• Plant Biotechnology Reports
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• 제4권4호
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• pp.329-334
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• 2010

Multiple sequence alignments showed that the prolines at the 25th, 129th, 153rd, 242nd, 322nd, and 434th amino acids in 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase (EPSPS) from Agrobacterium sp. strain CP4 are strongly conserved in various prokaryotic EPSPS proteins. Single point mutations of the conserved prolines to alanine (P25A, P153A, P242A, P322A, and P434A) were introduced in the CP4 EPSPS in order to investigate the importance of the conserved prolines for the enzyme properties. The point mutations caused decreases in substrate binding affinity and catalytic efficiency as well as the glyphosate resistance, in general. Especially, the 25th and 242nd prolines located in the polypeptide hinges connecting top and bottom domains of CP4 EPSPS as well as the 434th proline at the C-terminus of the enzyme turned out to be crucial for the enzyme activity.

• Food Science and Biotechnology
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• 제15권6호
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• pp.954-958
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• 2006

A comprehensive safety evaluation was conducted to assess the potential allergenicity of newly introduced proteins in genetically modified (GM) crops. We assessed the allergenicity of CP4 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase (EPSPS) in GM soybeans. This assessment was performed by IgE immunoblotting with soy-allergic children's sera, amino acid sequence homology with known allergens, and the digestibility of CP4 EPSPS. No differences in IgE-antigen binding by immunoblotting were found between GM soy samples and the corresponding non-GM samples. Based on the comparison of EPSPS amino acid sequence homology with current allergen databases, no known allergen was found. In addition, CP4 EPSPS protein was rapidly digested by simulated gastric fluid (SGF). Taken together, these results indicate that GM soybeans have no allergenicity in children and are as safe as conventional soybeans.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제49권2호
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• pp.65-68
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• 2006

• Food Science and Biotechnology
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• 제17권5호
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• pp.1092-1096
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• 2008

Commercial food products from major cities of Coahuila, Mexico were screened to identify residues of transgenic deoxyribonucleic acid (DNA) and/or proteins. After performed, an inventory on all products that contained a soybean-based ingredient in a commercial grocery store in the city of Saltillo, Coahuila, Mexico, 245 food products were identified and grouped in 15 classes according to the soybean ingredient as well as the manufacturing process used for their elaboration. Similar sampling was made for the different food classes in the cities of Monclova, Piedras Negras, and Torreon. A total of 88 samples were analyzed and DNA was extracted by the hexadecyltrimethyl-ammonium bromide (CTAB) technique with slight modification to obtain better DNA quality (1). In addition, segments of the transgenic genes one that codifies for 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase (epsps), cry 1A, and the cauliflower mosaic virus (CaMV) promoter were amplified using polymerase chain reaction (PCR). The transgenic proteins 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase (CP4 EPSPS) and insecticidal crystal protein (Cry 1Ab/Ac) were identified using double antibody sandwich-enzymatic linked immunoassay analysis (DAS-ELISA). Presence of transgenic genes and/or proteins was identified in 35.3% of the commercial products samples.

• Applied Biological Chemistry
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• 제45권4호
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• pp.185-189
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• 2002

우리나라의 유전자변형농산물 의무 표시제가 시행됨에 따라 수입 유전자변형농산물 중 유전자변형 콩의 혼입유무를 판별할 수 있는 검정기술 개발이 요구되고 있다. 근사미(glyphosate)제초제에 저항성을 나타내는 토양미생물인 Agrobacterium CP4 유래의 5-enolpyruvyl shikimate-3-phosphate synthase(EPSPS) 유전자의 도입여부를 PCR로 진단할 수 있는 특이프라이머를 제작하여 제초제저항성 콩(Roundup Ready Soybean, RRS)을 검정할 수 있는 PCR조건을 확립하였으며 콩의 내재유전자인 lectin유전자와 RRS특이 프라이머를 이용하여 duplex PCR에 의한 제초제저항성 콩의 검정법을 확립하였다. 또한 수입 콩 및 콩나물에 대하여 근사미 제초제 처리로 저항성 개체를 판별하는 생물검정법도 확립하여 저항성 개체의 잎에서 분리한 genomic DNA에 대하여 EPSPS특이 프라이머를 이용하여 분석한 결과 RRS특이적인 PCR밴드를 확인하였다. 또한 수입 콩의 백립중과 종실의 제색을 고려할 때 단일품종이 아닌 여러 품종이 혼합되어 있음을 확인하였다.

