• 한국식품과학회지
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• 제44권5호
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• pp.600-606
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• 2012

콩을 소재로한 전통 발효식품으로부터 혈전용해능이 뛰어난 균주를 분리하였으며, B. subtilis로 동정되었다. 따라서 이를 B. subtilis IDCC 9204(특허균주기탁: KCTC-11471 BP), 그 혈전용해 효소는 NK-IL9204로 명명하였다. B. subtilis IDCC 9204가 생산하는 고역가의 NK-IL9204를 단백질 분석법에 기초하여 분석한 결과, 분자량은 27.7 kDa의 homogenous enzyme으로 확인되었다. 또한 기존에 알려진 일본의 발효식품인 낫도 유래의 B. subtilis var. natto가 생산하는 nattokinase 와의 sequence 분석을 진행한 결과, 99.5% homology가 일치하는 serine protease계열의 nattokinase로 확인되었다. 그러나 NK-IL9204는 물리 화학적인 조건에서 B. subtilis var. natto가 생산하는 nattokinase와 다소 차이를 나타내었으며 본 실험에서는 B. subtilis var. natto가 생산하는 nattokinase보다 상대적으로 높은 열 안정성과 pH 안정성을 나타내었다. In vitro 실험에서 NK-IL9204는 최적 반응온도 $40^{\circ}C$, 열 안정성은 $90^{\circ}C$까지 효소활성을 유지하였으며, 최적 반응 pH는 pH 8로 알칼리-혈전용해효소의 특성을 나타내었으며, 약산성에서 강알칼리 영역까지 넓은 pH 구간 안정성을 갖는 것이 특징이다. NKIL9204의 in vivo에서의 효능과 생체 내 안정성을 동물실험을 통해 확인한 결과, 생체 내에서도 혈전용해효소의 활성이 소실되지 않고 유지되며, 혈전분해와 관련된 생체 내 인자들을 활성화시키는 역할을 하는 특징을 갖는다. NK-IL9204는 30,000 FU/g 이상의 고역가를 달성하여 산업적 측면에서 생산성도 확보함으로써 수입의존적 원료를 국산화할 수 있을 것으로 예상된다.

• Maxillofacial Plastic and Reconstructive Surgery
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• 제33권5호
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• pp.375-384
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• 2011

Purpose: The advent of microsurgical technique and instruments, particularly in the field of perforator flap and supermicrosurgery, which have expanded the scope of microsurgery. However, supermicroanastomosis without any compression, tension, or distortions must be achieved to reach successful outcomes. Small-caliber vessels, such as those with an internal diameter less than 0.2 mm, are susceptible to inadvertent twisting of the anastomosis. In this study, using the superficial inferior epigastric artery (SIEA)-based flap model in Sprague-Dawley (SD) rats, we evaluated the acceptable limits of twisting effects on supermicroanastomotic sites. Methods: A total of 20 supermicroanastomoses were performed using the SIEA-based flap model in 10 male SD rats, 10-weeks-of-age, weighing 300~350 g. Rats were divided into five groups of two with four flaps as follows: 1) sham, 2) control group with end to end SIEA arterial supermicroanastomosis, 3) experimental I (EA1) with $90^{\circ}$ twisting, 4) experimental II (EA2) with $180^{\circ}$ twisting, and 5) experimental III (EA3) with $270^{\circ}$ twisting of the supermicroanastomosis. Each SIEA was anastomosed using six 11-0 $Ethilon^{(R)}$ (Ethicon Inc. Co., NJ, USA) stitches except in the sham group where the SIEA was only clamped with Supermicro vascular $clamps^{(R)}$ (S&T, Neuhausen, Switzerland) for 20 minutes. Results: The anastomosed arterial patency showed no remarkable changes according to doppler waveforms measured with a Smardop 45 Doppler System (Hadeco Inc., Kawasaki, Japan). The pulsatility index (PI) was increased at postoperative day 10 in the EA2 and EA3 groups, and the resistance index (RI) showed no statistically significant difference between preoperative and postoperative values at 10 days. Histologic specimens from the EA3 group showed increased tunica media necrosis, convolution of the internal elastic lamina, densely packed platelets, fibrin, and erythrocytes. Flap viability and anastomosed vessel patency were not significantly affected by the degree of arterial twisting in this study, other than in the EA3 group where minor effects on arterial patency of the microanastomoses were encountered. Conclusion: It appears that minor twisting on small caliber arteries, used in supermicroanastomoses, can be tolerated. However, twisting should be avoided as much as possible, and more than $180^{\circ}$ twisting must be prevented in clinical practice.

