A strain named as HJ35 was isolated from the skin of sixty-five men and fourteen women for acne therapy, in order to find an effective antimicrobial agent against Propionibacterium acnes. Isolate HJ35 was identified as Enterococcus faecium based on 16 rDNA sequence and produced enterocin HJ35 having antimicrobial activities against most lactic acid bacteria, Enterococcus spp., Staphylococcus aureus, S. epidermidis, Clostridium perfringens, some bacilli, Micrococcus flavus, Listeria monocytogenes, L. ivanovii, Escherichia coli, Pseudomonas fluorescens and Propionibacterium acnes, in the modified well diffusion method. Especially, enterocin HJ35 showed a bactericidal activity against Propionibacterium acnes P1. The antimicrobial activity of enterocin HJ35 was disappeared completely with the use of protease XIV. But enterocin HJ35 activity is very stable at high temperature (up to $100^{\circ}C$ for 30 min), in wide range of pH (3.0${\~}$9.0), and by treatment with organic solvents. The apparent molecular mass of enterocin HJ35 was estimated to be approximately 4${\~}$4.5 kDa on detection of its bactericidal activity after SDS-PAGE. In batch fermentation of E. faecium HJ35, enterocin HJ35 was produced at the midlog growth phase, and its maximum production was obtained up to 2,300 AU/mL at the late stationary phase. By employing fed-batch fermentation, the enhanced production of enterocin HJ35 was achieved up to 12,800 AU/mL by feeding with 10 g/L glucose or 6 g/L lactate.
A UVmutant of Candida rugosa IF00750 was made and used to convert butYlic acid to D-$\beta$-hydroxybutyric acid(D-$\beta$-HBA). Major regulating factors for D-$\beta$-HBA fennentation were investigated via chemostat analyses. The maximum specific productivity was achieved at a specific growth rate of $0.06h^{-1}$ where the glucose and butyric acid concentrations in the fermentor were 10 g/L and 8.7 g/L. respectively. A fed-batch fennentation was performed with maintenance of the optimum glucose and butyric acid concentrations. The D-$\beta$-HBA concentration after 120 h of cultivation reached 12.4 g/L, which was 4.7 times greater illan the concentration obtained by batch fermentation.
Two-stage fed-batch culture of Candide tropicalis that was designated primarily to cultivate the cell in the glucose medium (1st stage) and then produced the xylitol from xylose medium (2nd stage) was developed to improve a xylitol yield and productivity. In the growth stage, glucose was automatically supplied to the fermentor by pH-stat mode when the pH was up 5.7, When a feeding medium was added in order to reach the glucose and yeast extract concentrations up to 100 and 40 g/L, respectively, a high cell concentration and a relatively low ethanol concentration were obtained in 18.5 h culture. In the production stage, initial xylose concentration of 150 g/L was the most favorable for obtaining the final xylitol concentration and productivity. The addition of mineral salts was also enhanced a xylitol production. But the aeration rate was not significantly affected a xylitol production. When the addition of 16 g yeast extract and 232.5 g xylose powder at the production stage was used, xylitol yield and productivity were significantly increased. With these conditions, xylitol concentration, yield and productivity of 108.9 g/L, 74%) and 3.3 g/L·h, respectively, were obtained in a final volume of 1.58 L. The further addition of 16 g yeast extract and 232.5 g xylose powder increased the working volume partly (1.67 L) and resulted in a relatively high xylitol concentration, yield and productivity of 193 g/L, 70% and 3.6 g/L·h, respectively.
Sodium gluconate was produced by neutralization of gluconic acid formed during the submerged culture fermentation of glucose with Aspergillus niger ACM 7. The fermentation characteristics of Aspergillus niger ACM 7 were investigated quantitatively according to the change of the initial glucose concentrations and the initial pHs of fermentation broth. The maximum specific growth rate was estimated to be $0.20hr^{-1}$ at 95g/$\ell$ of initial glucose concentration. The maximum fermentability of sodium gluconate was 95% at the initial glucose concentration of 26g/$\ell$. However, the maximum sodium gluconate productivity was 1.18g/$\ell$/hr when the initial glucose concentration was 110g/$\ell$. The optimum pH was found to be 5.5 for both the cell growth and the sodium gluconate production. With optimized culture conditions, the productivity of sodium gluconate in a fed-batch culture(production fermentor, 16,000$\ell$) increased up to 7.1g/$\ell$/hr.
To maximize the production of aminoglycoside-3'-phosphotransferase of E. coli ATCC 21990 carrying R factor which encodes aminoglycoside-3'-phosphotransferase (APH(3')) phosphorylating the 3'-hydroxyl group of aminoglycoside, mutants M1 and M2, media composition and several factors affecting the enzyme production during fermentation were studied. Although the specific activity of APH(3') produced by a mutant M1 was increased as much as four times than that of E. coii ATCC 21990, the growth rate was decreased. The increase of the enzyme production was obtained by increased biomass during fermentation. A mutant M2 was obtained to increase the cell growth rate. Mutant M2 cells were cultivated with optimal media and pure oxygen gas in a fed-batch mode of fermentor operation. The specific activity of APH(3') was decreased, but total enzyme activity of APH(3') was increased as much as two point five times than that of mutant MI.
