel serine protease extracted and purified from Diopatra sugokai, a polychaeta that inhabits tidal flats. The purified serine protease was obtained through ammonium sulfate precipitation, affinity chromatography, and ion-exchange chromatography. Its molecular size was identified via SDS-PAGE. To characterize its enzymatic activities, the protease activity at various pH and temperatures, and in the presence of various inhibitors, was measured via azocasein assay. Its fibrinolytic activity and anticoagulant effect were assessed by fibrin zymography, fibrin plate assay, and fibrinogenolytic activity assays. The novel 38 kDa serine protease had strong indirect thrombolytic activity rather than direct activity over broad pH (4-10) and temperature ($37^{\circ}C-70^{\circ}C$) ranges. In addition, the novel serine protease exhibited anticoagulant activity by degrading the ${\alpha}$-, ${\beta}$-, and ${\gamma}$-chains of fibrinogen. In addition, it did not produce cytotoxicity in endothelial cells. Therefore, this newly isolated serine protease is worthy of further investigation as a novel alkaline serine protease for thrombolytic therapy against brain ischemia.

• 한국식품영양과학회지
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• 제36권4호
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• pp.395-399
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• 2007

각종 미네랄과 무기염류의 함량이 풍부한 것으로 알려진 함초를 이용하여 발효 후 그에 따른 기능성을 검토해 보고자 하였다. 유산균 접종 후 pH는 초기 4.50에서 발효 후 2.84로 변했으며, 산도는 초기 0.29에서 발효 후 0.55로 증가하였다. 한편 생균수를 측정한 결과 초기 $1.2{\times}10^{11}CFU/mL$이었던 생균수는 발효 72시간 후 $1.4{\times}10^{13}CFU/mL$를 보였다. 함초 추출물 발효액을 동결건조시킨 후 그에 따른 기능성을 검토하였으며 SOD-유사활성과 DPPH-라디칼 소거능 측정결과, 농도 의존적인 경향을 보였으며 혈전분해능 측정결과 발효 전의 함초 추출물에서는 나타나지 않았던 혈전분해능을 발효 후 동결건조분말 25%의 시료 농도에서 plasmin $3.84{\mu}g/mL$의 농도와 동일한 수준의 혈전용해능을 보였다.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제28권7호
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• pp.816-822
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• 2005

Catharsius protease-2 (CPM-2) was isolated from the body of dung beetles, Catharsius molossus, using a three step purification process (ammonium sulfate fractionation, gel filtration on Bio-Gel P-60, and affinity chromatography on DEAE Affi-Gel blue). The purified CPM-2, having a molecular weight of 24 kDa, was assessed homogeneously by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The N-terminal amino acid sequence of CPM-2 was composed of X Val Gin Asp Phe Val Glu Glu lie Leu. CPM-2 was inactivated by $Cu^{2+}\;and\;Zn^{2+}$ and strongly inhibited by typical serine proteinase inhibitors such as TLCK, soybean trypsin inhibitor, aprotinin, benzamidine, and ${\alpha}_1$-antitrypsin. However, EDTA, EGTA, cysteine, $\beta$-mercaptoethanol, E64, and elastatinal had little effect on enzyme activity. In addition, antiplasmin and antithrombin III were not sensitive to CPM-2. Based on the results of a fibrinolytic activity test, CPM-2 readily cleaved $A{\alpha}-$ and $B{\beta}$-chains of fibrinogen and fibrin, and y-chain of fibrinogen more slowly. The nonspecific action of the enzyme resulted in extensive hydrolysis, releasing a variety of fibrinopeptides of fibrinogen and fibrin. Polyclonal antibodies of CPM-2 were reactive to the native form of antigen. The ELISA was applied to detect quantities, in nanograms, of the antigen in CPM-2 protein.