• 생명과학회지
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• 제22권6호
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• pp.823-827
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• 2012

본 연구에서는 된장으로부터 혈전용해효소(subtilisin CP-1) 생산 균주를 단리하여 16S rRNA 유전자 분석과 생화학적 분석을 통하여 동정하여 Bacillus sp. CP-1로 명명하였으며, TSB와 LB 배지를 이용하여 혈전용해효소의 생산에 적합한 Bacillus sp. CP-1 배양 배지에 대하여 검토하였다. 그 결과 균주 생육과 균주 유래 전체 단백질의 생산에는 LB 배지가 더욱더 효과적임에 반해 높은 혈전용해효소 활성은 TSB 배지에서 Bacillus sp. CP-1 배양하였을 때 얻어졌다. Bacillus sp. CP-1의 배양 상층액의 fibrin zymography에 의한 분석에서 gel상의 상단 부분에 하나의 명확한 혈전용해 활성을 확인하였으며, 분자량은 약 29-30 kDa으로 추정되며, pH 9.0와 $45^{\circ}C$에서 최적의 효소활성을 보였다. 그리고, 기질 특이성 검토에 있어서는 chymotrypsin에 대한 특이적 기질인 Meo-Suc-Arg-Pro-Tyr-pNA (S-2586)에 대하여 가장 높은 기질 특이성을 나타내었다. Subtilisin CP-1단백질의 N-말단 염기 서열을 분석한 결과 처음 8개가 AQSVPYGI로 분석되었으며 이 배열은 subtilisin NAT및 E와 동일하였다.

• 한국임상수의학회지
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• 제30권1호
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• pp.41-44
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• 2013

4년령 중성화한 수컷 시츄견이 우안에 녹는 궤양이라는 기왕력으로 전북동물의료센터에 내원했다. 안과 검사결과 우안에 각막 전체의 70%에 해당하는 각막 연화를 동반한 각막 천공이 관찰되었다. 또한 홍채 탈출과 섬유소 응괴가 각막 천공 중앙부에서 관찰되었다. 좌안의 위협 반사와 대광 반사는 정상이었다. 각막 결손 부위가 너무 컸기 때문에 각결막 판을 이용한 방법이나 각막 직접 봉합을 배제하였으며 말양막이식술을 시행하기로 결정했다. 말양막은 각막 윤부에 전체 각막을 다 덮을 수 있도록 9-0 나일론 봉합사를 이용하여 봉합을 실시했다. 양막이식 후 79일 째 육아조직과 색소침착이 다소 남아있었으나 우안의 위협 반사와 눈부심 반사는 모두 정상이었다. 비록 색소 침착과 육아조직이 각막에 남아있기는 했지만 개에서 말양막이식술은 녹는 궤양으로 기인한 각막 천공에서 시행해 볼 수 있는 유용한 치료법으로 생각된다.

• Journal of Chest Surgery
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• 제40권12호
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• pp.855-858
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• 2007

승모판막 치환술 후 발생하는 좌심실파열은 치명적인 합병증이다. 30년 전 국외에서 승모판막에 대한 수술을 받은 병력이 있는 54세 여자 환자가 심한 승모판막 협착증과 심한 삼첨판막 폐쇄부전을 주소로 내원하여 승모판막 치환술 및 삼첨판막륜 성형술을 시행받았다. 심폐기 이탈 후 수술장 내에서 발생한 대량출혈로 심폐기 재가동 상태에서 평가한 결과 좌심방으로부터 3 cm 후방부위의 방실 골짜기에서 발생한 급성 제I형 좌심실 파열로 진단하고 심외막 접근법으로 테프론 펠트를 이용한 일차 봉합술, 심막첨포를 이용한 밀봉 봉합술 및 피브린 접착제를 적용하여 성공적으로 봉합하였으며 환자는 수술 14일째 합병증 없이 퇴원하였다. 이에 승모판막 치환술 후 발생하는 제I형 좌심실 파열에 대한 문헌고찰과 함께 증례를 보고하고자 한다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제55권2호
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• pp.167-174
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• 2017

