This study was carried out to determine the effects of plant growth regulators on cell culture and organogenesis from Sicyos angulatus L. using explants of leaves, stems and cotyledons. Optimal callus induction for S. angulatus was obtained on MS medium with 0.1mg/$\ell$ BA and 2.0mg/$\ell$ 2,4 -D from cotyledons, 0.1mg/$\ell$ BA and 5.0mg/$\ell$ NAA from leaves explants, Optimal media for subculture and growth of S. angulatus callus were 1/2 MS medium with 0.1mg/$\ell$ BA and 1.0mg/$\ell$ 2,4 -D for solid culture, and 0.1mg/$\ell$ 2,4-D for suspension culture. Many adventitious roots with some shoots were formed were formed from leaf and cotyledon explants of S. angulatus during callus induction with optimal combinations of plants growth regulators.
In this paper, we would like to show unexpected morphogenic potential of cell suspensions derived from seedling explants of Gentiana kurroo (Royle). Suspension cultures were established with the use of embryogenic callus derived from seedling explants (root, hypocotyl and cotyledons). Proembryogenic mass proliferated in liquid MS medium supplemented with $0.5mg\;l^{-1}$ 2,4-D and $1.0mg\;l^{-1}$ Kin. The highest growth coefficient was achieved for root derived cell suspensions. The microscopic analysis showed differences in aggregate structure depending on their size. To assess the embryogenic capability of the particular culture, 100 mg of cell aggregates was implanted on MS agar medium supplemented with Kin ($0.0-2.0mg\;l^{-1}$), $GA_3$ ($0.0-2.0mg\;l^{-1}$) and AS ($80.0mg\;l^{-1}$). The highest number of somatic embryos was obtained for cotyledon-derived cell suspension on $GA_3$-free medium, but the best morphological quality of embryos was observed in the presence of $0.5-1.0mg\;l^{-1}$ Kin, $0.5mg\;l^{-1}$$GA_3$ and $80.0mg\;l^{-1}$ AS. The morphogenic competence of cultures also depended on the size of the aggregate fraction and was lower when size of aggregates decreased. Flow cytometry analysis reveled luck of uniformity of regenerants derived from hypocotyl suspension and 100% of uniformity for cotyledon suspension.
기관분화(器官分化)된 유채의 조직으로부터 재분화되는 식물체의 획득빈도를 높이고자 이에 관여하는 몇가지 요인에 대한 실험을 수행하여 얻어진 결과는 다음과 같다. 유채의 종자, 무균배양(無菌培養)된 자엽(子葉), 하배축(下胚軸) 및 엽절편(葉切片)배양에서 명상태에서 보다는 암상태에서 캘러스의 생장이 왕성하였고, 하배축(下胚軸)과 자엽조직(子葉組織)에서 형성된 캘러스에서 shoot 분화능력이 높은 편이었다. 자엽(子葉) 및 하배축(下胚軸) 조직(組織)의 캘러스형성에는 2, 4-D 단용보다 2, 4-D와 kinetin 또는 BAP를 혼용하는 것이 효과적이었으며, 자엽조직(子葉組織)의 경우는 2, 4-D(1.0 mg/${\ell}$)와 0.1mg/${\ell}$의 kinetin이 첨가된 배지에 형성된 캘러스를 0.1mg/${\ell}$의 NAA와 2.0 mg/${\ell}$의 kinetin이 첨가된 배치에 이식하였을 때 shoot 분화율이 16.7%로 가장 높게 나타났다. 하배축(下胚軸) 조직(組織)에서는 1.0mg/${\ell}$의 2, 4-D와 0.5mg/${\ell}$의 kinetin이 첨가된 배지에서 형성된 캘러스를 0.1mg/${\ell}$의 NAA와 4.0mg/${\ell}$의 kinetin이 혼용된 배지에 이식하였을 때 shoot 분화율(分化率)이 24%로 가장 높게 나타났다. 자엽(子葉) 및 하배축(下胚軸) 조직(組織)의 캘러스 형성과 shoot분화능력의 유채 품종간(品種間) 차이는 매우 뚜렷하게 인정되었고, 자엽(子葉)보다는 하배축(下胚軸) 조직(組織)에서 형성된 캘러스에서 shoot 분화능력이 현저히 높게 나타났다.
