• Journal of Plant Biotechnology
• /
• 제42권3호
• /
• pp.239-244
• /
• 2015

본 연구는 자생 난초과식물인 금새우난초의 기내 비대배 유도, 발아 및 배직경에 미치는 몇 가지 영향(NaOCl, 배지, 식물생장조절제)을 조사하기 위해 수행되었다. 1% NaOCl을 30분간 처리한 후 POM배지에 배양할 경우, 비대배 유도는 28.3%, 발아율은 54.8%, 배직경은 $205.8{\mu}m$로 가장 높게 조사되었다. NaOCl 무처리 종자를 POM배지에 배양할 경우, 비대배 유도는 8.5%, 발아율은 13.4%, 배직경은 $14.6{\mu}m$로 조사되었다. 또한 식물생장조절물질의 처리가 발아에 미치는 영향을 조사한 결과, 1.0 mg/L의 BA 처리구(95.6%)의 발아율은 대조구(54.5%)에 비해 1.75배 높게 조사되었다. AC와 sucrose의 처리 농도가 기내 식물체 생장에 미치는 영향을 조사한 결과, 엽장은 10 g/L의 sucrose 처리구에서 6.8 cm로 가장 길었고, 대조구는 3.3 cm로 가장 짧았다. 근장은 50 g/L의 sucrose 처리구에서 5.8 cm로 가장 길었고, 대조구는 1.7 cm로 가장 짧았다. 생중량과 건중량은 AC와 sucrose 처리구가 대조구에 비해 2~5배 이상 높은 결과를 보였다. 결과적으로 본 연구는 금새우난초의 기내 발아 및 증식에 미치는 몇 가지 요인에 관해 구체적인 결과를 제시하였고, 이러한 결과는 향후 자생 난초과식물의 증식 및 보존전략 개발에 중요한 기초자료로 제공 될 것이다.

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제28권1호
• /
• pp.7-12
• /
• 2013

Body condition score (BCS) is a useful management tool for distinguishing differences in nutritional needs of cows in the herd. Although it is not always possible to quantify the nutrient content of the feed supplied to the donor cow, the nutritional status can be determined by the BCS. The objective of this study was to evaluate in vivo embryo production, return to estrous of donor and pregnancy rate of recipients following BCS in Hanwoo superovulation. Sixty nine Hanwoo donor cows were flushed on day 7 of estrus cycle with same FSH and artificial insemination by the same technicians. Embryos were recovered on 7 days after the third insemination by flushing the uterus with Embryo Collection Medium. The results obtained were as follows: No differences were observed in the efficiency of superovulation rates regardless of BCS ($${\leq_-}2.0$$, 2.5 to 3.0, and $${\geq_-}3.5$$). The mean number of total embryos was each $5.20{\pm}0.86$, $11.56{\pm}1.04$, and $6.23{\pm}1.07$. The mean number of transferable embryo from $${\leq_-}2.0$$, 2.5 to 3.0, and $${\geq_-}3.5$$ of BCS was $2.60{\pm}0.87$, $7.94{\pm}0.89$, and $4.75{\pm}1.32$, respectively (p<0.05). Return to estrous regardless of donor BCS was no difference. The pregnancy rates of recipient were BCS $${\leq_-}2.0$$ 11.76%, 2.5 to 3.0 40.79%, and $${\geq_-}3.5$$ 11.11%, following transfer of fresh embryos produced in vivo, respectively. These results indicate that if the Hanwoo with BCS 2.5 to 3.3 are used for donor and recipient, the embryo production and the conception rate will be greater.

