This study was carried out to investigate the distribution of inclusion bodies in the tissues as well as to observe the general histopathological lesions of dogs infected with canine distemper. And also, the reliability of diagnostic values of inclusion bodies and the distribution of viral antigen in tissues were inspected by immunohistochemistry with monoclonal antibody. The results obtained were as follows; 1. Pneumonia observed in dogs infected with canine distemper virus was classified into interstitial, broncho-, and broncho-interstitial pneumonia histopathologically. Each occurring ratio was 35, 45 and 20%. 2. Histopathological classification of the canine distemper encephalitis was 20% in acute, 60% in subacute, and 20% in chronic encephalitis, respectively. 3. The organs in which inclusion bodies were predominantly distributed were stomach(82.6%), cerebellum(62.9%), lung(62.1%), cerebrum(50.0%), urinary bladder (46.1%), kidney(36.0%) and pancreas(25.0%). Intracytoplasmic inclusion bodies were mainly observed in the organs except the brain. 4. Canine distemper virus antigens were detected in the numerous tissues as well as in the inclusion bodies observed in the various organs. Antigen detection ratios in the lung, cerebellum and cerebrum were 68.9, 70.4 and 52.2%, respectively. These ratios were somewhat higher than those of inclusion bodies observed in the organs. 5. Canine distemper virus was mainly distributed in astrocytes and ependymal cells in the brain. These results suggested that the histopathologic diagnosis of canine distemper was reliable, and the spread of canine distemper virus in the brain was related with cerebrospinal fluid pathway.
Dong-Kun Yang;Eun-Ju Kim;Sang Ho Jang;Hye Jung Lee;Bitna Kim;Jin A Lee;Ju-Yeon Lee;Yun Sang Cho
대한수의학회지
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제64권3호
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pp.26.1-26.9
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2024
Japanese encephalitis virus (JEV) is a mosquito-borne virus that can infect pigs, horses, and other mammals, including humans. Sero-epidemiological investigations of JEV have been performed using hemagglutination inhibition (HI), virus neutralization (VN) tests and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). A need exists for a new ELISA that can detect JEV antibodies in the sera of several animal species. We aimed to develop a blocking ELISA (B-ELISA) for detecting JEV antibodies in pig and horse serum samples. JEV antibodies in 218 pig and 315 horse serum samples were measured using HI and VN tests. The purified KV1899-306 strain was used as an antigen for B-ELISA. The purified antibody (7A13) was conjugated with horseradish peroxidase and used as a detector antibody. The sera of pigs and horses to measure antibody against JEV were subjected to B-ELISA and analyzed. The B-ELISA had a diagnostic sensitivity of 94.6% to 100%, a specificity of 91.2 to 100%, and an accuracy of 94.9 to 98.6% compared with those of the HI and VN tests in pig and horse sera. The B-ELISA had a higher correlation with pig sera (r = 0.89 and 0.90 for VN and HI) than with horse sera (r = 0.75 and to 0.79). The new B-ELISA could be useful in the sero-surveillance of JEV in pig and horse sera and replace indirect ELISA.
목적: 뎅기바이러스 감염 환자 발생은 해외 여행이 증가함에 따라 증가하고 있다. 최근 감염 경험이 없는 사람에게 백신을 접종하면 이후 야생 뎅기바이러스 감염 시 중증 뎅기열 증상을 보일 수 있다고 연구된 바 있다. 따라서, 본 연구는 한국의 다양한 연령군에서 뎅기바이러스에 대한 혈청역학을 연구하였다. 방법: 건강한 영아 98명(2개월-1세), 청소년 152명(13-19세), 성인 90명(20-50세) 및 노인 106명(65세 이상)에서 수집한 혈청 총 446명을 대상으로 하였다. 각 연령군의 뎅기바이러스 immunoglobulin G (IgG) 항체 검사를 ELISA을 통해 측정하였다. 또한 뎅기바이러스 IgG 항체 검사에서 양성 또는 equivocal을 보이는 혈청에 한하여 일본뇌염 바이러스의 IgG 항체를 검사하였다. 결과: 총 446명 검체 중, 청소년군에서 1명(0.2%)만 뎅기바이러스 항체 검사에서 양성으로 나왔다. Equivocal은 14명(3.1%)으로, 청소년군 10명과 노인군 4명이 해당하였다. 뎅기바이러스 IgG 양성이 나온 1명에서 일본뇌염 바이러스 또한 IgG 양성으로 나왔다. 뎅기바이러스 IgG equivocal이 나온 14명에서는 일본뇌염 바이러스 IgG 양성이 6명, equivocal이 3명이었고 음성은 5명이었다. 결론: 한국인에서 뎅기바이러스에 대한 항체 보유율은 매우 낮았다. 본 연구는 향후 뎅기열 예방을 위한 보건 정책 수립에 중요한 자료가 될 수 있을 것이며 향후 지속적인 혈청면역 평가도 필요할 것이다.
The following facts have been identified as a result of epidemiological trend and characteristic of Japanese Encephalitis in Korea for the last 20 years. First: The Epidemiological period which was ten-year and three-year in the past has been disappeared following the start of immunization program at 1970. Second: The Incidence rate was much higher in the south and West areas than northeast area of Korea. City and Province with the highest incidence rate was Chungcheong Nam Province and Cholla Buk Province. Third: Regardless of scope of prevalence, the main season that 90 percent of total incidence occurrs in one month from mid-August through mid-September. Fourth: The number of case by age was that 80 percent of total patients is children aged $3{\sim}15$. Recently there is an increase in the number of patients who are elderly people. Fifth: The study on the ecological conditions of mosquito including wintering and effectiveness of immunization for Japanese Encephalitis and duration on antibody should be done. Sixth: There has been no case of Japanese Encephalitis for the last three years since 1984 mainly due to disinfecting to eradicate mosquitos, immunization for vulnerable group of people aged $3{\sim}15$, individual precaution not to be bitten by mosquito, improvement of environment sanitation. While there has been no case of Japanese Encephalitis during last three years, there is possibility that Japanese Encephalitis becomes prevalent again anytime since its virus has been isolated continuously from the natural reservoirs.
