Je, Yeon-Ho;Jin, Byung-Rae;Roh, Jong-Yul;Chang, Jin-Hee;Kang, Seok-Kwon
대한바이러스학회지
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제29권3호
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pp.145-153
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1999
We have now constructed a novel recombinant baculovirus Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcNPV) producing polyhedra with Bacillus thuringiensis (Bt) CryIAc crystal protein. The recombinant polyhedra produced by the recombinant baculovirus, Btrus, in insect cells was characterized. The recombinant baculovirus has two independent transcription units in opposite orientations with two promoters, p10 or polyhedrin gene promoter each initiating transcription of either native polyhedrin or fusion protein with polyhedrin and Bt Cry1Ac crystal protein. Surprisingly, this recombinant baculovirus stably produced recombinant polyhedra which were nearly similar to those of wild-type AcNPV. The immunogold staining experiment showed that the recombinant polyhedra were assembled with polyhedrin and Bt Cry1Ac crystal protein, and contained virus particles. Insecticidal toxicity of recombinant polyhedra of Btrus to the fall webworm, Hyphantria cunea, was strikingly improved in comparison with the wild-type AcNPV.
해충의 미생물적 방제를 위하여 Bacillus thuringiensis 살충제(BT제) 개발에 관한 기초자료를 얻고자 3균주의 공시균주인 B. thuringiensis var. kurstaki, B. thuringiensis var. dendrolimus, B. thuringiensis var. aizawai와 3종의 공시충으로 누에, 흰불나방, 배추흰나비의 유충을 이용하고 B. thuringiensis 내독소단백질을 alkalidyddor 또는 공시된 3종의 곤충소화액으로 처리하여 전기영동을 비교하여 아래와 같은 결과를 얻었다. 1. 3균주의 B. thuringiensis에서 생산된 내독소단백질은 alkali 또는 곤충의 소화액 처리에 따라서 변화되는 뚜렷한 차이가 없는 것으로 나타났다. 2. 각 균주의 내독소단백질의 분자량은 B. thuringiensis var. aizawai가 130kDa, B. thuringiensis var. kurstaki가 140kDa, 130kDa, 그리고 B. thuringiensis var. dendrolimus가 140kDa의 부분에 2band로 나타났으며, 이들 내독소단백질은 alkali 용액이나 숙주곤충의 소화액으로 처리시 활성화되어 40-65kDa의 저분자 단백질로 전환되었다. 또한 숙주곤충소화액에 따라 내독소단백질의 활성화 속도에 약간의 차이가 있는 것으로 확인되었다.
The work on the 'Studies of radiosensitivity' in Korea has been initiated since 1959 by the author at various institutions in home and foreign countries, and more than 20000 of plant materials in 73 varieties and 41 kinds are treated under varied conditions for the studies of radiosensitivity in plants. However, a study of the susceptibility to radiation in insect pests as well as their biological effects has not been previously reported in this country. During the year of 1964 and 1965, near 50000 of insects at the stages of adult, egg, larva and pupa in 14 different kinds are irradiated under acute X and gamma rays to investigate the behavior of growth and lethality after irradiation, and thrir general tolerances to radiations are compared by the kind of insects, stage of growth, radiation sources and exposured dosages. Through the experiments, it is shown that the lethality in most of insects are high as several kilo roentgens above and no significant effects on pupation. emergence, and oviposition in the treated generation at the dose of 3 Kr. below, but in the following generation , the rice stem borer for instance, no oviposition or decreased laying is observed from the dosages at 3 Kr. to 1 Kr., and the hatching was possible from 1.5 Kr. below of irradiated larvae although laying and hatching are seemed in normal. In general, the lethal dose $50\%$ of tested infect materials at the larval stage can he classified some what 60-80 Kr. for Pine caterpillar, Fall webworm, Camphor silk moth and their relatives, at 40-60 Kr. for Gypsy moth, Monley prominent and some relatives and at 20-30 Kr. for House fly, Rice weevil, Pine sawfly etc. Plant parasitic nematodes such as Hirschmannia and Paratylenchus shown very high resistance to radiation and the LD-50 is observed from 100 Kr. or above. A concept to evaluate the radiosensitivity in insects by taxological family line as a practical measure is not answerable yet, but it ran he solved within the near future through the continuing experiments.