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제29권3호
• /
• pp.283-287
• /
• 2014

Sexed semen is commonly used for the production of calves of the desired gender. Gender selection is important in animal production industries. For example, female cattle are required for the dairy industry while males are preferred in the beef cattle industry. The present study was to assess the in vivo embryo production efficiency using the semen separated according to sex during superovulation in Hanwoo. Seventy Hanwoo donor cows were flushed on day 7 of estrus cycle with same FSH and artificial insemination by the same technicians. Embryos were recovered on 7 days after the third insemination by flushing the uterus with embryo collection medium. KPN semen straws used artificial insemination contained 20 million sperm (total number 60 million per donor). Sex-sorted semen straws contained 4 million sperm (total number 12 million per donor). The results obtained were as follows: No differences were observed in the efficiency of superovulation rates on KPN semen 87%, and sexed semen 100%, respectively. The mean numbers of total embryos are each $12.58{\pm}8.31$ and $13.25{\pm}7.86$. The mean numbers of transferable embryos, sexed semen were significantly lower than KPN semen ($3.75{\pm}1.98$ vs. $8.23{\pm}6.07$, P<0.05). The rates of unfertilized embryos from superovulation using sexed semen were significantly higher than KPN semen (50% vs. 15%, P<0.05). The rate of degenerated 2-cell embryos from sexed and KPN semen was 60.87% and 11.11%, respectively (p<0.05). In conclusion, these results indicate that superovulation using sexed semen was useful, but efficient embryo production was important to reducing the damage caused by the Flowcytometer-based sperm sorting procedure.

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제17권2호
• /
• pp.117-121
• /
• 2002

본 연구는 소형견의 불임 해결을 위해 미숙난자를 보존 후 이용할 수 있는지의 여부를 판명하기 위하여 미성숙 난포란을 시간별로 배양한 뒤 vitrification 동결 융해후 체외수정율과 생존율을 조사하였다. 1 미숙난포란을 회수 후 1, 6, 12, 24시간 성숙 배양 후vitrification동결 융해 후 체외수정 시켰을때 수정율은 각각 31.4％. 22.5％, 11.9％ 및 5.3％로서 대조군의 수정율 60.0％에 비해 낮은 성적이었고, 회수 후 시간이 경과되지 않은 난포란이 높은 체외수정율을 나타냈다. 2. 미숙난포란을 회수 후 1, 6, 12 및 24시간 배양시킨 난포란을 vitrification 동결 융해 후 체외 수정시킨 배의 생존율은 각각 55.0％, 40.0％, 28.6％ 및 17.1％로써 대조군의 76.7％에 비해 낮은 생존율을 나타냈다.

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제12권2호
• /
• pp.195-202
• /
• 1997

The present study was carried out to evaluate the effect of superovulation treatments on ovarian responses, oocyte recovery rates and grades of collected oocytes using an ultrasound-guided transvaginal approach in Korean native cows. Superovulation in cows was induced with two different regimenes: 1) FSH-decreasing dose(n=8): the cows were received twice per day for three days of the total dose of 400 mg of FSH-p, 2) FSH-single dose(n=9): the cows were administrated a single dose of 400 mg of FSH-p in 25% PVP. The Observation of visible follicles and collection of oocytes were performed 12 hours following the last FSH in FSH-decreasing dose group and 48 hours after the FSH-single dose injection. All visible follicles larger than 6 mm were punctured and aspirated with a 6.5 MHz convex-array ultrasound transducer designed for intravaginal use. The mean number of visible follicles(> 6 mm) was significantly(P<0.05) higher in the FSH-decreasing dose treatment (22.811.9) and FSH-single dose treatment (20.612.0) groups than the non-treatment group(7.0$\pm$8). The mean recovery rate of oocytes was not significantly(P<0.05) different between the treatment and control groups, but the mean number of collected oocytes was significantly(P<0.05) higher in the FSH-decreasing dose treatment( 12.611.5) and FSH-single dose treatment (11.813.6) groups than the non-treatment group(3.7$\pm$0.5). In conclusion, the FSH-single dose treatment at superovulation in cows for ultrasound-guided aspiration might increase the number of aspiratable follicles and the recovery rate of follicular oocytes as the FSH-decreasing dose treatment.

