포도낭미충증을 포함한 유구낭미충증 환자의 신경외과적 수술 과정에서 수거한 낭미충 낭액의 성분 단백질을 비교 검토하였다. 7.5% gel에서 Disc-PAGE와 reducing condition의 10~15% gel에 SDS-PAGE를 실시하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 7.5% gel에서 실시한 Disc-PAGE 소견상 제주도와 Ecuador에서 수집한 돼지의 유구낭미충 낭액은 U, A, B, C, E, S의 6개 band로 구성되어 있었고 그 중 band C가 주 구성 성분이었다. 그리고 인체에서 수집한 낭액 은 band C가 주 구성 성분이었고 경우에 따라 band E가 주 구성 성분으로 관찰되고 있었다. 정상 뇌척수액은 band C, E 위치에서 ${\gamma}-globulin$과 albumin이 보이고 있었다. 2. 10~15% gel에서 실시한 SDS-PAGE상 제주도 낭액은 최소 25개 이상의 subunit로 구성되어 있었고 그 중 95, 64, 48, 39, 34, 24, 15, 10및 7 kDa band가 주 구성 성분이었다. 그리고 Ecuador감염 돼지의 유구낭미충 낭액은 전체적으로 비슷했으나 48, 39, 34, 24 kDa band가 의미한 반면 21, 17 kDa가 진하게 염색되었다. 인체 뇌낭미충증 환자에서 수집한 낭액들은 15~21개 정도의 band가 보이고 있었다. 그 중 94, 64, 15, 10 그리고 7 kDa band는 모든 낭액에 공통적으로 포함되어 있었다. 한편, 정상 뇌척수액의 SDS-PAGE에서는 77, 66 (albumin), 55 (heavy chain of ${\gamma}-globulin$), 22.5 (light chain of ${\gamma}-globulin$) 그리고 17 kDa band가 보였다. 환자의 낭액은 77, 66, 55, 22.5 kDa에서 진하게 염색되는 경우가 있었다. 이상의 결과로 인채 유구낭미충증에서 수집한 낭액에도 15, 10, 7kDa의 subunit로 구성된 150kDa의 band C protein이 주 성분으로 구성되어 있으며 수술장에서 수집하는 과정에서 뇌척수액이 섞이는 경우가 많음을 알 수 있었다.
Korean ginseng was purified to obtain radioprotective protein fractions by buffer extraction, ammonium sulfate fractionation, CM-cellulose column chromatography, heat inactivation and Sephadex G-75 column chromatography. The final three fractions, GI, GII and GIII were subjected to Disc-polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and SDS-PAGE. The molecular weights(M.W.) of native and denatured proteins were estimated by using regression line equations obtained from the mobilities of standard proteins. As the results, in Disc-PAGE, the GI fraction showed two protein bands with M.W. of above 213, 000 and 55, 000, GII showed one band with M.W. of 44, 000 and GIII, also one band with M.W. of 19, 000. In SDS-PAGE, GI fraction gave four subunit bands with M.W. of above 114, 000, 27, 000, 24, 000 and 19, 000, GII gave two bands with M.W. of 46, 000 and 22, 000, and GIII, one band of 19, 000.
Polly Lama;Jerina Tiwari;Pulkit Mutreja;Sukirti Chauhan;Ian J Harding;Trish Dolan;Michael A Adams;Christine Le Maitre
Anatomy and Cell Biology
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제56권3호
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pp.382-393
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2023
Cell clusters are a histological hallmark feature of intervertebral disc degeneration. Clusters arise from cell proliferation, are associated with replicative senescence, and remain metabolically, but their precise role in various stages of disc degeneration remain obscure. The aim of this study was therefore to investigate small, medium, and large size cell-clusters. For this purpose, human disc samples were collected from 55 subjects, aged 37-72 years, 21 patients had disc herniation, 10 had degenerated non-herniated discs, and 9 had degenerative scoliosis with spinal curvature <45°. 15 non-degenerated control discs were from cadavers. Clusters and matrix changes were investigated with histology, immunohistochemistry, and Sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Data obtained were analyzed with spearman rank correlation and ANOVA. Results revealed, small and medium-sized clusters were positive for cell proliferation markers Ki-67 and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in control and slightly degenerated human discs, while large cell clusters were typically more abundant in severely degenerated and herniated discs. Large clusters associated with matrix fissures, proteoglycan loss, matrix metalloproteinase-1 (MMP-1), and Caspase-3. Spatial association findings were reconfirmed with SDS-PAGE that showed presence to these target markers based on its molecular weight. Controls, slightly degenerated discs showed smaller clusters, less proteoglycan loss, MMP-1, and Caspase-3. In conclusion, cell clusters in the early stages of degeneration could be indicative of repair, however sustained loading increases large cell clusters especially around microscopic fissures that accelerates inflammatory catabolism and alters cellular metabolism, thus attempted repair process initiated by cell clusters fails and is aborted at least in part via apoptosis.