본 연구는 우리나라 주요 산림해충중 흰불나방, 오리나무잎벌레 및 솔잎혹파리 방제 대책의 일환으로 미생물 병원체를 조사하고져 실시하였다. 흰불나방에서 분리된 징충물은 핵다각체 Virus와 Bacillus sp. 일종이엇는데 살충효과는 무처리 $27.8\%$에 대해 각각 $70.6\%$와 $49.5\%$로서 핵다각체 Virus의 경우가 우수하였다. 오리나무잎벌레에서는 세균과 진균 각 1종씩 분리되었는데 그중 진균만이 병원성을 보였으며 이는 백강균의 1종인 Beauveria bassiana로 동정되었고 이 균의 살충력은 무처리구 $49.2\%$에 비해 $96.2\%$의 높은 비율을 나타내었다. 솔잎혹파리에서는 모두 15종의 미생물이 분리동정되었으나 그중 3개의 세균종류와 3개의 진균이 병원성을 나타냈으며 가장 병원성이 강했던 것은 Fusarium sp.였고 그 다음이 Bacillus sp. I과 Spicaria sp.의 순서였다. 1957연부터 1977연에 걸쳐 솔잎혹파리에서 분리된 병원미생물을 흰불나방 및 오리나무잎벌레에 접종한 결과 어느 경우나 병원성을 인정할 수 없었다.
1975년 수원 잠업시험장에서 분리한 흰불나방 핵다각체 바이러스 성상과 령기, 화기별 및 병원체 보존조건에 따른 병원성을 검정하기 위하여 핵다각체 바이러스를 현탁액 및 건조시켜 실온$(18.5^{\circ}C)$, 냉장$(5^{\circ}C)$, 냉동$(-80^{\circ}C)$에 각각 보존, 이병사체는 그대로 양지 음와 지에 보존하였고 야외에서의 병원성, 가잠에 대한 교우감염을 검정한 결과 다음과 같다. 1. 흰불나방 핵다각체는 4면체와 6면체로 크기는 약 $2.0{\mu}$이고 바이러스 입자는 간상형의 $2\~12$본으로 $33m\mu\times35m\mu$이었다. 2. 6각형의 흰불나방 중장핵다각체 바이러스는 중장의 핵에서만 발견되었다. 3. 령기별 $LD_{50.}$ 2,3,4 및 5령에 대해 $8.377\times10^4,\;4.974\times10^5,\;2.621\times10^6$ 및 $9.471\times10^6PIBs/ml$ 였으며 $1.45\times10^6\;PIBs/ml$에 대한 $LT_{50}$은 각각 9.6, 11.5, 12.0 및 17.3일 이었다. 4. 핵다각체 바이러스는 1화기 유충보다 2화기 유충에서 감수성이 높았다. 5. 핵다각체 보존은 둔화건조하여 냉동 및 냉장보존하거나 이병사체를 음지에 보존하는 것이 바이러스 활성도의 감소가 적었다. 6. 야외에서의 효과적인 살포농도는 $6.4\times10^7\;PIBs/ml$이며 이의 $LT_{50}$은 3령은 4.8일, 5령은 14.2일이었다. 7. 흰불나방 핵다각체 바이러스와 가잠의 핵다각체 바이러스는 상호 교우감염을 일으키지 않았다.
