Piliated Lactobacillus rhamnosus (pLR) strains possess higher adherent capacity than non-piliated strains. The objective of this study was to isolate and characterize probiotic pLR strains in human fecal samples. To this end, mouse polyclonal antiserum (anti-SpaA) against the recombinant pilus protein (SpaA) of L. rhamnosus strain GG (LGG) was prepared and tested for its reactivity and specificity. With the anti-SpaA, a method combining the de Man, Rogosa, and Sharpe (MRS) agar plating separation and colony immunoblotting (CIB) was developed to isolate pLR from 124 human fecal samples. The genetic and phenotypic characteristics of the resultant pLR isolates were compared by randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) fingerprinting, and examination of adhesion to Caco-2 cells, hydrophobicity, autoaggregation, and in vitro gastrointestinal tolerance. Anti-SpaA specifically reacted with three pLR strains of 25 test strains, as assessed by western blotting, immunofluorescence flow cytometry, and immunoelectron microscopy (IEM) assays. The optimized MRS agar separation plus anti-SpaA-based CIB procedure could quantitatively detect $2.5{\times}10^3CFU/ml$ of pLR colonies spiked in $10^6CFU/ml$ of background bacteria. Eight pLR strains were identified in 124 human fecal samples, and were confirmed by 16S RNA gene sequencing and IEM identification. RAPD fingerprinting of the pLR strains revealed seven different patterns, of which only two isolates from infants showed the same RAPD profiles with LGG. Strain PLR06 was obtained with high adhesion and autoaggregation activities, hydrophobicity, and gastrointestinal tolerance. Anti-SpaA-based CIB is a rapid and inexpensive method for the preliminary screening of novel adherent L. rhamnosus strains for commercial purposes.
The distributions of sanitary indicative bacteria and pathogenic bacteria in seawater and four species of farmed fishes, including oliver flounder (Paralichthys olivaceus), black rock fish (Sebastes schlegeli), red sea bream (Pagrus major) and sea bass (Lateolabrax japonicus), collected at fish farms located in the southern coastal area of Korea were investigated from May to October in 2004. The detection rates of fecal coliform and Entirococcus spp. of sanitary indicative bacteria in all samples were $38.9\%$ and $23.8\%$, respectively. The occurrence of fecal coliform was highest of $58.3\%$ in Busan, Geoje and Wando area, followed Yeosu $33.3\%$, Jeju $12.5\%$, Tongyeong $11.1\%$. The occurrence of Enterococcus spp. was highest In Wando area ($45.8\%$), followed by Yeosu ($33.3\%$), Tongyeong ($22.2\%$), Busan ($16.7\%$), Geoje and Jeju ($12.5\%$). The detection rate of fecal coliform was higher than that of Enterococcus spp., except in the Tongyeong area. There was no difference in the detection rate of fecal coliform from May to October, but the detection rate of Enterococcus spp. increased with seasonal warming seawater temperature. Among the pathogenic bacteria, the detection rate of Vibrio alginolyticus ($49.2\%$) in all samples was highest, followed by V. parahaemolyticus ($36.5\%$), Staphylococcus aureus ($6.3\%$), Salmonella sp. ($2.4\%$). However, V cholerae, V. vulnificus and Shigella sp. were not detected in all tested samples. The detection rates of V. parahaemolyticus and V. alginolyticus increased with seasonal warming seawater temperature from May to August.
본 연구는 국내 배추 주산단지 5지역을 대상으로 배추재배에 활용되는 농업용수를 각 지역의 수확 시기에 채취하여 위생지표세균(총대장균군, 대장균, 장구균)과 이화학 성분을 분석함으로써 농업용수의 수질의 오염도를 조사하기 위하여 수행되었다. 그 결과 지하수 보다 지표수에서 위생지표세균이 높은 수준으로 검출되었다. 지표수의 경우 총대장균군 1.96-4.96 log MPN/100 mL, 지하수의 경우 0-3.98 log MPN/100 mL 수준이었다. 장구균의 경우 지표수에서 95% (72/75), 지하수에서 22% (8/36) 빈도로 검출되었으며, 대장균의 경우 지표수에서 100% (72/75), 지하수에서 22% (8/36) 빈도로 검출되었다. 위생지표세균과 이화학성분의 상관관계를 조사한 결과, 지표수의 경우 대장균군과 대장균은 총인과 상관성을 보였으며, 장구균은 부유물질과 생물학적산소요구량에 상관성을 보였다. 지하수의 경우 위생지표세균은 부유물질과 화학적산소요구량에 상관성을 보였다. 본 연구의 결과는 엽채류 재배에 사용되는 농업용수의 미생물 기준을 설정하기 위한 기초자료로 활용될 수 있을 것으로 판단된다.
