Genomic DNAs isolated from crucian carp of four rivers, belonging to the family Cyprinidae was amplified by seven oligonucleotides primers. In the present study, we employed hierarchical clustering method in order to reveal genetic distances and variations. Crucian carp was acquired from Hangang river (CAH), Geumgang river (CAG), Nakdonggang river (CAN) and Yeongsangang river (CAY). The primer BION-12 generated the most loci (a total of 50) with an average of 10 in the CAY population. The primer BION-10 generated the least loci (a total of 19), with an average of 3.8 in the CAG population, in comparison to the other primers used. Seven oligonucleotides primers made 16.7 average no. per primer of specific loci in the CAH population, 7.4 in the CAG population, 8.6 in the CAN population and 0.9 in the CAY population, respectively. The specific loci generated by oligonucleotides primers revealed inter-individual-specific characteristics, thus disclosing DNA polymorphisms. The dendrogram obtained by the seven oligonucleotides primers indicates four genetic clusters. The genetic distance that displayed significant molecular differences was between individuals no.06 and no.08 from the CAG population (genetic distance = 0.036), while the genetic distance among the five individuals that displayed significant molecular differences was between individuals no.08 and no.09 from the CAG population (genetic distance = 0.088). With regard to average bandsharing value (BS) results, individuals from CAY population ($0.985{\pm}0.009$) exhibited higher bandsharing values than did individuals from CAH population ($0.779{\pm}0.049$) (P<0.05). Relatively, individuals of CAY population were fairly closely related to that of CAN location (genetic distance between two populations<0.016).
Licorice plant (Glycyrrhiza spp.) is an important herb, but the major portion of the national demand is imported to Korea because the domestic production base is vulnerable. We performed basic molecular breeding research for domestic cultivation and production. All publicly available G. uralensis EST sequences, which totaled 56,089, were assembled into 4,821 unigenes and examined for microsatellites. Eight polymorphic microsatellite loci were identified and 16 G. uralensis and 6 G. glabra accessions, which were collected from different locations, were genotyped using the microsatellites. Genetic diversity within the accessions was estimated by construction of a dendrogram. The dendrogram was clustered into two groups. The results showed that there is a correlative genetic relationship between species. The microsatellite markers were found to be useful for diversity analysis as they are able to successfully distinguish the Glycyrrhiza accessions.
Genomic DNA isolated from two Porphyra species, P. tenera and P. dentate from Wando located on the southern coast of Korean peninsula was amplified by PCR reaction. The amplified products were separated by agarose gel electrophoresis (AGE) with decamer primer and stained with ethidium bromide. The eight arbitrarily selected primers OPA-04, OPA-06, OPB-01, OPB-08, OPB-10, OPB-11, OPB-14 and OPC-10 generated the shared loci, polymorphic, and specific loci. The size of DNA bands varies from 100 bp to 2,200 bp. The complexity of the banding patterns varies dramatically between the primers and two Porphyra species. A total of 528 loci observed were identified in P. tenera and 443 in P. dentata: 22 polymorphic loci (4.2%) in P. tenera and 30 (6.8%) in P. dentata. 154 shared loci observed, the average 19.3 per primer, were identified in P. tenera and 143 loci, the aver-age 17.9 per primer, in P. dentata species. The number of specific loci in P. tenera and P. dentata was 73 and 77, respectively. The average bandsharing value was $0.623{\pm}0.008$ with P. tenera and $0.560{\pm}0.009$ within P. dentata. The average bandsharing value between two Porphyra species was $0.408{\pm}0.004$, ranged from 0.305 to 0.564. The dendrogram obtained by the eight primers indicates four genetic clusters. The genetic distance between two Porphyra species ranged from 0.076 to 0.627. The individual no. 02 of P. tenera was genetically closely related to no. 01 of P. tenera(genetic distance=0.082). Especially, two entities between the individual DENTATA no.21 and DENTATA no. 19 of P. dentata showed the longest genetic distance (0.627) in comparison with other individuals used. In this study, RAPD-PCR analysis has revealed the significant genetic distance between two Porphyra species pairs (P<0.001).
