An alkaline lipase producing bacteria was isolated from soil and identified as Serratia liquefaciens AL-11. from the results of analysis of its morphological, biochemical and physiological properties. This strain showed the highest productivity of alkaline lipase when grown at pH 9.0 and 30$\circ$C for 42 hours in the medium of 1% peptone, 0.5% tryptone, 0.9% yeast extract, 1% starch, 1% tween 80, 0.05% CaCl$_{2}$ and 0.05% NaCl. The enzyme was purified by ammonium sulfate treatment, Sephadex G-100 gel filtration and DEAE-Sephadex A-50 column chromatography. The specific activity of the purified enzyme was 27 unit/mg protein and the yield of enzyme activity was 61.3%. The homogeneity of the purified enzyme was verified by polyacrylamide gel disc electrophoresis. Molecular weight of the purified enzyme was estimated about 53,000 by sodium dodecyl sulfate- polyacrylamide gel electrophoresis. This enzyme is composed of 17 amino acids of which glycine, proline and glutamic acid were three miajor acids.
Jo, Eunhye;Kim, Jihye;Lee, Areum;Moon, Keumok;Cha, Jaeho
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
v.31
no.3
/
pp.483-491
/
2021
Two putative genes, lip29 and est29, encoding lipolytic enzymes from the thermophilic bacterium Geobacillus thermocatenulatus KCTC 3921 were cloned and overexpressed in Escherichia coli. The recombinant Lip29 and Est29 were purified 67.3-fold to homogeneity with specific activity of 2.27 U/mg and recovery of 5.8% and 14.4-fold with specific activity of 0.92 U/mg and recovery of 1.3%, respectively. The molecular mass of each purified enzyme was estimated to be 29 kDa by SDS-PAGE. The alignment analysis of amino acid sequences revealed that both enzymes belonged to GDSL lipase/esterase family including conserved blocks with SGNH catalytic residues which was mainly identified in plants before. While Est29 showed high specificity toward short-chain fatty acids (C4-C8), Lip29 showed strong lipolytic activity to long-chain fatty acids (C12-C16). The optimal activity of Lip29 toward p-nitrophenyl palmitate as a substrate was observed at 50℃ and pH 9.5, respectively, and its activity was maintained more than 24 h at optimal temperatures, indicating that Lip29 was thermostable. Lip29 exhibited high tolerance against detergents and metal ions. The homology modeling and substrate docking revealed that the long-chain substrates showed the greatest binding affinity toward enzyme. Based on the biochemical and insilico analyses, we present for the first time a GDSL-type lipase in the thermophilic bacteria group.
Chemical modification of the S. cerevisiae farnesyl protein transferase (FPT) with CMC, phenylglyoxal and DEPC resulted in enzyme inactivation, depending upon the reagent concentration. The peptide substrate GST-PEP-I, a GST-fused undecapeptide mimicking the C-terminus of $p21^{Ki-ras}$, protected the enzyme against inactivation by CMC which is specific to either aspartate or glutamate, while the other substrate farnesyl pyrophosphate (FPP) showed protection against phenylglyoxal which is the specific modifier of arginine residues, dependent on the substrate concentrations. Neither of the two substrates protected the enzyme against histidine inactivation by DEPC. It is suggested that there is at least one aspartate or glutamate residue at the peptide substrate binding site, and that at least one arginine residue is located at the binding site of FPP. There also seems to be at least one histidine residue which is critical for enzymic activity and is exposed toward the bulk solution, excluded from the substrate binding sites.
Myo-inositol monophosphate phosphatase is a key enzyme in the phosphoinositide cell-signaling system. Incubation of myo-inositol monophosphate phosphatase from porcine brain with N-bromosuccinimide (NBS) resulted in a time-dependent loss of enzyme activity. The inactivation followed pseudo-first-order kinetics with the second-order rate constant of $3.8{\times}10^3\;M^{-1}min^{-1}$. The time course of the reaction was significantly affected by the substrate myo-inositol-1-phosphate, which afforded complete protection against the loss of catalytic activity. Spectrophotometric studies indicated that about one oxindole group per molecule of enzyme was formed following complete loss of enzymatic activity. It is suggested that the catalytic function of myo-inositol monophosphate phosphatase is modulated by the binding of NBS to a specific tryptophan residue at or near the substrate binding site of the enzyme.
A ${\beta}-1$,3-1,4-glucanase from the fungus Laetiporus sulphureus var. miniatus was purified as a single 26 kDa band by ammonium sulfate precipitation, HiTrap Q HP, and UNO Q ion-exchange chromatography, with a specific activity of 29 U/mg. The molecular mass of the native enzyme was 52 kDa as a dimer by gel filtration. ${\beta}-1$,3-1,4-Glucanase showed optimum activity at pH 4.0 and $75^{\circ}C$. The half-lives of the enzyme at $70^{\circ}C$ and $75^{\circ}C$ were 152 h and 22 h, respectively. The enzyme showed the highest activity for barley ${\beta}$-glucan as ${\beta}-1$,3-1,4-glucan among the tested polysaccharides and p-nitrophenyl-${\beta}$-D-glycosides with a $K_m$, of 0.67 mg/ml, a $k_{cat}$ of 13.5 $S^{-1}$ and a $k_{cat}/K_m$ of 20 mg/ml/s.
