본 연구에서는 글루코스 검출을 위한 HRP (horseradish peroxidase)와 GOD (glucose oxidase)를 혼합한 형태의 다중 효소 반응 바이오센서 개발연구를 수행하였다. 바이오센서는 제작 시간 단축을 위하여 전기전착법을 이용하여 제작하였으며, 경제적인 센서 제작을 위하여 SPE (screen printed electrode)를 사용하였다. 다중 효소 바이오센서의 효과를 확인하기 위하여 단일 효소 바이오센서를 제작하여 비교 및 분석하였다. 센서의 특성을 평가하기 위해서 주사전자현미경(scanning electron microscopy, SEM), 순환전위법(cyclic voltammetry, CV), 전기화학적 임피던스 분광법(electrochemical impedance spectroscopy, EIS), 시간대전류법(chronoamperometry, CA), 흐름 주입분석법(flow injection analysis, FIA)를 수행하였다. SEM, CV, EIS의 분석결과로부터 효소가 전극 표면에 고정화가 잘 된 것을 확인하였고, CA로부터 제작된 다중 효소 바이오센서가 단일 효소 바이오센서에 비해 신호성능이 200% 향상된 것을 확인하였다. 이로부터 HRP와 GOD가 서로 촉매적으로 반응한다는 것을 설명할 수 있었다. 또한, FIA의 결과에서 동일한 농도의 글루코스 용액을 4회 나누어 주입하였을 때, 전류신호량이 일정함을 확인하였고, 농도에 따른 전류신호량을 분석하여 신호민감성, 재현성, 안정성 등이 우수함을 설명할 수 있었다.
살충제와 농약의 성분인 유기인 화합물 측정을 위한 광섬유 바이오센서가 개발되었다. 개발된 광섬유 바이오센서에서는 유기인 화합물에 의해 직접적으로 저해되는 AChE효소 (acetylcholinesterase)의 반응이 용액 pH의 변화를 일으킨다는 원리를 이용하여 그 변화를 광을 이용하여 측정함으로써 유기인 화합물을 측정하였다. pH 변화 정도를 광을 이용하여 측정하기 위해서 사용되어진 효소의 반응과 광원에 알맞은 산-염기 지시약인 리트머스를 선택하였다. 장시간 사용 시에도 활성을 유지시키고 재사용을 가능하게 하기 위하여 AChE효소는 Ca-alginate gel에 포괄시켜 센서의 반응기 내벽에 고정화시켰다. 장치를 소형화하고 원격 측정이 가능하게 하기 위하여 광섬유를 사용하여 빛을 전송하였다. 광원으로써는 생성물의 영향을 받지 않는 632 nm의 파장을 갖는 He-Ne laser를 사용하였고, 광섬유는 가격이 저렴한 플라스틱 광섬유를 사용하였고, 광 수신 장치로는 phototransistor를 사용하였다. 본 연구에서 제안된 광섬유 바이오센서는 유기인 화합물의 농도에 대하여 0 ppm 에서 1.5 ppm까지 선형적인 신호를 가지고 있으며 측정 시간은 5분이었다.
In this work the optical fiber glucose and lactate biosensors were developed by using fluorescent dye and enzyme immobilized on the end tip of an optical fiber. 3-Glycidyloxypropyl)methyldiethoxysilane (GPTMS), (3-Aminopropyl) trimethoxysilane (APTMS) and Methyltrimethoxysilane (MTMS) were used to immobilize glucose oxidase (GOD), lactate oxidase (LOD) and ruthenium(II) complex (tris(4,7-diphenyl-1,10-phenanthroline) ruthenium(II), $Ru(dpp)_3^{2+}$) as oxygen sensitive fluorescent dye. MTMS sol-gel was an excellent supporting material for the immobilization of $Ru(dpp)_3^{2+}$, GOD, and LOD on the optical fiber. Storage stability of the optical fiber glucose sensor was kept constant over 20 days, while the optical fiber lactate sensor had constant storage stability over 17 days. The optical fiber glucose and lactate biosensors also maintained good operational stability for 20 hours and 14 hours, respectively. The activities of the immobilized enzymes were most excellent at pH 7 and at $25^{\circ}C$. On-line monitoring of glucose and lactate in a simulated process was performed with the optical fiber glucose and lactate biosensors. On-line monitoring results were agreed with those of off-line data measured with high performance liquid chromatography (HPLC).
