Bacillus cereus에 의한 pullulanase 생산의 최적 배양온도 및 배양시간은 각각 $15^{\circ}C$, 72시간이고, 기본배지에 casein, nutrient broth, egg albumin의 첨가는 효소의 생산을 크게 증가시켰다. 황산암모늄분획, CM-cellulose와 DEAE-cellulose column chromatography에 의하여 효소를 정제하였고 정제효소의 specific activity는 29.09U/mg protein, 수율은 17.1이었다. 정제효소는 polyacrylamide disc gel electrophoresis에 의하여 single band를 나타내었고, SDS-polyacrylamide disc gel electrophoresis에 의하여 추정된 분자량은 61,000, 등전점은 pH7.0, 최적온도는 $40^{\circ}C$, 최적 pH는 6.5, $35^{\circ}C$ 이하에서 안정하였고, pH 안정 범위는 6.5-11.0, $Ag^{+}$, $Hg^{2+}$, $Zn^{2+}$에 의하여 크게 저해되었고, $Ca^{2+}$은 효소의 내열성을 증가시켰다. 정제효소는 공시기질중 pullulan을 잘 분해시켰으며 pullulan에 대한 분해산물은 maltoriose이었다.
돼지 백혈구(白血球) Iysoromal enzyme의 latency를 서로 다른 농도의 sucrose용액(0.0125-0.25M)으로서 조사하고 각(各) sedimentation fraction에 분포되어 있는 효소들의 specific activity, pH optima 및 activation energy를 측정하였다.
A. nidulans chitin deacetylase를 자가분해 용액으로부터 소수성 상호작용 컬럼 크로마토그래피와 이온 교환 컬럼 크로마토그래피를 통해 순수 분리하였다. 효소 활성에 관여하는 아미노산을 분석하기 위해 효소 단백질과 특정 아미노산 잔기에 작용하는 화학 수식제를 반응시켜 효소를 화학 수식하였다. histidine 잔기가 화학 수식된 효소는 효소활성을 100% 상실하였으며, arginine의 잔기 혹은 tyrosine 잔기는 100 ${\mu}M$보다 높은 농도의 수식제로 화학수식 되었을 때 효소활성이 감소하였다. Aspartic acid 혹은 glutamic acid의 carboxyl group 잔기의 화학수식은 효소활성의 상대적으로 작은감소를 나타냈다. 이것은 산성 아미노산의 잔기가 화학 촉매 반응에 직접 관여하지 않았거나 혹은 산성 아미노산 잔기는 효소단백질의 전반적인 구조에 영향을 미친다는 것을 추론할 수 있다. 이러한 결과는 효소 단백질의 촉매활성에 histidine, tyrosine 및 arginine 잔기가 중요한 역할을 담당하는 것을 의미한다.
한국응용약물학회 1998년도 Proceedings of UNESCO-internetwork Cooperative Regional Seminar and Workshop on Bioassay Guided Isolation of Bioactive Substances from Natural Products and Microbial Products
/
pp.161-161
/
1998
To achieve the aim of this investigation, the extracellular protease was isolated from bacteria BAC-4, a strain was cultivated in the medium for the production of penicillin acilase in a period of 32 hours. The enzyme was first purified by aceton precipitation method, followed by ion exchange chromatography on DEAE-sephacel column. The highest specific activity of the aceton fraction was found to be 2.19 unit per mg, with degree of purification of 13 times. Further purification of the enzyme on DEAE -sephacel had a specific activity of 58.6 unit per mg and degree of purification of 344 times compared to its crude extract. The optimum pH of the enzyme was 8.4, and the potimum temparature was 37$^{\circ}C$. The K$\_$M/ and $V_{max}$ calculated at experiment conditions were found to be 0.66%(W/V) and 3.61 unit per mL respectively.
Jeong, Seon-Ju;Heo, Kyeong;Park, Ji Yeong;Lee, Kang Wook;Park, Jae-Yong;Joo, Sang Hoon;Kim, Jeong Hwan
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
제25권1호
/
pp.89-97
/
2015
Bacillus subtilis HK176 with high fibrinolytic activity was isolated from cheonggukjang, a Korean fermented soyfood. A gene, aprE176, encoding the major fibrinolytic enzyme was cloned from B. subtilis HK176 and overexpressed in E. coli BL21(DE3) using plasmid pET26b(+). The specific activity of purified AprE176 was 216.8 ± 5.4 plasmin unit/mg protein and the optimum pH and temperature were pH 8.0 and 40℃, respectively. Error-prone PCR was performed for aprE176, and the PCR products were introduced into E. coli BL21(DE3) after ligation with pET26b(+). Mutants showing enhanced fibrinolytic activities were screened first using skim-milk plates and then fibrin plates. Among the mutants, M179 showed the highest activity on a fibrin plate and it had one amino acid substitution (A176T). The specific activity of M179 was 2.2-fold higher than that of the wild-type enzyme, but the catalytic efficiency (kcat/Km) of M179 was not different from the wild-type enzyme owing to reduced substrate affinity. Interestingly, M179 showed increased thermostability. M179 retained 36% of activity after 5 h at 45℃, whereas AprE176 retained only 11%. Molecular modeling analysis suggested that the 176th residue of M179, threonine, was located near the cation-binding site compared with the wild type. This probably caused tight binding of M179 with Ca2+, whichincreased the thermostability of M179.