The myristoyl-acyl carrier protein (ACP) specific thioesterase from Iris tectorum was purified to a considerable homogeneity and characterized. The enzyme was eluted with a considerable stability by double-gradients using Triton X-100 and low ionic KCl or Na-phosphate through DEAE-52, Octyl-Sepharose, Q-Sepharose, and hydroxyapatite chromatoraphy. SDS-PAGE analysis showed a single band of 39 kDa. The native molecular weight was estimated to be 82 kDa by Sephacryl S-200 chromatography, indicating that the enzyme was a dimer. The thioesterase showed a chain-length specificity to myristoyl-ACP in preference to other-ACPs. The enzyme activity decreased by 1.0 mM myristate to about 27% of the original activity, whereas the remaining activity with decanoate was about 90%. The purified thioesterase was inhibited by myristoyl-CoA more than by myristate, suggesting that the myristoyl-AGP thiolesterase might be controlled by myristic acid and/or a subsequent product myristoyl-CoA. In addition, some biochemical characteristics of the enzyme were described.
Structural modeling of $\beta$-galactosidase from L. lactis ssp. lactis 7962 has shown that the residues Cys-472 and His-509 are located in the wall of the active-site cavity. To examine the functions of Cys-472 and His-509, we generated five site-specific mutants: Cys-472-Ser, Cys-472-Thr, Cys-472-Met, His-509-Asn, and His-509-Phe. $\beta$-Galactosidase substituted at Cys-472 with Met or His-509 with Phe had <3% of the activity of the native enzyme when assayed using ONPG as substrate. The other mutants Cys-472-Ser, Cys-472-Thr, and His-509-Asn had ca. 10-15% of the native enzyme activity. The V$_max$ values of the five mutated enzymes were lower (60-7,000-fold) than that of native enzyme. These results show that the catalytic ability of $\beta$-galactosidase is significantly affected by mutations at Cys-472 or His-509.
Proceedings of the Korean Society for Applied Microbiology Conference
/
2001.06a
/
pp.62-72
/
2001
The N-carbamoyl-D-amino acid amidohydrolase (D-carbamoylase) gene (dcb) from Agrobacterium tumefaciens AM 10 has been successfully cloned and expressed in Escherichia coli. Expression of D-carbamoylase gene under the 17 promoter in different host strains showed that the optimal expression was achieved in E. coli JM109 (DE3) with a 9-fold increase in enzyme production compared to the wild-type strain. The co-expression of the GroEL/ES protein with D-carbamoylase protein caused an in vivo solubilization of D-carbamoylase in an active form. The synergistic effect of GroEL/ES at 28$^{\circ}C$ led to 60 % solubilization of the total expressed target protein with a 6.2-fold increase in enzyme activity in comparison to that expressed without GroEL/ES and 43-fold increase in enzyme activity compared to A. tumefaciens AM 10. Attempts to express D-carbamoylase in an altered redox cytoplasmic milieu did not improve the enzyme production in an active form. The Histidyl-tagged D-carbamoylase was purified in a single step by Nickel-affinity chromatography and was found to have a specific activity of 9.5 U/mg protein.
The intracellular superoxide dismutase (SOD) from Staphylococcus sciuri was isolated to homogeneity by continuous steps, including ammonium sulfate fractionation, DEAE-ion-exchange chromatography, gel filtration, and phenyl hydrophobic gel chromatography. Pure SOD had a specific activity of 4,625 U/mg and was purified 158-fold with a yield of 31 % from a cell free extract. The molecular weight of the purified SOD was determined to be approximately 35.5 kDa by gel filtration and the enzyme was also shown to be composed of dimeric subunits on denaturing SDS-PAGE. The enzyme activity remained stable at pH 5 to 11 and also to heat treatment of up to $50^{\circ}C$ at pH 7.8, with 80% relative activity. The enzyme was insensitive to cyanide, hydrogen peroxide, and azide, indicating that it is a manganese-containing SOD. The EPR spectrum showed the enzyme containing manganese as a cofactor.
Lee Ki Hoon;Kang Gyung Don;Shin Bong Seob;Park Young Hwan
Fibers and Polymers
/
v.6
no.1
/
pp.1-5
/
2005
In this study, we attempted to evaluate a novel use of sericin-fixed silk fiber (SFx) as an immobilization support of enzyme. Sericin was fixed on the silk fiber using glutaraldehyde as a fixation reagent. After 6 hours of fixation, the degree of fixation increases linearly with linear decrease of the amount of bound $\alpha$-chymotrypsin (CT). This suggests that the increase of the degree of fixation is due to the further crosslinking of free aldehyde groups on the surface of sericin-fixed silk fiber (SFx). Even though perfect fixation was not achieved, sericin did not dissolve seriously and could be removed by further washing. The specific activity did not differ significantly after 6 hours of fixation. The activity of immobilized CT on SFx decreased to its half after 6 hours of incubation at 50$^{\circ}C$. However, it retained $78\%$ of initial activity even after 1 hour of treatment with $100\%$ ethanol. As a result, the SFx could be used as an immobilization support of enzyme in non-aqueous media at ambient temperature.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.