• 한국작물학회지
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• 제49권3호
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• pp.227-231
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• 2004

최근 급격히 증가되는 유전자 변형 식품의 안정성 논란과 관련하여 콩나물 및 콩나물 원료에 사용되는 국산 및 수입산 콩에 대한 유전자 변형 유전자의 정량 검사를 실시하고, 미량이나마 함유된 변형 유전자의 도입과정에 관한 연구를 실시하여 다음과 같은 결과를 얻을 수 있었다. 1.콩나물의 유전자 변형 농산물 검사는 2000년과 2001년에 원료콩 96건, 완제품 123건 등 총 219차례 실시하였다. 2. 원료콩에서는 단 한 건의 양성반응도 없었던 반면, 완제품에서는 2000년에 3건, 2001년에 8건에서 0.01-0.17％의 함량으로 CP4EPSPS 또는 35S promoter도입유전자가 검출되었으며 이는 법적 기준치인 3％보다 훨씬 낮은 비의도적 혼입이었다. 3. 외래유전자가 검출된 11건의 완제품은 국산콩으로 만든 7개 제품과 중국산 수입콩으로 만든 4개 제품이었다. 4. 이들 도입 유전자의 원료콩 및 제조과정 중 유입 경로를 확인하기 위하여 다양한 시료를 검사하였다. 샘플은 양성반응제품 원료콩 전수검사, 원료콩 표면, 저장고 바닥 및 정선기 주변, 그리고 콩나물 제품 포장 필름 표면 및 포장지 원료로 사용되는 옥수수 타분의 유전자 변형 여부를 정량검사하였다. 이들 중 두 개의 옥수수 타분 시료에서만 0.1％의 35S promoter 유전자가 검출되었다. 5. 콩나물 포장 공정 중 옥수수 타분을 사용하는 포장지에서 유래되는 변형 유전자 오염을 제시하였다. 향후, 콩나물 변형 유전자 검사시 용수, 필름 표면 등 제품주변에 존재하는 도입 유전자의 정량분석 방법 구축과 원료콩 샘플 방법 및 샘플량의 표준화가 시급히 필요하다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제34권3호
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• pp.253-261
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• 2007

본 연구에서는 제초제 저항성 bar 유전자 및 CP4-EPSPS 유전자를 포함하는 발현벡터로 형질전환되고 항생제 마커 유전자를 포함하지 않는 제초제 복합 저항성 감자 식물체를 육성하고자 실험하였다. Bar 유전자를 포함하는 pCAMBIA3300에 CaMV35S 프로모터에 의해 조절되는 CP4-EPSPS 유전자를 도입하여 식물체용 발현 운반체를 제작하고, 이를 Agrobacterium tumafaciens EHA105에 도입하였다. 태동밸리 잎 절편체를 Agrobacterium과 공동배양한 다음, phosphinothricin 0.5 mg/L이 첨가된 배지에서 선발하고 호르몬 무처리 MS발근시켜 형질전환체 (E3-6)를 얻었다. PCR, Southern 분석, 효소면역반응 분석 등을 통해 두 가지 유전자가 도입되었으며 이들이 정상적으로 발현됨이 확인되었다. E3-6 식물체는 glufosinate-ammonium의 어린 식물체 잎 도포처리, glyphosate 용액에 치상한 식물체 조직에서의 shikimate 축적 여부 조사를 통하여 조사한 결과, 두 제초제에 대해 저항성을 나타내었다. 또한 형질전환감자의 전식물체에 대해 glyphosate와 glufosinate-ammonium 각각의 용액 또는 이들의 혼합물을 처리한 후 제초활성 반응을 조사한 결과, E3-6 형질전환 감자는 두 제초제를 각각 단독으로 처리할 때나 혼합하여 동시 처리할 때에도 동일한 저항성이 나타남을 확인하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제24권10호
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• pp.1421-1426
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• 2014

Although a large number of AroA enzymes (EPSPS: 5-enopyruvylshikimate-3-phosphate synthase) have been identified, cloned, and tested for glyphosate resistance, only two AroA variants, derived from Agrobacterium tumefaciens strain CP4 and Zea mays, have been utilized to produce the commercial glyphosate-resistant crops. Here, we have used a PCR-based twostep DNA synthesis method to synthesize an aroA gene ($aroA_{A.\;metalliredigens}$) from Alkaliphilus metalliredigens, encoding a new EPSPS. Furthermore, transgenic Arabidopsis with the new $aroA_{A.\;metalliredigens}$ gene was obtained to confirm the potential of the novel aroA gene in developing glyphosate-resistant crops.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2003년도 생물공학의 동향(XIII)
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• pp.220-222
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• 2003

Legislation enacted worldwide to regulate the content of genetically modified organisms (GMOs) in crops, foods, and ingredients, reliable and sensitive methods for GMO detection have been developed. Proteins produced in GMO plants can be determined by qualitative and quantitative analyses and thus GMO designation has performed exactly. Target proteins selected in this study were neomycin phosphotransferase II (NPTII), 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase (CP4 EPSPS), cucumber mosaic virus(CMV), and phosphinothricin acetyltransferase (PAT). Analytical method employing western blotting was used for final characterization.