• Applied Biological Chemistry
• /
• 제41권5호
• /
• pp.337-341
• /
• 1998

다양한 초발 pH에서 호알칼리성 Coryneform bacteria TU-19 균주를 배양하면서 이 균주의 형태적, 배양적 특성을 조사하였다. 그 결과 $pH\;9.0{\sim}10.0$의 초발 pH 범위에서 공시균주는 정상적인 성장을 보였으나 pH 12.0에서는 성장이 완전히 저해되었다. 흥미롭게도 본 균주는 배지의 초발 pH에 따라 균체의 형태적 변화가 관찰되었다. 즉 pH 8.0, 대수증식기에서 이 균은 길게 둘둘말린 filament 형태를 이루고 있었으나 최적 pH(10.0)에서는 한 개 혹은 두 개의 짧게 뻗은 rod 형태를 보였다. 또한 이 균은 $pH\;9.0{\sim}11.0$ 범위에서 배양할 경우 배양액의 최종 pH를 자신의 생육에 적합하도록 8.5 근처로 조절할 수 있음이 확인되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제24권2호
• /
• pp.160-165
• /
• 1996

An alkalophilic bacterium producing alkaline protease(s) was isolated from soil. It was a Gram-positive, non-sporulating, immotile, irregular rod, strictly aerobic, and weak acid-forming bacterium. The morphological, physiological, and biochemical characteristics of the isolate resembled those of the Coryneform bacteria. However, there was not any species within this genera to which this microorganism can be closely matched. Therefore, it is provisionally identified as a Coryneform bacterium TU-19.

• Applied Biological Chemistry
• /
• 제38권6호
• /
• pp.534-540
• /
• 1995

토양에서 분리된 호알칼리성 coryneform bacteria TU-19는 적어도 세종류의 단백질분해효소(Protease I, II, III)를 생성분비하였다. 이 균주의 효소생산과 관련된 배양조건을 조사해본 결과 최적온도 및 pH는 각각 $30^{\circ}C$와 10.0인 것으로 나타났다. 이틀 배양된 배양액으로부터 이 효소들을 정제하기 위해서 ammonium sulfate fractionation, gel filtration 및 QAE-Sephadex column chromatography 등을 순차적으로 행하였다. 그 결과 이들 세종류의 효소는 SDS-PAGE pattern으로 평가했을 때 single band로 순수 정제되었으며, 각각의 분자량은 120, 80, 45 kDa이었다. 정제된 효소의 특성을 살펴보면 Pretense I과 II의 최적 pH와 온도는 각각 $10.5,\;45^{\circ}C$이었으며, Protease III는 11.0과 $50^{\circ}C$로 나타났다. 또한 이들 세효소는 10 mM PMSF 농도에서 효소활성을 완전히 상실하였으며, pCMB, 1,10-phenanthroline, IAA, EDTA에는 별 영향이 없는 것으로 보아 serine protease의 일종으로 생각된다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제2권3호
• /
• pp.165-177
• /
• 1974

• 미생물학회지
• /
• 제22권3호
• /
• pp.175-181
• /
• 1984

In order to develope a protoplast fusion system for industrial coryneform bacteria, the optimum conditions for the formation and regeneration of progoplast were examined for Brevibacterium flavum and Corynebacterium glutamicum and the protoplast fusion was performed. For the formation of the protoplast of B. flavum and C. glutamicum, the optimum time for penicillin G. treatment to obtain protoplast was mid-exponential growth phase ($O.D_{580}=0.6-0.8,\;8.0{\times}10^7-1.0{\times}10^8cell/ml$). At the optimum conditions (0.3units/ml penicillin G and $400{\mu}g/ml$ lysoyme for treatement), frequencies of protoplast formation and protoplast regeneration were 99% and 25%, respectively. Protoplast regeneration frequency was highest under the optimum conditions for the protoplast formation. Addition of 25mM $Mg^{2+}\;and\;50mM\;Ca^{2+}$ to the regeneration medium further increased the regeneration frequencies. The protoplast fusion frequencies of B. flavum and C. glutamicum in intraspecies fusion were $1.0{\times}10^{-8}\;and\;7.8{\times}10^{-4}$, of the regenerated protoplast respectively, when 33% of PEG (polythylene glycol) 6,000 was used as the fusing agent.