The medium compositions of Alcaligenes eutrophus were optimized for increasing PHB productivity. It is very important to optimize the concentrations of inorganic salts and trace eleme- nts as well as carbon and nitrogen sources to maximize cell growth rate and productivity. The fed-batch culture of Alcaligenes eutrophus by dual feeding of ammonia water and glucose under optimized initial medium concentrations was carried out. Glucose was fed manually according to glucose consumption rate and ammonia water by pH-stat. The final cell concentrations and PHB content in 30 hours were 122 g/l and 65% of dry cell weight(yielding 79 g of PHB/l), respectively and 2.64 g/l/hr of PHB production rate was obtained.
Recombinant human epidermal growth factor (rhEGF) was produced by E. coli BL2l (DE3) harboring a plasmid pYHB101. The production of rhEGF was 44.5 mg/L when the E. coli BL2l (pYHB101) was cultured at 27$^{\circ}C$ for 48 hr in the modified MBL medium containing 10 $\mu\textrm{g}$/L glucose with 10 $\mu\textrm{m}$ IPTG/lactose induction at 2 hr after inoculation. It was shown that lactose is able to induce the rhEGF expression of E. coli BL2l (pYHB101) with the same efficiency as IPTG. In the batch culture system, when induced with 10 $\mu\textrm{m}$ lactose, E. coli BL2l (pYHB101) produced maximum 45 mg/L of the rhEGF at 28 hr culture in the modified MBL medium containing 10 g/L glucose. In the semi-fed batch culture system, the volumetric yield was 160 mg/L when the culture was added with 0.5% (w/v) lactose and 0.25% (w/v) yeast extract in the late logarithmic phase and 94.3% of rhEGF was secreted as soluble form. However, when the culture was added with them in the early logarithmic phase, the volumetric yield was 120 mg/L and 20.9% of rhEGF was found in cytoplasmic insoluble aggregates. It was found that the addition time of lactose was important for production of soluble rhEGF from E. coli BL21 (pYHB101).
The possibility for developing multistage culture system to cultivate larvae by computer simulation with basic experiments was investigated. This culture system was composed of 3 stages. At the 1st stage, Chlorella sp. were cultivated and at 2nd stage Chlorella sp. were supplied to rotifer (Brachionus plicatilis), and rotifer were supplied to larvae at the 3rd stage. In this study, Chlorella sp. were cultivated by batch culture to search for the possibility of continuous feeding to rotifer at 2 nd stage. The maximum specific growth rate ($\mu$$_{max}$) of Chlorella sp. at the logarithmic phase was 0.56 [1/day]. Rotifer was cultivated by fed-batch culture at the feeding rate of Chlorella sp., $10^3$, $10^4$, $10^{5}$ and $10^{6}$ [cells/rotiferㆍh] to search for the relation between the feeding rate of Chlorella sp. and the growth rate of rotifer. As the results, the minimum feeding rate of Chlorella sp. was 2.8 ${\times}$$10^4$ [cells/rotiferㆍday] in the multistage culture system, then the change of rotifer concentration at 2nd stage was simulated by computer. The required amount of rotifer for the growth of larvae was also increased as the growth of larvae. On the 9th day of the culture, the rotifer uptake rate of larvae was 250 [cells/rotiferㆍday]. Based on these basic experiments and results, It was suggested that the possibility of multistage culture system to cultivate larvae with continuous feeding of Chlorella sp. and rotifer.r.
The methylotrophic yeast Pichia pastoris is one of the best host for the production of foreign proteins because of the presence of the strong AOX1 promoter induced by methanol. Methanol feeding induces the protein production and provides energy sources for the host cells. However, excess methanol inhibits the growth of host cells, while an insufficient methanol lead to poor growth and protein production. We have used various controled methanol feeding strategies to obtain the maximum proteins.
A carriersupported mycelial growth of Sreptomyces erythreus was applied to erythromycin fermentation sistem using celite as a support material. Hyphal growth through the pore matrices of the materials showed anchorages and provided a stable biofilm growth. When the phospate concentration was limited to 0.8g corn steep liquor/L(corresponding to 40mg KH2PO4/L), the specific production rate of erythromycin was increased from 557$\mu$g/g-cell.hr under unlimited condition to 2, 898 $\mu$g/g-cell.hr. A fluidized-bed bioreactor was operated for erythromycin production by a repeated fed-batch mode. The control of free mycelial concentration and the extension of production phase were considered important to maintain the reactor productivity at a desired level. The erythromycin production under phosphate-limited condition could be maintained for at least 600hrs.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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