DeniLite$^{TM}$ laccase immobilized platinum electrode was used for amperometric detection of hydroquinone (HQ) and homogentisic acid (HGA) by means of substrate recycling. In case of HQ, the obtained sensitivity is 280 nA/ ${\mu}$M with linear range of 0.2-35 ${\mu}$M ($r^2$ = 0.998) and detection limit (S/N = 3) of 50 nM. This high sensitivity can be attributed to chemical amplification due to the cycling of the substrate caused by enzymatic oxidation and following electrochemical regeneration. In case of HGA, the obtained sensitivity is 53 nA/ ${\mu}$M with linear range of 1-50 $[\mu}M\;(r^2$ = 0.999) and detection limit of 0.3 ${\mu}$M. The response times ($t_{90%}$) are about 2 seconds for the two substrates and the long-term stability is 60 days for HQ and around 40-50 days for HGA with retaining 80% of initial activities. The very fast response and the durable long-term stability are the principal advantages of this sensor. pH studies show that optimal pH of the sensor for HQ is 6.0 and that for HGA is 4.5-5.0. This shift of optimal pH towards acidic range for HGA can be attributed to the balance between enzyme activity and accessibility of the substrate to the active site of the enzyme.
In this paper, we describe the fabrication of a paper-based enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to detect polygalacturonase (PG), which is used as a biomarker to determine whether a plant is infected with a disease. The proposed paper-based ELISA can analyze the concentration of PG in a short time using a small sample compared to the traditional ELISA, which is generally performed using a well plate. To increase the resolution of the sensor, we optimized the dilution ratio of the HRP-conjugated goat anti-rabbit IgG antibody and the dilution ratio of the anti-PG and HRP-conjugated goat anti-rabbit IgG antibodies. Furthermore, for quantitative analysis of PG concentration, Delta RGB analysis was conducted to detect color changes in the sensing window displayed by the PG samples at various concentrations. Based on the experiment, the fabricated paper-based ELISA could measure at least 0.25 ㎍ of PG and the measurement range was 0.25-2 ㎍. Therefore, the paper-based ELISA for detecting PG is expected to be able to determine the presence or absence of disease in crops at the infection stage in the future.
Disposable amperometric screen-printed biosensor strips have been fabricated by a sol-gel encapsulation for the analysis of glucose. The glucose oxidase(GOx) is entrapped in the gel matrix through sol-gel transition of tetraethoxysliane(TEOS). The biosensor is fabricated by GOx containing thin film of TEOS gel on the surface of screen-printed carbon electrode(SPCE). The GOx-containing thin film of TEOS gel offers a one-step modification process on the surface of SPCE. The optimum conditions for glucose determination have been characterized with respect to the applied potential, enzyme loading ratio, and pH. The linear range and detection limit of glucose detection were from 2.0 mM to 16.0 mM and 0.25 mM, respectively.
This paper presents a portable and compact optical device which can conveniently be used to perform a functional analysis of human liver function. The proposed system employed red/green LEDs, as a light source, and CMOS image sensor, which is commonly used in cellular phones. With this system, several blood serum samples have been evaluated for liver functional analysis by measuring light absorption level through the blood serum samples depending on aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), and total bilirubin concentration. The light absorption through the blood serum samples containing AST, ALT, or total bilirubin can provide their concentrations. The green light absorption is more sensitive to the concentration of AST or ALT, and the red light absorption is more sensitive to the total bilirubuin concentration. Additional calibration steps were performed by using a MATLAB program in order to eliminate the light scattering effects from the extraneous particles existing in each blood serum sample. From the blind test, three standard light intensity curves through each enzyme have been obtained and the enzyme concentration values have been compared to those obtained from a commercially available biochemistry analyzer (Toshiba 200 FR). The average percent difference in the obtained concentrations from two systems for AST, ALT, and total bilirubin concentration came out to be 7.79%, 7.98%. and 7.56%, respectively, with the adjusted coefficient of determination (R2) higher than 0.98. This system can possibly lead to a low-cost and simple system that can be used as a point-of-care (POC) system in a condition without advanced equipments.
