• 한국식품저장유통학회지
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• 제18권2호
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• pp.208-211
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• 2011

Limonoid는 항바이러스 및 항균제로써의 치료적인 목적으로 널리 연구되고 있는 성분으로 감귤에서 풍부하게 존재한다. 그러나 성분 자체의 쓴맛으로 인하여 기호성이 저하되므로 이를 해결하는 노력이 필요하며 제품 개발이 요구되고 있는 실정이다. 이러한 쓴맛을 제거할 수 있는 훌륭한 효소로써 LUGT가 주목되고 있으며, 이에 효소의 특성화 연구를 위하여 분리 및 정제를 시도하였다. Plasmid vector인 pET30a(+)을 사용하여 대장균에서 효소 생성 을 위한 최적 발현조건을 검토한 결과, 0.5 mM IPTG 조건에서 $37^{\circ}C$에서 5시간동안 배양하는 것이 최적 과발현 조건이었다. 그러나 세포내 효소 발현은 불용성의 inclusion body로 존재하므로 단백질 변성제인 urea와 재생제인 ${\beta}$-cyclodextrin을 사용하여 순수분리가 가능하였다. 이러한 방법은 LUGT의 당단백질의 특성연구는 물론 이를 이용한 제주 감귤의 고부가가치를 위한 기초연구에 많은 도움을 줄 것으로 판단된다.

• 대한한방부인과학회지
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• 제34권3호
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• pp.29-48
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• 2021

Objectives: Banchong-san (BCS) is a herbal formula composed of 13 korean medicinal herbs and is traditionally used to treat inflammatory diseases and pain. The object of this study was to research the antioxidant, anti-inflammatory, antipruritic and antimicrobial effects of the BCS in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW 264.7 macrophages. Methods: In this experiment, effects of BCS on the following four were measured as follows: (1) Anti-oxidative effects were evaluated by 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH) Radical scavenging activity, 2,2-azino-bis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid (ABTS) Radical scavenging activity. (2) Anti-inflammatory effects were evaluated by the production amount of Reactive oxygen species (ROS), Nitric oxide (NO), Interleukin-1β (IL-1β), Interleukin 6 (IL-6), tumor necrosis factor-α (TNF-α), Prostaglandin E2 (PGE₂), inducible nitric oxide synthase (iNOS), cyclooxygenase-2 (COX-2)(the previous two are "mRNA"), extracellular signal-regulated kinase (ERK), c-Jun N-terminal kinase (JNK), p38 mitogen-activated protein kinases (p38), inhibitor of nuclear factor kappa B (IκBα), nuclear factor kappa B (NF-κB) (the previous five are "Protein") in LPS-Stimulated RAW 264.7 cells. (3)Antipruritic effects were evaluated by the production amount of histamine, Leukotriene B4 (LTB4), LeukotrieneC4 (LTC4) Levels in phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA)/ionomycin-stimulated MC/9 mast cell. (4) Anti-microbial effects were evaluated by the growth suppression of Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa and Aspergillus niger. Results: The following results were obtained through each measurement: (1) DPPH Radical Scavenging Activity, ABTS Radical Scavenging Activity evoked a significant concentration-dependent increase. (2) ROS, NO, IL-1β, IL-6, TNF-α, PGE₂ production amount, iNOS, COX-2 mRNA expression were significantly reduced in the BCS extraction group compared with the control group and significantly decreased the amount of ERK, JNK, p38, NF-κB Protein expression. The amount of IκB-α Protein Expression have increased significantly. (3) The amounts of histamine, LTB4, LTC4 were significantly decreased. (4) The antibacterial efficacy, BCS inhibited the growth of Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa at concentrations of 5 ㎍/ml, but did not suppress the growth of staphylococcus aureus and aspergillus niger. Conclusions: The experimental results show that BCS has anti-oxidant, anti-inflammatory, antipruritic and antimicrobial properties.

• 생명과학회지
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• 제18권2호
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• pp.287-290
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• 2008

박테리오신의 일종인 Bacillus subtilis의 Subpeptin JM4-A 및 Subpeptin JM4-B를 생산하는 효모의 제작을 위하여 48 bp 길이의 개시코돈과 종지코돈을 포함하는 Subpeptin JM4-A 및 Subpeptin JM4-B의 유전자를 합성하여 효모 발현 vector pAIR123에 클로닝하였다. 이렇게 제작된 재조합 DNA로 효모세포를 형질전환시켜 Subpeptin JM4-A와 Subpeptin JM4-B를 생산하는 형질전환 효모세포를 제작하였다. 형질전환 효모는 그람양성 대표세균인 고초균(B. subtilis)과 그람음성 장내세균인 대장균(E. coli)에 대해 항균활성을 나타냈다. 또한 농흉이나 중이염의 원인이 되는 녹농균(P. aeruginosa)에 대해서도 항균활성을 나타냈다. 이 연구의 결과로 부패하기 쉬운 식품들의 보존성을 향상시키기 위한 보존제 대체물질 또는 가축 사료에서 병원균의 생육을 저해하기 위한 항생제 대체물질로 사용할 수 있는 박테리오신을 산업적으로 생산할 수 있는 효모세포를 제작하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제29권1호
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• pp.18-24
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• 2001