Strptomyces albus T-12 which ahd been isolated and identified in the laboratory, was selected for the studies on the cultural conditions on the production of D-xylose iosmerase and the enzymological characteristics using the partially purified enzyme. The best results in the enzyme production came from D-xylose medium than wheat bran. The divalent metla ions as $Co^{2+},\;Fe^{2+},\;Zn^{2+}\;and\;Cu^{2+}$ retard or inhibit the cell-growth at the early stages of mycelia propagations, and T-12 strain is especially sensitive to $Co^{2+}$. After 60 hours of shaking cultivation at $30^{\circ}C$ and 200 rpm, a maximum enzyme activitz, 0.49 enzyme units, was obtained. Cell-free enzyme obtained from mycelia heat-treated in the prescence of 0.5mM $Co^{2+}$, showed a 2.4-fold increase in specific than the enzyme from untreated mycelia. The specific activity of the purified enzyme through Sephadex G-150 columm showed 180 fold to the crude enzyme. The effective activators of the enzyme appeared to be $Mg^{2+}\;and\;Co^{2+}$ ions, and it exhibited the maximal enzyme activity showed at pH 7.0 and at tempersture around $80^{\circ}C$ when $Mg^{2+}\;and\;Co^{2+}$ ions were added. The enzyme isomerized D-glucose, D-xylose, D-ribose, L-arabinose, D-mannose, and L-rhamnose in the present of $Mg^{2+}\;and\;Co^{2+}$ ions as an activatiors. $Mg^{2+}\;and\;Co^{2+}$ ions were non-competitively bound at different allosterix sites of enzyme molecule. $Mg^{2+}(5mM)\;or\;Co^{2+}(1.0mM)$ protected against the thermal denaturations of the enzyme activities. The michelis constant(Km) and $V_{max}$ values of the emzyme for D-glucose and D-xylose were 0.52M, $2.12{\mu}moles/ml{\cdot}min.\;and\;0.28M,\;0.65moles/ml{\cdot}min.$, respectively.
본 연구는 Lipomyces starkeyi KCTC 17343에 의한 dextranase 최적 생산 조건을 확립하고 dextran에 대한 효소 분해 특성을 규명하였다. 균주의 성장과 dextranase생산은 발효초기 pH와 온도에 따라 다르며 최적 pH는 4-5, 최적온도는 $25-30^{\circ}C$의 범위에서 결정이 되었다. 최적 발효조건에서의 dextranase 생산은 total enzyme activity가 4.85 IU/ml으로 나타났다. 이때의 발효균주의 specific growth rate는 $0.076h^{-1}$이었다. 발효 중 dextranase의 활성은 발효 정상기에서도 안정성을 유지하였다. Dextranase에 의한 dextran을 가수분해 결과, 가수분해물의 구성은 DP2 to 8에 이르는 올리고 덱스트란으로 이루어졌다.
Bacteriophage T4 endonuclease V initiates the repair of ultraviolet (UV)-induced pyrimidine dimer photoproducts in duplex DNA. The mechanism of DNA strand cleavage involves four sequential stens: linear diffusion along dsDNA, pyrimidine dimer-specific binding,l pyrimidine dimer-DNA glycosylase activity, and Af lyase activity. Although crystal structure is known for this enzyme, solution structure has not been yet known. In order to elucidate the solution structure of this enzyme NMR spectroscopy was used. As a basis for the NMR peak assignment of the protein, HSQC spectrum was obtained on the uniformly $\^$15/N-labeled T4 endonuclease V. Each amide peak of the spectrum were classified according to amino acid spin systems by interpreting the spectrum of $\^$15/N amino acid-specific labeled T4 endonuclease V. The assignment was mainly obtained from three-dimensional NMR spectra such as 3D NOESY-HMQC, 3D TOCSY-HMQC. These experiments were carried out will uniformly $\^$15/N-labeled sample. In order to assign tile resonance of backbon atom, triple-resonance theree-dimensional NMR experiments were also performed using double labeled($\^$15/N$\^$13/C) sample. 3D HNCA, HN(CO)CA, HNCO, HN(CA)HA spectra were recorded for this purpose. The results of assignments were used to interpret the interaction of this enzyme with DNA. HSQC spectrum was obtained for T4 endonuclease V with specific $\^$15/N-labeled amino acids that have been known for important residue in catalysis. By comparing the spectrum of enzyme*DNA complex with that of the enzyme, we could confirm the important role of some residues of Thr, Arg, Tyr in activity. The results of assignments were also used to predict the secondary structure by chemical shift index (CSI).