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제21권2호
• /
• pp.95-100
• /
• 2006

한우 종모우에 있어 정액 채취시 승가 조건(의빈우 혹은 의빈대)이 정액성상에 미치는 영향을 구명하기 위하여 의빈우 승가 종모우 21두, 의빈대승가 종모우 9두 등 보증 종모우 30두를 공시하여 연구하였다. 정액은 $3{\sim}6$일 간격으로 채취하였으며 채취 당일 1시간 간격으로 총 2회 정액 채취하여 6개월간 정액성상을 조사하였다. 의빈대 승가 종모우가 의빈우 승가 종모우보다 1차 및 2차 정자농도에 있어 유의적으로 높아(p<0.05) 1차 및 2차 총 정자수에서도 많았으며 특히 l차 총 정자수는 유의적으로 많게 나타났다(p<0.05). 종모우 승 가 조건(의빈대, 의빈우)에 상관없이 5일 간격으로 정액 채취시가 정액량이 많아(p<0.05) 총 정자수가 많았으며 의빈대를 이용하여 5일 간격으로 정액 채취시가 총 정자수가 다른 모든 처리군보다 많았다. 의빈대 승가 종모우는 $4{\sim}5$세에서 총 정자 수가 높게 나타났으며 의빈우 승가 종모우는 $6{\sim}7$세에서 총 정자수가 높게 나타났다(p<0.05). 이러한 결과로 미루어 볼 때 한우 종모우에서 의빈대를 이용하여 정액을 채취하는 것이 의빈우를 이용 할 때 보다 정액 생산성이 좋을 것으로 사료된다.

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제17권1호
• /
• pp.79-85
• /
• 2002

본 연구는 과배란처리에 의한 수정란이식 시 우수한 수정란을 다량 확보하고 이식 후 수태율 향상을 위하여 공란우 및 수란우에 bST처리가 수정란회수를 및 수태율에 어떠한 영향을 미치는가를 조사하고자 실시하였다. 공란우는 Folltropin-V와 PGF$_2$$\alpha$를 이용하여 과배란처리를 유도하여 12시간 간격으로 2 straw치 3회 인공수정을 실시하였다. 공란우와 수란우는 대조구와 bST처리구로 구분하였으며, bST(500 mg)처리는 발정발현 후 미근부에 근육주사하였다. 과배란처리된 공란우의 수정란배란을 수정 후 7~8일째에 비와과적인 방법으로 실시 하였다. 이식가능 수정란의 회수율과 평균숫자는 대조구와 bST처리구 간에 유의적인 차이가 없었다 (72.8%/5.9$\pm$4.5 vs. 83.7%/5.1 $\pm$1.6; P<0.05). 비여름철에 이식가능 수정란의 회수율과 평균숫자가 여름철보다 유의적으로 높았다(81.8%15.4$\pm$2.1 vs. 68.7%14.7$\pm$4.6; P<0.05). 수정란이식 후 수태율은 bST처리구에서 대조구보다 유의적으로 높았다 (64.0 vs. 47.1%; P<0.05). 그러나 이식 후 수태율에 계절간에 유의적인 차이는 없었다(51.6 vs.61.5%; P>0.05). 본 연구결과에서 bST처리는 수정란이식 후 수태율의 향상시킬 수 있을 것으로 판단되며, 비여름철이 과배란처리 및 수정란이식에 유리할 것으로 판단된다.

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제20권1호
• /
• pp.55-62
• /
• 2005