China still has more than 30,000 patients of advanced schistosomiasis while new cases being reported consistently. D-dimer is a fibrin degradation product. As ascites being the dominating symptom in advanced schistosomiasis, the present study aimed to explore a prediction model of ascites with D-dimer and other clinical easy-achievable indicators. A case-control study nested in a prospective cohort was conducted in schistosomiasis-endemic area of southern China. A total of 291 patients of advanced schistosomiasis were first investigated in 2013 and further followed in 2014. Information on clinical history, physical examination, and abdominal ultrasonography, including the symptom of ascites was repeatedly collected. Result showed 44 patients having ascites. Most of the patients' ascites were confined in the kidney area with median area of $20mm^2$. The level of plasma D-dimer and pertinent liver function indicators were measured at the initial investigation in 2013. Compared with those without ascites, cases with ascites had significantly higher levels of D-dimer ($0.71{\pm}2.44{\mu}g/L$ vs $0.48{\pm}2.12{\mu}g/L$, P=0.005), as well ALB (44.5 vs 46.2, g/L) and Type IV collagen (50.04 vs $44.50{\mu}g/L$). Receiver operating characteristic curve analyses indicated a moderate predictive value of D-dimer by its own area under curve (AUC) of 0.64 (95% CI: 0.54-0.73) and the cutoff value as $0.81{\mu}g/L$. Dichotomized by the cutoff level, D-dimer along with other categorical variables generated a prediction model with AUC of 0.76 (95% CI: 0.68-0.89). Risks of patients with specific characteristics in the prediction model were summarized. Our study suggests that the plasma D-dimer level is a reliable predictor for incident ascites in advanced schistosomiasis japonica patients.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제25권11호
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• pp.1944-1953
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• 2015

A novel alkaline protease from Streptomyces sp. M30, SapHM, was purified by ammonium sulfate precipitation, hydrophobic interaction chromatography, and DEAE-Sepharose chromatography, with a yield of 15.5% and a specific activity of 29,070 U/mg. Tryptic fragments of the purified SapHM were obtained by electrospray ionization quadrupole time-of-flight mass spectrometry. Nucleotide sequence analysis revealed that the gene sapHM contained 1,179 bp, corresponding to 392 amino acids with conserved Asp156, His187, and Ser339 residues of alkaline protease. The first 24 amino acid residues were predicted to be a signal peptide, and the molecular mass of the mature peptide was 37.1 kDa based on amino acid sequences and mass spectrometry. Pure SapHM was optimally active at 80℃ in 50 mM glycine-NaOH buffer (pH 9.0), and was broadly stable at 0-50℃ and pH 4.0-9.0. The protease relative activity was increased in the presence of Ni²⁺, Mn²⁺, and Cu²⁺ to 112%, 113%, and 147% of control, respectively. Pure SapHM was also activated by dimethylformamide, dimethyl sulfoxide, Tween 80, and urea. The activity of the purified enzyme was completely inhibited by phenylmethylsulfonyl fluoride, indicating that it is a serine-type protease. The K_m and V_max values were estimated to be 35.7 mg/ml, and 5 × 10⁴ U/mg for casein. Substrate specificity analysis showed that SapH was active on casein, bovine serum albumin, and bovine serum fibrin.

• Maxillofacial Plastic and Reconstructive Surgery
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• 제30권5호
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• pp.457-464
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• 2008

Purpose: The aim of this study was to evaluate the clinical results of implants which were installed with maxillary sinus elevation by using lateral window technique. Materials and methods: We performed the maxillary sinus elevation by lateral window technique to 87 patients who visited Dept. of Oral & Maxillofacial Surgery, Chonnam National University Hospital from January, 2003 to January, 2007. When the residual bone height was from 3 mm to 7 mm, the sinus elevation and simultaneous implant installation was mostly performed. When the residual bone height was less than 3 mm, the sinus elevation was performed and the delayed implant installation was done after 5 or 6 months. No artificial membranes were used for coverage of the lateral bony window site and freeze dried fibrin sealant was applied to the grafted bone. The mean follow-up period was 28.5 months (ranged from 10 months to 48 months) Results: 1. Unilateral sinus elevations were performed in 51 patients and bilateral sinus elevations were performed in 36 patients. And the total number of sinus elevation procedure was 123 cases. 2. The sinus elevation and simultaneous implant installation was performed in 89 sinuses and 249 implants were installed. The sinus elevation and delayed implant installation was performed in 44 sinuses and 141 implants were installed. The total number of implants were 390 in 133 sinuses. The average healing period after sinus elevations was 6.1 months in delayed implant installation. 3. Only autogenous bone, autogenous bone mixing with allografts or autogenous bone mixing with xenografts were used as graft materials. 4. The average period from first surgery to second surgery was about 7.2 months. 5. Some patients complications, such as perforation of sinus membrane, swelling, infection and exposure of cover screw. Two implants were removed in the infected sinus. 6. The survival rate of implants with maxillary sinus elevation by lateral window technique was 99.5% and the success rate of implants was 95.1%. Conclusions: These results indicated that the implants which were installed with maxillary sinus elevation by lateral window technique showed high survival and success rates.