사과 자엽조직으로부터 기내에서 식물체를 재분화시키는 데에 있어서 배양 광조건 및 절편체 극성과의 관계를 살펴보고자 사과‘Fuji’품종의 자엽을 재료로하여 광조건 및 광질을 달리하여 배양하였고, 또한 여러 가지 형태의 절편체를 사용하여 시험을 수행하였다. 배양환경조건 중 광조성에 따른 신초 재분화율을 본 결과 배양 초기 10일간 암배양한 후 명 배양한 처리구에서 가장 높은 재분화율을 나타내었으며, 배양중기의 암처리는 효과가 없었다. 광질별로 비교할 때 전처리로 4일간 암배양한 후 청색광을 조사한 처리구에서 높은 신초 재분화율을 나타내었다. 신초 재분화 유기와 절편체 극성과의 관계를 보면 모든 신초의 형성은 절제된 자엽의 기부 끝쪽에서만 이루어졌다. 즉, 기부쪽 절편체의 말단부 절단면에서보다는 기부쪽 절편체와 말단 절편체의 기부쪽 절단면에서 식물체의 재분화가 이루어짐을 알 수 있었다. 신초 유기는 배축의 기부쪽 자엽 절편체 에서 매우 높게 나타난 반면 자엽의 말단부위에 가까운 곳에서는 현저히 감소하였다.
자귀나무의 대량증식을 위한 신초 형성 및 뿌리 유도를 위해 시토키닌과 옥신이 함유된 배지에 배양하였다. 전체적인 신초 유도율은 평균 56.2%였으며, 그 중 가장 높은 유도율을 보인 것은 73%의 zeatin으로 신초 형성에 효과적인 것으로 나타났을 뿐 아니라 TDZ와 혼용 처리했을 때에도 뛰어났다. 특히, zeatin 1.0mg/L를 처리한 하배축에서 대량의 줄기가 형성되었으며, 혼용처리의 경우 zeatin 2.0 + TDZ 0.05mg/L의 뿌리 절편에서 효과적으로 나타났다. 증식된 식물체의 뿌리 유도는 식물생장조절물질 처리보다는 무처리 배지에서 활발한 것으로 나타났다. 본 연구는 기내 조직배양을 통해 자귀나무 식물체에서 신초를 대량으로 형성시켰고, 증식된 신초에서 다시 뿌리를 유도함으로써 온실에서 경화시킬 수 있었다. 이로써 약용수종인 자귀나무의 대량 증식이 가능한 토대를 마련하였고, 약용수목자원에 대하여 조직배양을 이용하여 기내에서 장기적으로 보존할 수 있는 기반을 마련하는데 의의가 있다고 할 수 있다.
본 연구는 기내에서 발아된 까마중 유식물체의 조직별로 신초 및 뿌리 유도를 통해 효율적인 재분화 조건을 확립하고자 실시하였다. 신초 형성은 식물체 부위별로 서로 달랐으며, 잎에서의 신초 형성빈도가 자엽이나 하백축 그리고 상배축보다 높았다. 절편체당 신초의 수는 잎과 자엽에서 다소 많았으며, 신초의 길이도 다른 부위에 비해 잎과 자엽에서 빠른 증식과 신장을 나타내었다. 특히, 2.0 mg $L^{-1}$ BAP가 첨가된 배지에서 재분화율, 신초의 수와 길이가 증가하여 2.0 mg $L^{-1}$ BAP가 고빈도 신초의 유도 및 생장에 효율적인 것으로 판단되었다. 뿌리분화는 IBA와 IAA가 NAA보다 더 효과적인 것으로 나타났으며, 0.05 mg $L^{-1}$ IAA가 첨가된 배지에서 뿌리 형성율이 90%이며, 뿌리의 갯수와 길이도 각각 평균 4.0개와 7.82 cm로 가장 양호하게 나타났다. 더욱이 배양토에 이식한 재분화체는 100%의 생존율을 보였으며 정상적인 식물체로 생장하였다. 이러한 결과를 토대로 2.0 mg $L^{-1}$ BAP 조건에서의 잎 절편에서 다발성 신초 유도, 그리고 0.05 mg $L^{-1}$ IAA 조건에서의 뿌리형성 유도가 까마중의 대량번식을 위한 최적의 조건임을 알 수 있었다.