• KSBB Journal
• /
• 제6권3호
• /
• pp.223-230
• /
• 1991

Using the shuttle vector pECCGl between Escherichia coli and Corynebacterium glutamicum and C. glutamicum strain JS231 grown in the medium supplemented with penicillin-G, which inhibits the formation of cross-links in the peptidoglycan of bacterial cell wall, various parameters involved in electroporation system including resistance, electric field strength, capacitance, DNA concentration, and cell density were investigated independently and optimized for the high efficiency transformation of coryneform bacteria. Using cells grown with 0.3U/ml of penicillin-G and harvested at A600 of 0.7-0.8, transformation efficiencies of 107-l08 transformants/$\mu\textrm{g}$ of DNA with Corynebcctertum glutamicum strain JS231 and wild type ATCC13032 were achieved under conditions of 12.5kV/cm of electric field strength, 400 ohms of resistance, $25\mu$F of capacitance, 3$\times$108 cells per transformation(1.2$\times$1010 cells/ml) and 100ng of plasmid DNA per transformation.

• KSBB Journal
• /
• 제5권3호
• /
• pp.299-306
• /
• 1990

대장균과 코리네형 세균간의 shutle vector pECCGI과 pECCD2를 제작하고, plasmid pECCGI과 glycine배지에서 다양한 Corynebacterium glutamicum을 사용하여 전기장 충격법에 의한 형질전환에 있어서 여러 조건을 조사한 결과 세포 현탁액 40ul와 DNA 2ul의 혼합액 사용시 저항 600 obms, 전기장의 세기 12.5kv/cm, DNA양 10ng, 세포수 $4.5$\times$10^8$와 세포회수 시기를 1.0이하의 $A^6^0^0$으로 했을때 $10^6$transformants/ug of DNA의 형질전환 효율을 보였다.

• 미생물학회지
• /
• 제22권4호
• /
• pp.249-255
• /
• 1984

To develop the host-vector system for industrial Coryneform bacteria that seemed to be the most suitable microorganisms for molecular breeding of genes involved in the production of amion acids, nucleotides, and other products of industrial interest, broad host range E. coli plasmid R 1162 DNA was transformed into Brevibacterium ammoniagenes and the plasmids pKU6 isolated from a transformant was physically characterized. All other plasmids from the transformed cells except pKU6 exsisted as multimeric forms in Brevibacterium ammoniagenes. The plasmid DNA was retransformed into Corynebacterium glutamicum with a high frequency ($1.32{\times}10^{-1}$ per cell) and maintained stably both in Brevibacterium ammoniagenes and Corynebacterium glutamicum after 100 generations of cultures with 25-30 copy number per cell. The size of both plasmid pKU6 and plasmid R1162 were the same and restriction maps by EcoR I, Ava I, Pst I, Pvu II and Hinc II were also similar.

• 미생물학회지
• /
• 제23권3호
• /
• pp.190-196
• /
• 1985

For frequency improvement of protoplast fusion in Brevibacterium flavum, Brevibacterium lactofermentum lactofermentum and Corynebacterium glutamicum, the effect of plasma expanders on fusion and cell wall regeneration, compatison between direct and two-step selection method, tendency of fusion frequency according to pH of fusion fluid and polyethylene glycol concentration were examined. By addition of 3% polyvinyl pyrrolidone to cell wall regeneration medium, regeneration frequencies were expressed 23 (Brevibacterium lactofermentum), 10.4 (Brevibacterium flavum) and 2.7 (Corynebacterium glutamicum) times higher than those of none polyvinyl pyrrolidone medium respectively.

• 한국식품영양과학회지
• /
• 제15권1호
• /
• pp.63-68
• /
• 1986

Loin햄의 염지기간중의 육과 염지액으로부터 관련 세균을 분리 동정하고 염지 경과에 따른 대장균군, 저온균 및 내염균의 변화를 조사한 결과는 다음과 같다. 1. 분리된 세균은 총96주로 Gram양성균이 88주이었고, Gram음성균이 8주이었으며, staphylococcus속이 24주로 가장 많았으며 Bacillus속(21) streptococcus 속(16), Micrococcus 속 (13), Lactobacillus 속(10)의 순서로 검출 되었고, Coryneform 속과 Microbacterium 속이 각 2주로 분리되었다. 2. Micrococcus 속은 M. varians가 10주 M. luteus가 3주로 분리되었고, streptococcus 속은 S. faecium이 14주 S. lactis가 2주이었고, Lactobacillus속은 L. plantarum이 4주, L. brevis와 L. viridesence가 각2주, L. casei가 1주로 분리되었다. 3. 염지 경과중 염지육에서의 세균수 변화는 대장균군과 저온균수는 감소하는 경향을 나타내었으며 내염균은 10일까지 증가한 다음 감소하였다. 4. 염지액에서의 세균수 변화는 대장균군은 염지경과 10일째가 가장 검출율이 높았으며, 저온균수는 4일까지 증가한후 감소하는 경향이었고 내염균은 20일까지 서서히 증가하는 경향이었다.