This experiment has been done to evaluate the relationship between the follicular atresia and the protein patterns on electrophoreais of the follicular fluids in porcine ovary. The protein concentration of the follicular fluids was lower than that of serum, and gradually decreased as the follicle siae became larger. The number of protein bands of follicular fluid on electrophoresis was less than that of serum, and gradually increased as follicle size became larger. Three specific bands were detected on disc PAGE and one band(M W. 75,000) on SDS PAGE in the follicular fluids, while not in serum. One band (A) at ${\beta}$-globulin region on disc PAGE became heavier, as follicles became atretic. Two bands less than(M. W. 20,000) were detected only in the large follicular fluid. Another band(M. W. 43,000) was not detected in necrotic group, whereas all other groups showed it. It could be concluded that the component and composition of the proteins follicular fluids changes according to the follicular size during atresia. Therefore detection of the changing pattern of proteins in the follicular fluid can be used as a basic criterion for the identification of follicular atretic stage.
인체감염이 다발하는 폐흡충증의 혈청학적 진단에서 항원으로 사용하는 성충추출액은 여러단계의 질환 이행과정을 진단하는 항원으로서 문제가 있다. 이를 해결하려면 먼저 추출액내의 성분단백질의 성상을 파악할 필요가 있다. 이 연구에서는 폐흡충 성충 추출액으로 면역시킨 BALB/c mice의 비장세포와 SP2/0 형질세포종 세포를 세포융합하여 제작한 단세포군항체를 이용하여 친화성크로마토그래피로 폐흡충 성충의 구성단백질의 일부를 순수분리하고 성상을 관찰하였다. 그 결과는 다음과 같다. 1. 세포융합으로 PFCK-21, PFCK-44, PFCK-136, PFCK-189 등 4종류의 단세포군 항체를 얻었다. 그중 PFCK-21과 PFCK44는 17k Da, PFCK-136은 23, 46, 92 kDa 단백질에 반응하였고 PFCK-189는 여러종류의 단백질에 반응하였다. 2. PFCK-44 단세포군항체를 고리로 친화성 크로마토그래피를 실시하여 분리한 성분 단백질은 disc-PAGE상 4번째에 위치하고 분자량이 17 kDa로 알려진 단밸질이었다. 이 단밸질은 17 kDa의 monomer로 판단하였다. 면역조직화학염색을 실시한 결과 이 단밸질은 장관 상피세포에 반응하고 있었다. 3. PFCK-136 단세포군항체로 순수분리한 단밸질은 disc-PAGE상 1번 단밸질(440 kDa)이었으며 환원성 SDS-PAGE에서는 23 kDa 단밸질이었다. 면역조직화학염색으로 이 단세포군항체는 충란내 세포에 강하게 반응하고 있었다.
Holographic Data Storage System, one of the next generation data storage devices, is a 2-dimensional page oriented memory system using volume holograms in writing and retrieving process. Recently photopolymer with disc type substrate was selected as a media for the Holographic Data Storage System. The disc tilt occurs when the media rotates and the external disturbance applies. The disc tilt causes the change of the angle between the reference beam and the media, the data cannot be retrieved with the right angle or other data page is retrieved. The tilt is generated in a 2-axis direction (tangential, radial). The tangential tilt direction is the same with the multiplexing plane, while the radial tilt direction is a perpendicular to the multiplexing plane. In this research we propose 2-axis tilt angle servo system. The tilt errors are measured by using external photo detector and the additional red laser. Then the tangential direction tilt is compensated by using the galvano mirror. Also the radial direction tilt is compensated by the rotating prism between the relay lens in the reference field. Finally we confirm the compensation results through the Signal to Noise Ratio(SNR) and Bit Error Rate(BER).