Seven oligonucleotides primers were shown to generate the shared loci, specific loci, unique shared loci to each species and shared loci by the three species which could be obviously scored. In the present study, 7 oligonucleotides primers produced 401 total loci in the Styela clava (SC) species, 390 in the Halocynthia roretzi (HR) and 434 in the Styela plicata (SP), respectively. Seven oligonucleotides primers generated 275 specific loci in the SC, 341 in the HR and 364 in the SP species, respectively. The oligonucleotides primer BION-23 generated 28 unique loci to each species in the SP species. Especially, the oligonucleotides primer BION-25 produced 7 unique loci to each species, which were identifying each species in the SP species. BION-17 distinguished 21 shared loci by the three ascidian species, major and/or minor fragments of sizes, which were identical in almost all of the samples. Based on the average bandsharing values of all samples, the similarity matrix ranged from 0.519 to 0.774 in the SC species, from 0.261 to 0.683 in the HR species and from 0.346 to 0.730 in the SP species. As regards average bandsharing value (BS) results, individuals from SC species ($0.661{\pm}0.081$) exhibited higher bandsharing values than did individuals from HR species ($0.555{\pm}0.074$) (P<0.05). The dendrogram obtained by the seven oligonucleotides primers indicates three genetic groups. In three ascidian species, the shortest genetic distance (0.071) exhibiting significant molecular difference was also between individual no. 20 and no. 21 within the SP species.
To determine whether pattern recognition based on metabolite fingerprinting for whole cell extracts can be used to discriminate cultivars metabolically, leaves of nine commercial Orostachys plants were subjected to Fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR). FT-IR spectral data from leaves were analyzed by principal component analysis (PCA) and Partial least square discriminant analysis (PLS-DA). The dendrogram based on hierarchical clustering analysis of these PLS-DA data separated the nine Orostachys species into five major groups. The first group consisted of O. iwarenge 'Yimge', 'Jeju', 'Jeongsun' and O. margaritifolius 'Jinju' whereas in the second group, 'Sacheon' was clustered with 'Busan,' both of which belong to O. malacophylla species. However, 'Samchuk', belong to O. malacophylla was not clustered with the other O. malacophylla species. In addition, O. minuta and O. japonica were separated to the other Orostachys plants. Thus we suggested that the hierarchical dendrogram based on PLS-DA of FT-IR spectral data from leaves represented the most probable chemotaxonomical relationship between commercial Orostachys plants. Furthermore these metabolic discrimination systems could be applied for reestablishment of precise taxonomic classification of commercial Orostachys plants.
In this study, seven oligonucleotides primers were shown to generate the shared loci, specific loci, unique shared loci to each species and shared loci by the three species which could be obviously calculated. Euclidean genetic distances within- and between-species were also calculated by complete linkage method with the sustenance of the hierarchical dendrogram program Systat version 13. The genomic DNA isolated from herring (Clupea pallasii), Korean anchovy (Coilia nasus) and large-eyed herring (Harengula zunashi), respectively, in the Yellow Sea, were amplified several times by PCR reaction. The hierarchical dendrogram shows three chief branches: cluster 1 (PALLASII 01, 02, 03, 04, 06 and 07), cluster 2 (NASUS 08, 09, 10, 11, 12, 13 and 14), and cluster 3 (ZUNASHI 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 and PALLASII 05). In three clupeid species, the shortest genetic distance displaying significant molecular difference was between individual PALLASII no. 03 and PALLASII no. 02 (0.018). Individual no. 06 of PALLASII was most distantly related to NASUS no. 11 (genetic distance = 0.318). Individuals from herring (C. pallasii) species (0.920) exhibited higher bandsharing values than did individuals from Korean anchovy (C. nasus) species (0.872) (P<0.05). As a result, this PCR analysis generated on the genetic data displayed that the herring (C. pallasii) species was widely separated from Korean anchovy (C. nasus) species. Reversely, individuals of Korean anchovy (C. nasus) species were a little closely related to those of large-eyed herring (H. zunashi) species.
본 연구는 RAPD표지를 이용하여 국내외에서 수집된 고추 유전자원들간의 유전적관계를 평가하고자 수행되었다. Random primer를 이용한 고추의 PCR반응은 $MgCl_2$ 3mM, Taq. DNA polymerase 1.5U, 주형 DNA 10ng, dNTPs $200{\mu}M$, random primer 200nM 그리고 $42^{\circ}C$의 annealing 온도조건으로 최적화하였다. 80개의 random primer로부터 높은 밴드선명도와 재현성을 보이는 16개가 선발되었으며 70%의 GC함량을 갖는 primer들이 GC함량이 60%인 것보다 DNA증폭에 있어 효과적이었다. 31개의 고추품종및 계통들에 대해 71개의 polymorphic밴드와 22개의 monomorphic밴드를 포함하는 총 93개의 DNA밴드가 선발된 16개의 random primer들로부터 형성되었다. Primer당 약 4.4개의 polymorphic밴드가 형성되었다. 이들 71개의 polymorphic밴드를 이용하여 유사도지수가 구해졌으며 이를 근거로 31고추 계통 또는 품종들을 뚜렷이 구분하는 dendrogram이 작성되었다.