• KSBB Journal
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• 제14권6호
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• pp.724-730
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• 1999

본 연구에서는 인뇨에서 분리 정제한 urokinase와 유전자 재조합 CHO(Chinese Hamster Ovary) 세포 배양액으로부터 분리 정제한 pro-urokinase의 물리화학적 특성과 혈액 내에서의 효소활성을 비교 분석하였다. Two chain form인 urokinase와 single chain form인 pro-urokinase를 각각 순수 분리한 후, electrophoresis한 결과 모두 54 kd의 단일밴드를 나타냈다. 그러나 urokinase는 환원시켰을 때 33 kd과 21 kd으로 나누어짐을 확인하였으나 gel filtration결과 분자량이 54 kd 정도임을 확인되어 용액 내에서 단일분자로 존재함을 알 수 있었다. Urokinase와 pro-urokinase가 물리화학적으로 거의 동일한 구조를 가졌다는 사실은 isoelectro focusing에 의한 pI 값이 모두 8.6으로 동일하다는 점과, 아미노산 조성을 분석한 결과 동일하다는 사실로도 알 수 있었다. N-terminal 아미노산 서열을 분석한 결과, urokinase는 이중사슬구조이므로 N-terminal이 두개 존재하여 pro-urokinase의 서열(Ser-Asn-Glu-Leu-His-Gln-Val-Pro-Ser-Asn)이외에도, 159번째의 Ile다음부터 Ile-Gly-Gly-Glu-Phe-Thr-Thr-Ile-Glu가 같은 peak로 나타남을 확인하였다. 효소활성 조사결과 pro-urokinase와 urokinase는 모두 농도 의존적으로 혈전용해 활성을 보였으나, 특이하게도 짧은 반응시간동안에는 urokinase가 동일 농도 하에서 강한 활성을 보인 반면, 2시간이 지난 오랜 반응조건에서는 pro-urokinase가 혈전용해활성을 나타내었다. Fibrinogen에 대한 분해활성을 조사한 결과, urokinase는 혈장 내 fibrinogen을 상당히 손상시키지만, pro-urokinase는 거의 영향을 주지 않아 혈전선택성이 매우 좋음을 알 수 있었다.

• 한국버섯학회지
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• 제13권3호
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• pp.192-198
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• 2015

잎새버섯으로 준비된 물 추출물과 유기용매 분획물의 혈전용해활성과 트롬빈저해활성, acetylcholinesterase 저해활성, 항산화활성 및 면역활성을 확인하였다. 물 추출물과 물 분획물은 각각 1.55 plasmin unit와 0.85 plasmin unit의 높은 혈전용해활성을 나타내고, 물 분획물과 에틸 아세테이트 분획물은 76.43%와 72.59%의 트롬빈저해활성을 나타냈다. 클로로포름 분획물과 헥산 분획물이 95.14%와 94.74%의 높은 acetylcholinesterase 저해활성을 나타냈으며, 부탄올 분획물과 물 추출물이 94.47%와 91.04%의 항산화활성을 나타냈다. 부탄올 분획물과 물 분획물이 각각 2배 이상의 높은 면역기능활성을 나타냈다. 실험 결과로부터 잎새버섯의 분획물은 높은 혈전용해활성, 트롬빈 저해활성, acetylcholinesterase 저해활성 및 면역 기능활성을 나타내 심혈관계 질환과 치매의 예방 및 면역 기능강화를 위한 기능성식품 개발에 이용할 수 있을 것으로 사료된다.