Bacillus cereus $\beta$-amylase was purified by Sephadex G-100 gel filtration, CM Sephadex C-50 ion exchange chromatography and CM Sephadex C-50 ion exchange rechromatography The purified enzyme showed 871 unit/mg of specific activity. The purified enzyme was identified as homogenious by disc PAGE, SDS-PAGE and analysis of reaction product. The purified enzyme showed optimum pH 7.0. optimum temperature 5$0^{\circ}C$, and was stable at 0~5$0^{\circ}C$ and at pH range of 6~10.
김치가 젖산발효식품으로서의 특성을 유지하면서 보존성을 증진시키는 방안의 일환으로, 김치의 젖산 생성량이 낮은 초기 숙성균인 Leuconostoc mesenteroides의 생육에는 무관하면서 김치의 산패에 관여하는 Lactobacillus plantarum을 선택적으로 저해할 수 있는 항균제를 탐색하기 위하여 10여종의 향신료로부터 얻은 에탄올추출물의 항균효과를 조사하였다. Paper disc법에 의한 향신료 추출물의 항균력을 측정한 결과 10여종의 향신료 추출물중 cardamon, thyme 및 cumin의 에탄올추출물은 Lac. plantarum을 선택적으로 저해시키는 항균효과를 나타내었다. 또한 농도별에 따른 cardamon 및 thyme 추출물은 4%에서, cumin 추출물은 1% 이상의 농도에서 항균효과를 나타내었다. SDS-PAGE 및 투과전자현미경의 결과의 분석을 통하여 향신료 에탄을 추출물의 주요 항균작용은 균체 세포벽 및 세포막을 약화시키며 이로 인하여 균체세포의 내용물을 세포외로 유출시킴으로서 성장을 저해 또는 사멸시키는 것으로 나타났다.
Kim et at.(1986)은 유구낭미충 낭액을 감작시켜 만든 단세포군 항체를 CNBr활성화 Sepharose 4B에 연결시켜 친화성 크로마토그래피를 실시하고 낭액에서 A-항원을 분리한 바 있다. 이 연구는 그 항원 단백질의 생화학적 성상을 관찰한 것이다. Disc-PAGE에 의해 4.5~10% 폴리아크릴아마이드 젤에서 나타내는 Rf간을 기초로 분자량을 측정한 결과 A 항원의 분자량은 150,000 dalton이었다. A-항원은 SDS-PAGE에서 15,000, 10,000, 7,000 dalton에 해당하는 polypeptide로 분획이 구별되었다. 10% 2-mcrcaptoethanol로 처리하지 않거나 $95^{\circ}C$에서 5분간 처리하지 않은 A-항원의 SDS-PAGE에서는 7,000 dalton의 polypeptide가 분리되지 않았다. A-항원의 등전점(PI)은 pH6.8이었다. 낭액항원의 각 분획에 반응하는 항체를 갖는 환자혈청으로 A-항원을 SDS-PAGE/EITB한 바 환자혈청은 15,000, 10,000, 7,000 dalton에 해당하는 부위에서만 반응하였다. 낭액 단백질의 약70%를 차지하는 A-항원은 면역학적으로 내열성을 가졌으며 포충(hydatid cyst) 낭액 항원중 Oriol et at.(1971)의 "Antigen B"와 생화학적 성상이 비슷한 단백질이었다.
As a study to elucidate whether taste buds contain specific proteins, rat dorsal lingual epithelium was analysed by electrophoresis. The epithelium of the vallate papilla (with numerous taste buds), the area of the fungiform papilla 9with a few taste buds), and the area between vallate papilla and large filiform papilla (not containing taste buds) were strippled off by treatment with 0.7% EDTA. The epithelial protein was extracted by 1% SDS and 1% Mercaptoethanol in 0.01M phosphate buffer (pH7.2). Extracts were analysed by disc SDS-PAGE. Because the patterns of protein composition from each site were similar with each other as a whole, it is concluded that taste buds do not contain specific protein detected by SDS-PAGE in adult rat. But a protein on M.W. 49000 which lies in the area of molecular weight of keratin molecules was found only in the epithelium containing taste buds. This results suggested that the epithelium containing taste buds differentiate dissimilarly to the epithelium not containing taste buds.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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