누에 핵다각체병 바이러스의 gp64 프로모터를 이용한 transient 발현 벡터를 제작하기 위해서 gp64 유전자의 구조를 분석하였다. Southern blotting 분석을 통해 genome DNA에서 gp64 유전자를 탐색하기 gp64 구조유전자를 포함하는 2,277 nucleotide의 염기를 분석하였으며 gp64의 early, late 프로모터 발현을 조절하는 인자들을 확인하였다. gp64프로모터를 이용한 transient 발현 벡터를 제작하고 외래유전자로써 lacZ 유전자를 Bm5 세포주에서 transient 발현시켰다. 세포주 내에 도입된 플라스미드 DNA의 안정성을 확인하였으며, gp64 프로모터의 외래유전자 발현성 여부를 조사하기 위하여 gp64 프로모터 하에 laxZ 유전자를 가지는 재조합 바이러스를 제작하고 $\beta$-galactosidase in 냐셔 staining을 수행한 결과 전체적인 발현량은 매우 약한 것으로 판단되었다. BmNPV-K1의 gp64 프로모터를 이용한 벡터는 더욱 민감한 표지 유전자를 발현시켜 재조합 바이러스의 분리에 이용하거나 숙주세포에 독성을 보이는 유전자 산물의 소량 발현에 더욱 유용할 것으로 판단된다.

• International journal of advanced smart convergence
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• 제7권2호
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• pp.101-111
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• 2018

Celiac disease (CD) is an immune-mediated enteropathy of small intestine diagnosed in both childhood and adulthood. CD is caused by gluten, which produces gliadorphin during its digestion. The enzyme dipeptidyl peptidase-4 (DPP4) breaks gliadorphin down nevertheless the last tripeptide remains and eventually inhibits DPP4, thus slowing down its process. Therefore, the idea is to produce an additional DPP4 enzyme which is crucial. Consequently, the functional DPP4 gene was cloned into pCDNA3 intermediate (FLAG+DPP4) vector and finally a recombinant plasmid pSB1C3 (Andersons promoters+FLAG+DPP4) was constructed using synthetic biology. Normally, a DPP4 inhibitor is used as a cure for diabetes. Another important concern was overexpression of DPP4, which might lead to diabetes, accordingly the work was also performed for the regulation of the DPP4 gene expression. In this regard, three types of Anderson promoters (strong, moderate and weak) were utilized to study the control overexpression. This is the first report of idealistic trial for control the exogenous DPP4 gene-expression by molecular biologic tools.

• 대한바이러스학회지
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• 제27권2호
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• pp.197-207
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• 1997

To investigate the NS4 region of JEV, NS4 cDNA of K94P05 (JEV strain isolated from Korea in 1994) was amplified by RT-PCR and analyzed by sequencing PCR product. Genomic size of NS4 was 1212bp and nucleotide sequence was compared with that of other JEV strains. Nucleotide homology between JaOAr582 and K94P05 was 91.1% and that between Beijing and K94P05 was 89.8%, respectively. But the nucleotide sequence of E region of JaOAr582 and K94P05 showed 97.0% homology and that of Beijing and K94P05 did 95.8% homology. NS4 protein was expressed as a form of fusion protein by a prokaryotic expression system. The induced fusion product showed a lower molecular weight than predicted size and remained insoluble. The NS4 protein might be cleavaged by E. coli protease. Concluding above results, high hydrophobicity of the NS4 protein supported the fact that this protein played a role as a membrane component and the poor nucleotide sequence conservativity among JEV strains suggested that this region might be important to adapt each viral growth environment.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제26권2호
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• pp.225-230
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• 1999