참굴(Crassostrea gigas) 수하식양식에 있어 상층과 저층 그리고 조석에 따른 해수 및 굴의 위생학적 성상에 관한 변화를 조사하였으며 본 연구는 미국국제연맹처(AID) 연수계획에 의하여 Washington주 Burley Lagoon 뗏목 수하식 양식장에 대하여 실시되었다. 해수의 수온, 염분 및 탁도는 저층이 상층보다 다소 높았고 그 차이는 수온 $0.3^{\circ}C$, 염분 $0.5\%_{\circ}$, 탁도 0.1 JTU 있다. 조석에 따를 수온 및 염분의 변화는 대체로 조석 주기에 일치하는 기복상을 보였다. 해수의 위생지표미생물 함양은 상층이 저층보다 대체로 높았고 일반적으로 Coliform MPN 및 Fecal coliform MPN의 변화는 조고에 역비례하고 있어 이들 미생물군의 출처는 이 해역으로 유입하는 하천임을 알 수 있다. $35^{\circ}C$ Plate count는 조석 변동에 대하며 보다 안정하였다. 굴에 있어 Coliform 및 Fecal coliform MPN의 평균치는 상층굴이 저층보다 일반적으로 높은 값을 시현하였으나 $35^{\circ}C$ Plate count는 이와 같은 경향을 나타내지 않았다. 해수에서와 같이 굴에 있어서도 Coliform 및 Fecal coliform MPN의 평균치는 양자 모두 호고에 역상관관계를 나타내었고 조사기관중 굴의 세균축적비는 Coliform MPN은 $8.6\~19.7$, Fecal coliform MPN은 $16.9\~44.3$이였다. 이상의 결과로서 굴수하식 양식에 있어 패류위생관리상 중요한 것은 창호시에 굴을 채취하는 것이 미생 지표 세균의 함량이 보다 낮다는 것을 들 수 있다.
비만은 우리 건강에 악영향을 미치며, 비만율은 전 세계적으로 증가하고 있어 그에 따라 비만을 예방하기 위한 많은 연구들이 진행되고 있다. 최근, 비만과 장내미생물 간의 상관관계가 많이 보고되고 있다. 장내미생물생태를 조사하기 위한 샘플은 분변 또는 맹장을 선택하고 있는데, 샘플 유형(분변 및 맹장)에 따라 미생물생태 결과에 미치는 영향에 대한 일반적인 이해가 없는 실정이다. 본 연구에서 마우스를 고지방 식이 섭취로 비만을 유발하여 식이 조절에 따른 분변 및 맹장의 장내미생물생태를 비교했다. 일반 식단(ND) 및 고지방 식단(HFD)은 6주령 ICR 마우스가 12주 간 섭취하도록 하였으며, 분변 및 맹장 샘플로부터 추출한 DNA에서 16S rRNA 유전자를 증폭하여 MiSeq으로 시퀀싱했다. 𝛼-diversity 결과는 식이 조절과 샘플 종류에 따라 장내미생물생태가 크게 영향을 받는다는 것을 보여준다. 분변과 맹장의 장내미생물생태의 taxonomic composition의 차이는 Family, Genus 수준에서 명확하게 확인되었다. Genus 수준에서 Faecalibaculum과 Lactobacillus는 맹장과 분변 샘플에서 각각 많은 것으로 나타났다. 일반적으로, 식단의 종류는 식이 조절을 적용한 연구 모델에서 샘플의 출처보다 미생물생태 변화에 더 상당한 영향을 미친다. 그러나, 장내미생물생태 분석 결과는 식단과 샘플의 종류(분변/맹장)를 모두 고려하여 신중하게 해석되어야 한다.
Objectives: This study was performed in order to detect indicator bacteria in drinking spring water (DSW) samples in Seoul Metropolitan City, and to identify their genus through 16S rRNA sequencing and then assessing the genetic relation of their strains. Methods: For indicator bacteria detection and identification of total coliforms, we analyzed DSW between the spring and summer seasons. In particular, DSW samples were chosen from sites repeatedly found unsatisfactory in recent years. Results: Heterotrophic plate counts of DSW in the spring and summer season were investigated in the range of 0-550 and 0-800 CFU/mL, respectively. Total coliforms of these were 0-1,900 and 0-2,100 CFU/100mL, fecal coliforms were 0-600 and 0-550 CFU/100mL, and Escherichia coli were 0-7 and 0-326 MPN/100mL. The detection ratio of fecal pollution indicators and that of fecal coliforms increased to 58.6% in the summer from 12.5% in the spring and Escherichia coli increased to 51.4% from 4.7%. As a result of genetic analysis on the isolated bacteria, the genus of total coliforms was classified in the order of Enterobacter spp. 12.7%, Serratia spp. 7.3%, E. hermanii 6.4%, Rahnella spp. 5.5%, Hafnia spp. 4.5%, Escherichia coli 3.6%, Klebsiella spp. 3.6% in the spring season. In the summer season, it was classified in order of Klebsiella spp. 16.6%, Enterobacter spp. 13.0%, Escherichia coli 11.0%, Serratia spp. 8.6%, Raoultella spp. 7.0%, Kluyvera spp. 5.6% and Citrobacter spp. 3.0%. Conclusions: The increase of fecal pollution in summer indicates that special attention to drinking DSW is required.