Claudia Magioli;Erika Tarre;Krul, William-Robert;Elisabeth Mansur
Journal of Plant Biotechnology
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제3권1호
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pp.19-25
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2001
Induction of somatic embryogenesis from Brazilian eggplant variety F-100 was studied in response to four auxin types. NAA, at the optimal concentration of 54 $\mu\textrm{m}$, was the only one that resulted in the induction of somatic embryos in either leaf and cotyledon explant and, at murk lower intensity and frequency, in hypocotyl and epicotyl explants. The optimal temperatures for embryo induction were 28 and 35$^{\circ}C$ for cotyledon and leaf explants. Incubation at 22$^{\circ}C$ caused a significant reduction both in the frequency and intensity of induction. This system was used to study the effects of position and orientation of the tissue on the culture medium as well as of antibiotics and explant co-cultivation with Agrobacterium on the efficiency of somatic embryo induction. The intensity of embryo induction was greater in the midsections of cotyledons relative to apical and basal regions, when the abaxial surface was in contact with the culture medium. The presence of antibiotics resulted in approximately 40-60% reduction of embryo induction relative to control explants, which originated 335$\pm$26.6 embryos. Co-cultivation with Agrobacterium before treatment with antibiotics caused a more drastic reduction (80-99%). Ampicilin treatment after cocultivalion with Agrobacterium caused the least inhibitory effect, allowing the production of 60 embryos/explant.
박과식물과 우수한 접목친화성을 가진 것으로 알려진 야생식물인 Sicyos angulatus L.(일명 '안동오이')의 화기, 자엽 및 잎 조직을 배양하여 캘러스유도 및 체세포배의 획득 가능성을 밝히고 기내배양에 의한 묘의 대량증식에 필요한 기초자료를 얻고자 본 실험을 수행하였다. 자엽이나 화기 절편체로부터 캘러스유도를 위한 가장 적합한 식물생장조절제는 MS 배지에 각각 2,4-D 2.0㎎/L + BA 0.1 ㎎/L와 2,4-D 1.0㎎/L + BA 0.1 ㎎/L를 첨가한 것이었다. 잎 및 자엽 절편체로부터는 체세포배 발생이 되지 않았으나 화기 절편체에서는 체세포배 발생이 관찰되었다. 화기로부터 유래한 캘러스를 NAA 1.0 ㎎/L+ kinetin 1.0 ㎎/L가 첨가된 1/2 MS기본배지에 배양하면 가장 효율적으로 체세포배를 획득할 수 있었고, 탄소원으로는 sucrose 20 g/L가 가장 효율적이었다.
본 연구는 Agrobacterium tumefaciens를 이용한 형질전환의 효율성을 높이기 위한 기초자료를 제공하고자 실시되었다. 선발배지에 사용되는 kanamycin에 대한 토마토 자엽전편체의 감응성 검정결과 50mg/L가 적합한 것으로 제시되었다. 토마토 절편체에는 부정적인 영향을 주지 않고 배지내 Agrobacterium의 제거에 적합한 cefotaxime의 농도로는 200mg/L가 선정되었다. Agrobacterium과의 공동배양에 의해 자엽절편체로부터의 callus형성과 신초 재분화가 현저히 억제되었으며 공시된 3품종의 토마토의 경우에는 3일간의 공동배양기간이 callus형성과 신초 재분화에 적합한 것으로 판단되었다. 재분화 신초에 대한 형질전환여부검정은 GUS염색법과 NPTII primer를 이용한 PCR검정을 실시하였으며 공시된 3품종에서 모두 형질전환 신초를 획득하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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