In mouse, the heat shock protein 70-2 (hsp70-2) is found to have special function in spermatogenesis. Based on the observation, the hypothesis that human hspA2 (human gene; 98.2% amino acid homology with hsp70-2) might have important function in spermatogenesis in human testes was proposed. To test the hypothesis, we examined the expression of hspA2 in human tissues. Expression vector pDMC4 for expression of the human hspA2 protein using pTricHisB (invitrogen, USA) was constructed and the expressed hspA2 protein was cross-reacted with antiserum 2A raised against mouse hsp70-2 protein. Based on the cross-reactivity, we determined the expression level of hspA2 protein in human tissues by western blot analysis using the antiserum 2A. We demonstrated that antiserum 2A antibodies detected human hspA2 protein with specificity which was produced in the E.coli expression system. On Western blot analyses, significant hspA2 expression was observed in testes with normal spermatogenesis, whereas a low level of hspA2 was expressed in testis with Sertoli-cell only syndrome. Also, a small amount of hspA2 was detected in breast, stomach, prostate, colon, liver, ovary, and epididymis. These results demonstrate that the hspA2 protein is highly expressed in male specific germ cells, which in turn suggests that hspA2 protein might playa specific role during meiosis in human testes as suggested in the murine model. However, further studies should be attempted to determine the function of hspA2 protein in human spermatogenesis.

• 한국응용과학기술학회지
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• 제33권4호
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• pp.717-725
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• 2016

본 연구는 개망초꽃 에센셜 오일의 항산화, 항균 및 항염 효능에 관하여 조사한 것이다. 개망초꽃 에센셜 오일은 용매추출법으로 추출하였다. 개망초꽃 에센셜 오일의 항산화 효능은 ABTS 라디칼 소거능과 DPPH 라디칼 소거 효능 측정으로 확인하였다. ABTS 라디칼 소거 효과는 $500{\mu}g/ml$ 농도에서 98.6%, DPPH 라디칼 소거는 48.3%로 좋은 효능을 나타내었다. 항균 활성은 S. aureus와 P. acnes, E. coli 균에 대하여 paper disc법과 최소저해농도(MIC)와 최소사멸농도(MBC)값을 측정하여 확인하였다. S. aureus 균주에 대해서는 MIC 값과 MBC 값이 모두 0.31 mg/mL 농도에서 우수한 억제 효과를 나타내었다. P. acnes 균에 대해서는 disc법에서 14 mm의 clear zone 형성과 MIC, MBC에서 각각 0.31 mg/mL, 0.63 mg/mL로 좋은 억제 효과를 보였다. 항염 활성에 관련하여 NO 억제 측정에서도 농도 의존적으로 NO의 생성을 억제시킴을 확인하였고, pro-inflammatory cytokine인 TNF-${\alpha}$, IL-6 역시 농도 의존적으로 억제하였다. 이러한 결과로부터 개망초꽃 에센셜오일은 항산화, 항균 및 항염 효능을 갖는 화장품 원료로서 개발 가능성이 있음을 시사한다.

• 식물조직배양학회지
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• 제24권2호
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• pp.93-97
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• 1997

Linoleic acid를 linolenic acid로 전환시키는 지방산불포화효소의 유전자(fad3)를 유채의 fad3 DNA probe를 이용한 plaque hybridization방법으로 $\lambda$ZAPII Arabidopsis thaliana cDNA expression library로부터 분리하였으며 1.8 kb-EcoRI DNA조각을 지니는 lambda clone을 pGEM7으로 subcloning하여 염기서열을 분석하였다. 그 결과로부터의 아미노산서열분석에 의하면 fad3 유전자는 open reading frame이 386개의 아미노산으로 이루어졌으며 44,075 Da의 분자량이 예측되고 있다. 엽록체의 $\omega$-3 지방산불포화효소(fad7)와 endoplasmic reticulum의 지방산불포화효소(fad2)와의 비교시 각각 70%와 58%의 유사성이 나타났다. 특히 82-151의 아미노산서열과 276-333의 아미노산지역은 보존성이 높았으며 이는 불포화지방산효소의 기능에 필수적인 지역으로 보여진다. 한편 대장균을 이용한 IPTG에 의한 Fad3단백질의 유도생성은 대장균의 생육에 독성효과를 나타내는 것으로 나타났다.

• 식물조직배양학회지
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• 제21권6호
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• pp.353-356
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• 1994

사람 B형 간염 바이러스의 pre-S2 표면항원에 결합하는 키메라 항체 유전자(카파 및 감마사슬의 cDNA클론)를 식물체에서 발현시키기 위해 식물체 발현벡터인 pBKS-1에 XbaI 자리를 이용하여 클로닝하였다. 이들 유전자를 포함하는 대장균의 플라스미드 핵산을 추출하여 아그로박테리움에 형질전환 시켰다. 다음 담배의 조직절편과 아그로박테리움을 공동배양함으로써 담배의 형질 전환을 시도하였다. 카나마이신이 포함된 신초유기배지에서 나온 신초를 시료로 하여 Western blot을 실시함으로써 이들 유전자가 형질전환 담배에서 안정하게 발현됨을 확인하였다.