The influences of inland pollution sources because of rainfall events on the bacteriological water quality in Geoje Bay, a major shellfish production area in Korea, were investigated. The sanitary status of sea water and shellfish after rainfall events was also evaluated. The flow rates of 13 streams around Geoje Bay showed 6 to 7-fold increases after 15 to 21 mm of rainfall. Peak pollution was observed in the Naegan Stream, the Gandeok Stream and the Seojeong Stream. The calculated impact area of inland pollution sources was 3.1 $km^2$ immediately after 15 mm of rainfall and expanded to 3.5 $km^2$ after 24 hours. These calculations of impacted area matched results from fecal coliform analyses with sea water. The distance between the major pollution source in the bay (the Gandeok Stream) and the station with the worst bacteriological water quality immediately after 15 mm of rainfall, which was below the Korean standard, was 0.8 km in a straight line; this distance increased to 2.0 km after a period of 24 hours. The area impacted by inland pollution sources after a 15 mm rainfall event was wider than after a 21 mm rainfall. Although the flow rate from inland pollution sources was higher, the concentration of fecal coliform in the discharged water was lower after higher rainfall events. These observations corresponded with the results of fecal coliform analyses with sea water samples. According to the evaluation of the influences of inland pollution sources and fecal coliform analyses on sea water and shellfish samples in Geoje Bay, pollutants from inland sources did not reach the boundary line of the shellfish growing area after rainfall events of 15 or 22 mm. The bacteriological water quality of the shellfish growing area in Geoje Bay met the Korean standard and US NSSP requirements for approved shellfish growing areas.
Bacteriological examination of a 12,700 ha area within Jaranman Saryangdo area, located in Jaran bay and Saryangdo island, was conducted with 35 fixed (designated areas and adjacent areas) seawater sampling stations between January 2006 and December 2008. According to results, the geometric mean range and the estimated 90th percentile range of fecal coliform counts in sea water samples collected in the designated area were <1.8-2.4 and <1.8-8.6 MPN/100mL, respectively. The estimated 90th percentile range of fecal coliform counts in sea water samples collected from 6 sampling stations in the adjacent areas were 6.1-34.6 MPN/100mL. Based on these results, bacteriological water quality of the designated areas in the Jaranman. Saryangdo area meet the NSSP (National Shellfish Sanitation Program) guidelines for approved area. The bacteriological sea water quality in Jaranman.Saryangdo area has been shown to be favorable at all investigated sampling stations except for July and August which coincided with heavy rainfall. In fact, the bacteriological water quality was not affected if rainfall was less than 30 mm rainfall. However, the degree of bacteriological contamination increased rapidly and the water quality exceeded approved NSSP guidelines set for rainfall above 60 mm.
A Sanitary survey in an Important shellfish-growing area of Biin Bay in Seocheon-gun Korea, was conducted to evaluate bay conditions and compliance with the bacteriological criteria for areas designated for the production of shellfish for export. Seawater samples were collected monthly at 55 sampling stations established in the survey area from January 2006 to December 2008. Bacteriological water quality did not change in response to a small rainfall (10.0 mm), but it increased abruptly in response to rainfall to 62.5 mm The most probable number (MPN) value for total coliforms and fecal coliforms in 1, 980 seawater samples ranged from <1.8 to >1, 600 MPN/100mL and from <1.8 to 330 MPN/100mL, respectively. The geometric mean and estimated $90^{th}$ percentile value for total coliforms ranged from 2.0 to 10.3 MPN/100mL and from 7.0 to 42.6 MPN/100mL respectively. The geometric mean and estimated percentile value for fecal coliforms ranged from 1.8 to 4.0 MPN/100mL and from 1.9 to 18.3 MPN/100mL, respectively. Accordingly, the bacteriological water quality of Biin Bay met the National Shellfish Sanitation Program (NSSP) and Korea Shel1fish Sanitation Program(KSSP) criteria for areas designated for shellfish production for export in Korea.
The seawater in the Taean area was surveyed to evaluate the conditions of the bay and compliance with the bacteriological criteria for a designated area for shellfish production for export. Samples of seawater were collected monthly at 34 sampling stations established in the survey area from January 2002 to December 2004. The bacterial density in the coastal area close to a pollution source located to the northeast of the survey area was higher than in the open sea to the west. The bacteriological counts in the water did not change with 16.5mm of rainfall, but increased abruptly after 65.4mm of rainfall. The total coliform and fecal coliform most probable numbers (MPNs) of 1,224 seawater samples in the survey area were <1.8-2,400 and <1.8-790 MPN/100 mL, respectively. The geometric mean and estimated 90th percentile of total coliforms were 1.9-3.4 and 2.7-26.3 MPN/100mL, respectively, and for fecal coliforms were <1.8-2.6 and 1.8-12.0 MPN/100mL, respectively. The bacteriological water quality in the Taean seawater area met the National Shellfish Sanitation Program criteria for an approved area and the Korea Shellfish Sanitation Program criteria for a designated area for shellfish production for export.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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