흰불나방의 미생물적 방제를 위한 핵다각체병 바이러스의 제제화와 그 실용화를 위한 야외 살포 시험을 통해 얻어진 제제의 불활화 정도 및 살포효과는 다음과 같다. 흰불나방 핵다각체병 바이러스의 불활화 조사에서 부유액의 경우 야외 살포후 5일이 경과한 후로는 완전히 불활화 되었으며, 제제는 살포 후 20일이 지나서 완전히 불활화 되어, 흰불나방 핵다각체병 바이러스를 제제화 했을 때 부유액에 비해 약 10-15일 정도 활성을 보유하여 제제의 안전성을 확인하였다. 또 제제의 야회 살포효과 시험에서 부유액의 경우는 2일이 경과하면서 병원성을 보이지 않은 반면에 제제는 접종당일 살포하였을 때 약 50%정도의 폐사율을 나타내었으며, 살포 후 9일까지는 약 30% 정도의 폐사율을 유지하면서 비교적 안전성을 보이다가 살포 후 14일이 경과하면서 병원성을 보이지 않았다. 제제의 경우 야외에서 약 10일 이상 감염력의 지속에 의한 살포효과를 나타내었다.
내부기생봉의 일종인 프루텔고치별(Cotesia plutellae)이 배추좀나방(Plutellae xylostella)을 대상으로 생물적 방제제로 이용되고 있다. 이 기생봉은 생식기관에 폴리드나바이러스를 공생시키고, 이 바이러스의 존재는 기생봉의 성공적 기생에 필수적이다. 본 연구는 암컷 프루텔고치벌 성장에 따라 플리드나바이러스의 복제시기를 결정하였으며, 또한 교미나 기주 요인에 따른 암컷의 생식 능력을 분석하였다. 기생봉은 $25^{\circ}C$ 발육조건에서 용화 2일째 겹눈과 날개와 같은 성충조직을 발달시키기 시작했으며, 5일째에는 촉각을 포함한 모든 성충조직이 발달되어 우화 직전 단계의 모습을 보였다. 프루텔고치벌 폴리드나바이러스에 대한 다클론성항체에 의한 면역블로팅 분석은 용화 4일째에서 바이러스 복제를 확인할 수 있었다. 바이러스 입자들은 용화 5일째 산란관 내부에서 투과전자현미경으로 관찰되었다. 우화후 난소소관의 길이는 변하지 않았지만, 독샘과 난소받침의 크기는 증가했다. 교미한 암컷은 $25^{\circ}C$에서 약 8일관 생존하였으며, 초기 4일동안 집중된($60\%$ 이상) 산란을 보였다. 미교미 암컷은 교미한 암컷에 비해 낮은 산란을 보였으며, 이 미수정난은 모두 수컷으로 발육하였다. 프루텔고치벌은 배추좀나방과 미국흰불나방(Hyphantria cunea)모두를 기생시킬 수 있었다. 그러나 배추좀나방에서 더 빠르고, 높은 기생율을 보였다.
미국흰불나방 휴면번데기에 5 $\mu\textrm{g}$/g(생체중) 이상의 탈피호르몬을 처리하면 처리된 용의 약 50%가 우화했으며, 10 $\mu\textrm{g}$이나 12.5 $\mu\textrm{g}$/g의 처리구에서는 몇마리의 기형적인 성충이 나타났다. 한편 탈피호르몬의 체내함량을 적정한 결과 정상용은 용화 후 6일째에 약 3.2 $\mu\textrm{g}$/g의 최대값을 보였으며, 탈피호르몬을 처리한 용에서는 처리 6일째에 4.1 $\mu\textrm{g}$/g의 최대값을 보였다. 그러나, 휴면 용에서는 낮은 탈피호르몬 함량을 보였는데 측정 기간중 얻은 최대치는 1.73 $\mu\textrm{g}$/g 정도였다. 탈피호르몬을 처리한 휴면 용의 글리코겐함량은 정상용 보다 낮았으나, 성충조직 발육기간 동안의 발육양상은 정상 용의 경우와 비슷하였다. 또한 같은 처리를 받은 휴면 용의 포도당-솔비톨과 트레할로스의 농도는 처리 후 6일째에 최대값을 보였는데, 그 수준은 정상적으로 발육하는 개체의 경우보다 높았다. 탈피호르몬 처리를 받은 휴면용의 혈림프 내 수용성단백질 함량은 정상 용의 그것보다 낮았으며, 혈림프를 제외한 전체 조직 내에서 정상용의 경우보다 높았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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