도축장에서 회수한 한우 난소로부터 난자를 회수하기 위한 방법으로 흡입법 후 세절법과 흡입법으로 난자를 회수하여, 난자의 회수율과 채란된 난자를 체외수정 후 발달율과 수정란 이식 후 수태율에 영향을 조사한 결과는 다음과 같다. 1. 난자 회수율은 각 난소당 회수된 난자수는 흡입 후 세절법이 8.2개, 흡입법이 6.5개로서 흡입 후 세절법을 병용하는 것이 난자 회수율에서 유의적으로 많았다. 2. 채란방법에 따른 체외수정란의 분할율은 흡입 후 세절법이 $75.8\%$, 흡입법은 $84.4\%$로서 유의적이 차이를 보이지 않았다. 3. 배반포 발달율은 흡입 후 세절법이 $28.3\%$, 흡입법은 $22.8\%$로서 흡입 후 세절법이 유의적으로 높았다. 4. 난소당 배반포수에서는 흡입 후 세절법이 1.8개로서 흡입법의 1.1개보다 유의적으로 많은 배반포수를 생산할 수 있었다. 5. 채란별 수태율 조사 결과 흡입 후 세절법이 $54.4\%$, 흡입법이 $62.5\%$로서 흡입법으로 채란된 난자로부터 얻어진 수정란을 이식하였을 때 높은 수태율을 얻을 수 있었다. 6. 경산우와 처녀우에 수정란이식 후 수태율은 경산우는 흡입법 후 세절법이 $54.4\%$, 흡입법은 $62.5\%$ 나타났고, 처녀우는 흡입법 후 세절법이 $58.1\%$, 흡입법은 $68.2\%$로서 경산우와 처녀우에 관계없이 흡입법으로 채란한 난자로부터 생산된 수정란을 이식하였을 때 수태율이 유의적으로 높은 결과를 얻었다. 이상의 결과에서 채란방법에 따른 난소당 이용 가능한 난자의 회수율은 흡입 후 세절법을 이용함으로서 많은 난자와 수정란을 생산할 수 있었다. 그리하여 한정된 난소를 효율적으로 활용하기 위해서는 흡입 후 세절법을 이용하는 것이 전체적인 효율 향상에 도움이 될 것으로 판단된다.

• 한국동물생명공학회지
• /
• 제37권4호
• /
• pp.292-297
• /
• 2022

Direct injection of CRISPR/Cas9 into zygotes enables the production of genetically modified nonhuman primates (NHPs) essential for modeling specific human diseases, such as Usher syndrome, and for developing novel therapeutic strategies. Usher syndrome is a rare genetic disease that causes loss of hearing, retinal degeneration, and problems with balance, and is attributed to a mutation in MYO7A, a gene that encodes an uncommon myosin motor protein expressed in the inner ear and retinal photoreceptors. To produce an Usher syndrome type 1B (USH1B) rhesus macaque model, we disrupted the MYO7A gene in developing zygotes. Identification of appropriately edited MYO7A embryos for knockout embryo transfer requires sequence analysis of material recovered from a trophectoderm (TE) cell biopsy. However, the TE biopsy procedure is labor intensive and could adversely impact embryo development. Recent studies have reported using cell-free DNA (cfDNA) from embryo culture media to detect aneuploid embryos in human in vitro fertilization (IVF) clinics. The cfDNA is released from the embryo during cell division or cell death, suggesting that cfDNA may be a viable resource for sequence analysis. Moreover, cfDNA collection is not invasive to the embryo and does not require special tools or expertise. We hypothesized that selection of appropriate edited embryos could be performed by analyzing cfDNA for MYO7A editing in embryo culture medium, and that this method would be advantageous for the subsequent generation of genetically modified NHPs. The purpose of this experiment is to determine whether cfDNA can be used to identify the target gene mutation of CRISPR/Cas9 injected embryos. In this study, we were able to obtain and utilize cfDNA to confirm the mutagenesis of MYO7A, but the method will require further optimization to obtain better accuracy before it can replace the TE biopsy approach.

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제15권3호
• /
• pp.237-245
• /
• 2000

This study was carried out to elucidate whether sperm contain a factor inducing second polar body extrusion and to search for an effective collection method of the sperm factor Thus, sperm extract, dialyzed sperm-extract or liquid chromatographic fractions of sperm extract was microinjected into ovulated oocytes. And the microinjected oocytes were incubated for 24 hours to investigate about the extrusion of second polar body. The results obtained were as follows; 1. Sperm extract significantly increased the second polar body extrusion. 2. Sperm extract showed five major fractions at retention volumes (RVs) 1.25, 1.37, 1.84, 2.10 and 2.67ml after separation with Superose 12 column. These sperm extract fractions did not significantly increase the second polar body extrusion. 3. Dialyzed sperm-extract significantly increased the second polar body extrusion 4. Dialyzed sperm-extract showed three maior fractions at RVs 1.88, 2.14 and 2.77ml after separation with Superose 12 column. Of these fractions, the fraction RV2.14 significantly increased the second polar body extrusion. In conclusion, sperm extract contained a factor inducing the second polar body extrusion and the factor was contained largely in fraction RV2.14 after dialysis and liquid chromatographic fractionation of sperm extract.