Studies were conducted on the survey of HI antibody abortion and stillbirth from J.E. virus in swine for 1968-1969 in Korea HI antibody against J.E. virus showed postive in June or July and reached 80~100 percent of postive in August or September and J.E. virus strains were isolated from the brain material of the aborted piglets.
The characterization of the 5 Korean isolates (K96P10, K94P05, K91P55, K87P39, and K82P01) of Japanese encephalitis virus (JEV) was compared with JE virus prototype Nakayama-NIH (NKY-NIH) using prM/M and envelope gene sequences of the JEV genome and phylogenetic analysis. The antigenic analysis of these viruses were done by the cross-hamagglutination inhibition (HI) test using polyclonal antibodies against Korean isolates and NKY-NIH. The sequence homology of the Korean isolates and NKY-NIH ranged between 87.4 % - 95.6 % at the nucleotide level and between 98.2 % - 97.2 % at the amino acid level over the E nucleotides compared. Alignment of E protein amino acid sequences revealed that residue positions E89, E129, E221, E244, E327, E366, E459, and E477 characterized the Korean strains. According to phylogenetic analysis bases on the E nucleotide, there are at least 2 genetic types of JEV existing in Korea and Korean strains were distinct from NKY-NIH. However, the cross HI test results of all the Korean isolates were serologically no different from NKY-NIH strain.
Japanese encephalitis virus (JEV) envelope (E) protein holds great promise for use in the development of a recombinant vaccine. Purified recombinant E (rE) protein may be useful for numerous clinical applications; however, there are limitations in using the Escherichia coli expression system for producing high-quality rE protein. Therefore, in this study, the yeast expression system was used to generate the rE protein. For protein production using the yeast system, the full-length JEV E gene was cloned into Pichia pastoris. SDS-PAGE and immunoblotting analysis demonstrated that the rE protein had a molecular mass of 58 kDa and was glycosylated. The predicted size of the mature unmodified E protein is 53 kDa, suggesting that post-translational modifications resulted in the higher molecular mass. The rE protein was purified to greater than 95% purity using combined ammonium sulfate precipitation and a SP-Sepharose Fast Flow column. This purified rE protein was evaluated for immunogenicity and protective efficacy in mice. The survival rates of mice immunized with the rE protein were significantly increased over that of Hyphantria cunea nuclear polyhedrosis virus E protein (HcE). Our results indicate that the rE protein expressed in the P. pastoris expression system holds great promise for use in the development of a subunit vaccine against JEV.
Japanese encephalitis (JE) is an important zoonosis caused by the mosquito-transmitted JE virus (JEV), which is a causative agent of reproductive failure in pregnant sows. Detection of JEV antibodies in swine is performed by hemagglutination inhibition (HI), virus neutralization (VN), and the plaque reduction neutralization test (PRNT). The most stringent PRNT is the 90% endpoint PRNT ($PRNT_{90}$). These conventional assays are difficult to carry out in diagnostic laboratories with insufficient instruments or cell culture systems. An alternative assay that is easily conducted and time efficient is required. In this study, we improved the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (I-ELISA) with clarified antigen for the detection of JEV antibodies. The I-ELISA results obtained from 175 swine serum samples were compared with HI, VN, and $PRNT_{90}$ results. The sensitivity of I-ELISA was 91.8%, 95.0%, and 94.7% compared with HI, VN, and $PRNT_{90}$ results, respectively. The specificity of I-ELISA was 92.2%, 94.7%, and 94.7% compared with HI, VN, and $PRNT_{90}$ results, respectively. Moreover, the I-ELISA results were significantly correlated with the HI (r = 0.93), VN (r = 0.95), and $PRNT_{90}$ (r = 0.92) results. These results suggest that the improved I-ELISA is useful for serosurveillance of JEV in swine.
박쥐 총 453 수의 일본뇌염 바이러스에 대한 HI 항체가를 조사하였던 바 1 :10 이상 양성률은 453 수 중 335 수(74.0%) 로 높은 양성률을 보였고 성별 항체보유율은 수컷이 70.0%(237수 중 166 수) 이고 암컷이 78.2%(216수 중 169수) 로 암켓이 약간 높게 나타났다. 박쥐 종류별 일본뇌염 바이러스 (Japanese Encephalitis Virus, JEV) 에 대한 HI 항체 양성률을 조사한 바 관박쥐 (Rhinolophus ferrumeguinum) 는 75.0%(360 수 중 34 수) 양셩이고 안주애기박쥐(Verpertilio superrans) 는 87.5%(24 수 중 21 수) 가 향체가를 보였고 큰수염박쥐 (Myotis mystatinus) 도 수가 적어 비교가 어려우나 항체보유률은 83.3%(12 수 중 10 수)가 양성이었다. JEV(Nakayama strain)을 한국산 야생박쥐 뇌내에 감염시켜서 되염 바이러스가 박쥐 뇌내 세포에서 증식하는지 여부를 확인하였다. 박쥐 뇌세포에서 JEV 항원과 바이러스의 감염입자를 전자 현미경으로 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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