In this study, the light addressable potentiometric sensors (LAPS) with $Si_{3}N_{4}/SiO_{2}/Si$, and $Ta_{2}O_{5}/SiO_{2}/Si$ structures were fabricated. The penicillinsae was immobilized on the devices to hydrolyze the penicillin using self-assembled monolayer (SAM) method. Then response characteristics according to the penicillin concentrations were measured and compared. The measuring system was simplified by using LabVIEW. The pH response characteristics of fabricated devices are 56 mV/pH ($Si_{3}N_{4}$ sensing membrane) and 61 mV/pH ($Ta_{2}O_{5}$ sensing membrane). The sensitivity of sensor by enzyme reaction result of the enzyme reaction were 60 mV/decade and 74 mV/decade for $Si_{3}N_{4}/SiO_{2}/Si$ and $Ta_{2}O_{5}/SiO_{2}/Si$ structure, respectively, in the range of $0.1\;mM{\sim}10\;mM $of the penicillin concentration.
Yi, Seung-Jae;Choi, Ji-Hye;Kim, Hwa-Jung;Chang, Seung-Cheol;Park, Deog-Su;Kim, Kyung-Chun;Chang, Chulhun L.
Bulletin of the Korean Chemical Society
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제32권4호
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pp.1298-1302
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2011
This study describes the development of an electrochemical array immunochip for the detection of IgG. Interdigitated immunochip platforms were fabricated by sputtering gold on a glass wafer by using MEMS process and then were coated with Eudragit S100, an enteric polymer, forming an insulating layer over the working area of immunochips. The breakdown of the polymer layer was exemplified by the catalytic action of urease which, in the presence of urea, caused an alkaline pH change. This subsequently caused an increase of the double layer capacitance of the underlying electrode. Used in conjunction with a competitive immunoassay format, this allowed the ratio of initial to final electrode capacitance to be directly linked with the concentration of analyte, i.e. IgG. Responses to IgG could be detected at IgG concentration as low as $250\;ngmL^{-1}$ and showed good linearity up to IgG concentration as high as $20\;{\mu}gmL^{-1}$.
Biogenic amine류는 어육의 부패과정 중 생성되는 성분으로 이를 간편하게 측정하기 위하여 diamine oxidase를 amino기가 관능기인 다공질의 Chitopearl beads에 고정화한 후 이를 충진한 효소 reactor를 제조하였다. 고정화 효소 reactor를 이용한 biogenic amine 연속계측 시스템을 사용하여 putrescine 기질에 대해 15.0 mM까지 검량곡선을 얻을 수 있었다. 이 때, biogenic amine 센서의 최대 감응도는 $35^{\circ}C$, 0.05 M 인산 완충용액(pH 7.2)을 사용한 경우 얻을 수 있었다. Biogenic amine 센서로 측정 시 방해물질로 작용할 수 있는 성분을 조사한 결과, ATP분해산물 및 TMA 등에는 거의 영향을 받지 않아 측정에 무리가 없음을 보여주었고, 0.8%까지의 식염에 대해서는 감응도가 19.2%이하로 감소하였으며 alanine과 glycine을 제외한 아미노산에 대하여 9.8% 이하의 감응도 상승을 나타내었다. 염류 및 아미노산에 의한 감응도 감소 및 증가 현상은 시료를 0.4 M perchloric acid에 의해 전처리하면 해결할 수 있었다. 여러 종류의 polyamines가 공존하는 경우 putrescine 기준으로 하여 putrescine 검량곡선의 26.7% 범위내에서 polyamines의 측정이 가능하였다. Diamine oxidase가 고정화된 Chitopearl 효소 reactor를 이용하는 경우 biogenic amines의 함량 유무를 30분 이내에 측정할 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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