본 연구는 RAPD PCR 분석을 통하여 한국의 서한아 수계(한강, 금강)와 남한아 수계(섬진강, 낙동강)에 서식하는 쉬리 집단들 간의 유전변이를 비교하였다. 4집단들 간의 유전적 변이를 분석한 결과, 사용한 12개의 random primer들 모두에서 서한아 수계 집단과 남한아 수계의 집단들을 구분하여 주는 특이적 PCR 단편들을 확인할 수 있었다. 유전적 유사도 분석에서 한강, 금강의 서한아 수계 집단들과 섬진강, 낙동강의 남한아 수계 집단들의 유전적 유사도는 0.49~0.53로 낮게 나타났고 유전적 거리는 0.63~0.71로 높게 나타났다. 유전적 거리에 기초한 UPGMA dendrogram 분석에서도 서한아 수계와 남한아 수계의 집단들이 명확하게 구분되었다. 따라서 서한아와 남한아 수계의 쉬리 집단은 유전적 구조에 있어 큰 차이가 있으며, 남한아 수계의 쉬리는 서한아 수계 쉬리와 진화적으로 뚜렷하게 구분되는 집단으로 판단된다.
To investigate the genetic relationship among 12 species belonging to the Fusarium section Martiella, Dlaminia, Gibbosum, Arthrosporiella, Liseola and Elegans, the internal transcribed spacer(ITS) regions of ribosomal DNA (rDNA) were amplified with primer pITS1 and pITS4 using the polymerase chain reaction(PCR). After the amplified products were digested with 7 restriction enzymes, restriction fragment length polymorphism (RFLP) patterns were analyzed. The partial nucleotide sequences of the ITS region were determined and compared. Little variation was observed in the size of the amplified product having sizes of 550bp or 570bp. Based on the RFLP analysis, the 12 species studied were divided into 5 RFLP types. In particular, strains belonging to the section Martiella were separated into three RFLP types. Interestingly, the RFLP type of F. solani f. sp. piperis was identical with that of isolates belonging to the section Elegans. In the dendrogram derived from RFLP analysis of the ITS region, the Fusarium spp. examined were divided into two major groups. In general, section Martiella excluding F. solani f. sp. piperis showed relatively low similarity with the other section. The dendrogram based on the sequencing analysis of the ITS2 region also gave the same results as that of the RFLP analysis. As expected, 5.8S, a coding region, was highly conserved, whereas the ITS2 region was more variable and informative. The difference in the ITS2 region between the length of F. solani and its formae speciales excluding F. solani f. sp. piperis and that of other species was caused by the insertion/deletion of nucleotides in positions 143-148 and 179-192.
The pathotypes of Cercospora beticola, causal agent of sugar beet leaf spot disease, were identified by application of pathogenicity test using 100 isolates obtained from the provinces with intensive sugar beet cultivation. For the identification of pathotypes, five sugar beet cultivars were used each with different resistance factors. Cultivar reactions were determined by inoculation of cultivars with the isolates under controlled conditions and measuring disease severity on the $15^{th}$ day according to the 1-9 KWS Scale. Based on the reactions of the five cultivars, a total of 15 pathotypes were detected. All employed sugar beet cultivars were resistant to Pathotype no:1 comprising most of the isolates. Genetic diversity of the causal agent was characterized by AFLP reaction. The products acquired at the end of AFLP reaction were detected by means of Beckman CEQ 8800 DNA Capillary Series Analysis and the results obtained were evaluated according to the similarity index UPGMA. For the genetic analysis of C. beticola isolates, 9874 polymorphic fragments of sizes between 100 and 500 bp were analysed which were generated by nine primers. The dendrogram derived from AFLP analysis depicted the existence of five different subgroups. The polymorphism rate among isolates was 91.13% and the dendrogram distribution of the pathotypes obtained by pathogenicity indicated that pathotypes were not discriminated and did not compose any groups.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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