On the basis of the semen analysis in 66 subjects, they were divided into six different groups: Group I consisted of 16 normal subjects with sperm counts of over 40 ${\times}10^6$/ml and motility of over 40 percent, Group II, 7 subjects with normal sperm counts, but motility of under 40 percent, Group III, 15 oligospermic patients with under 40 ${\times}10^6$/ml, Group IV 14 azoospermic patients, Group V, 10 patients with vasectomy and Group VI, 4 abnormal patients with 2 cases of hypoplastic testis, 1 case of Klinefelter's syndrome and 1 case of testis tumor. After seperation of semen into sperm and seminal plasma by centrifugation, the protein contents and the activities of hyaluronidase, ${\beta}$-N acetylglucosaminidase, ${\beta}$-glucuronidase, arylsulfatase, acrosin and azocoll proteinase in seminal plasma were measured. Vasectomy group has 30 percent less of total protein than normal group. For the comparison of enzyme activities of seminal plasma, it could be assumed that the enzymes in seminal plasma were not contaminated with the enzymes of spermatozoa by testing the enzymes of the seminal plasma from the vasectomy and azoospermic groups. It had been reported that hyaluronidase was only released from spermatozoa, however, the result obtained in this investigation showed that azoospermic and vasectomy group had high specific activities of hyaluronidase. The results indicated that hyaluronidase was not only from the testis but also from the male accessory sexual glands. Oligospermic group (Group III) showed the lowest total activity of hyaluronidase among them. The specific activities of ${\beta}$ -N-acetylglucosaminidase was high in oligospermic group (Group III) and low in vasectomy group (Group V). These results were contradictory with the pattern of hyaluronidase activities. This indicated that the spermatozoa which were stayed in epididymis would increase the activity of this enzyme. The specific activity of ${\beta}$ - glucuronidase was low in oligospermic and vasectomy groups. Group VI including testis tumor had remarkably high arylsulfatase activity. Arylsulfatase, a typical lysosomal enzyme, has been known to be released unusually large amounts from certain tumor cells. Arylsulfatase was also released with high activities from azoospermic and vascetomy group. This result indicated that this enzyme was also released from the sources other than testis. Acrosin, a proteolytic enzyme locating in the sperm acrosome, was not found throughout all the samples of seminal plasma. The activities of azocoll proteinase, a non-specific neutral proteinase was nearly identical in all the groups. This enzyme must have been released from the sources other than testis.
2,4,6-Trinitrotoluene (TNT)을 분해할 수 있는 Stenotrophomonas sp. OK-5에서 분리한 NAD(P)H-nitroreductase의 특성을 조사하였다. 먼저 ammonium sulfate precipitation, DEAE-sepharose, 그리고 Q-sepharose 등의 일련의 정제 과정을 통하여 NAD(P)H-nitroreductase을 분리정제하였다. 분취기로부터 얻어진 시료로부터 NAD(P)H-nitroreductase의 효소활성을 가지는 3개의 다른 fractions (I, II 및 III)이 탐침되었다. NAD(P)H-nitroreductase의 fractions I, II, 그리고 III의 비활성(specific activity)은 각각 5.06 unit/mg, 4.95 unit/mg, and 4.86 unit/mg이었으며, crude extract와 비교하여 각각 10.5배, 9.8배, 8.9배 이상 농축되었다. 이 실험에서 이들 3개의 fractions 가운데, fraction I이 가장 높은 비활성을 나타내었다. NAD(P)H-nitroreductase (fractions I, II 및 III)의 효소활성에 영향을 미치는 몇 가지 요인을 조사하였다. 모든 NAD(P)H-nitroreductase (fractions I, II 및 III)의 최적 온도는 30$^{\circ}C$이었으며, 최적 pH는 약 7.5이었다. 4Ag^+, Cu_2^+, Hg_2^+$ 등의 금속이온은 약 80%의 효소활성을 저해하였으나, $Mn_2^+ 이나 Ca_2^+$의 첨가 시에는 약 30~40% 정도의 활성이 감소되었다. 그러나 $Fe_3^+$은 이들 효소의 활성을 증진시켰다. SDS-PAGE에 의해 측정된 NAD(P)H-nitroreductase의 fractions I, II 및 III의 분자량은 모두 약 27 kDa임이 확인되었다.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.