재조합 E. coli를 이용한 MCL-PHA의 생산에서 fatty acid pathway로부터 PHA 생합성 전구체 물질들이 만들어진다는 사실과 함께 이에 관여하는 enzymes이 밝혀지고 있다. 본 논문에서는 protein homology search로부터 탐색된 paaG와 ydbU genes의 PHA 생합성에서의 역할을 확인하기 위하여 paaG와 ydbU gene이 각각 knock-out된 mutant E. coli strains 를 제작하였다. 제작된 mutant E. coli들은 모균주들보다 낮은 PHA 농도와 함량을 가졌으며, 이러한 결과들로부터 paaG와 ydbU는 fatty acid pathway에서 PHA synthesis의 전구체 물질들을 공급한다는 사실을 확인하였다. 또한, 새로운 FadB homologous enzyme YgfG를 탐색하였으며, ygfG gene이 overexpression된 균주와 ygfG mutant를 제작하여 PHA 합성을 실험한 결과 ygfG도 paaG와 ydbU와 유사한 역할을 한다는 사실을 밝혔다. 이러한 연구결과들은 E. coli에서의 MCL-PHA 단량체들의 합성 경로를 확인하여 효과적인 PHA 생산 균주를 제작할 수 있게 할 것이다.
Prophylactic effects of Bifidobacterium longum HY8001, Korean isolate, against Escherichia coli O157:H7 and Salmonella typhimurium DT104 enteric infection were examined at four groups of specific pathogen free(SPF)-ICR mouse for each pathogen. B. longum HY8001+B. typhimurium DT104+B. longum HY8001(BL+ST+BL) group and B. longum HY8001+E. coli O157:H7+B. longum HY8001(BL+E+BL) group were fed with B. longum HY8001 before and after E. coli O157:H7 or s. typhimurium DT104 challenge, while B. longum HY8001+S. typhimurium DT104(BL+ST) and B. longum HY8001+e. coli O157:H7(BL+E) groups were fed with B. longum HY8001 only before E. coli O157:H7 or S. typhimurium DT104 challenge. E. coli O157:H7(E) and S. typhimurium DT104(ST) groups were challenged with each pathogen without B. longum HY8001 administration and control groups were administered with phosphate buffered solution(PBS). After the oral administration with B. longum HY8001(109cfu), th emice were challenged with E. coli O157:H7(2$\times$1010cfu) or S. typhimurium DT104(108cfu) and the mortality rate and the fecal shedding of challenged pathogen were also examined define the reactivity of the B. longum HY8001. Production of toxin neutralizing substance(s) of B. longum HY8001 was determined by cell cytotoxicity assay using Vero cells. Fecal shedding of th eS. typhimurium DT104 was significantly decreased in BL+ST+BL group fed with B. longum HY8--1 before and after challenge(p<0.05), while the fecal shedding s of S. typhimurium DT104 in BL+ST and St groups remained more than 106cfu. the protective effect of the B. longum HY8001 against E. coli O157:H7 was significantly high only in BL+E+BL group fed with b. longum Hy8001 before and after E. coli O157:H7 challenge from the result of fecal E. coli O157:H7 isolation rate, mortality rate, and intestinal contents culture to detect E. coli O157:H7. the mortality rate of the BL+e and E groups. The cytopathic effect (CPE) of the Vero cytotoxin (Shiga like toxin I & II) in Vero cell was neutralized in B. longum HY8001 culture supernatant added wells which indicate the presence of soluble Vero cytotxin neutralizing substance(s) in B. longum HY8001 culture suprnatant.
An ozone-sensitive mutant of Escherichia coli strain B, MQ 1844 is described. Its properties, including high sensitivity to ozone and radiation, inducible filamentation, extensive DNA degradation and impaired DNA synthesis following ozonation, are attributable to a mutation in ozrB, a gene which is cotransducible with malB. Based on differences in phenotypic expression as well as on the particular location of this gene on the bacterial chromosome, ozrB appears as distinct from the other ozone-or radiation-sensitivity genes previously described.
The FimH subunit of type 1-fimbriated Escherichia coli has been determined as a major cause for urinary tract infections. In our previous study, the Adhesin/CTXA2B was expressed as soluble recombinant chimaeric protein derived from the uropathogenic Escherichia coli adhesin genetically coupled to cholera toxin A2B (CTXA2B) subunit in Escherichia coli. Since it is very important to optimize IPTG concentration and culture temperature to maximize cell growth and productivity, These optimal culture factors were determined to increase the productivity of the expressed Adhesin/CTXA2B chimaeric protein in Escherichia coli TB1 carrying pMALfimH/ctxa2b. Our data demonstrate that optimal concentration of IPTG for increased production of chimaeric protein was 0.5 mM. Additionally, culture time was 10 hours and temperature, 37${\circ}C$.
산업적으로 lysine 발효 산업에 이용되고 있는 B. lactofermentum으로부터 lysine 생합성에 관여하는 tetrahyrodipicolinate N-succinyl transferase를 지령하는 dapD 유전자를 E. coli의 dapD 결손변이주와의 complementation test를 통하여 cloning하였다. 재조합 plamid는 3.6 kb의 DNA 단편을 함유하고 있었으며 Southern blot hybridization을 통하여 dapD 유전자는 B. lactofermentum으로부터 유래하였으며 염색체 DNA내에 single copy로 존재함을 알 수 있었다. 또한 lysine 생성량 분석을 통하여 E. coli에서 B. lactofermentum dapD 유전자의 발현을 확인하였다.
대한약학회 2003년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.1
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pp.226.2-226.2
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2003
The FimH subunit of type 1-fimbriated Escherichia coli has been determined as a major cause of urinary tract infection. To produce a possible vaccine antigen against urinary tract infection, the fimH gene was genetically linked to the Itxa2b gene, which was then cloned into the pMAL -p2E expression vector. The chimaeric construction of pMALfimH/Itxa2b was transformed into Escherichia coli TB1 and its N-terminal amino acid sequence was analyzed. (omitted)
본 연구에서는 현재 산업적 응용이 활발하게 이루어지고 있고, 여러 장점을 지닌 효소인 Candida antarctica에서 유래된 lipase B (CalB)의 신속한 개질을 위해 취급이 용이한 E. coli를 이용하여 CalB 발현시스템을 구축하였다. E. coli 발현 시스템에서 효소활성을 지니지 못하는 내포체를 생성하는 단점을 지니고 있어, soluble한 형태의 CalB 생성을 위해 저온 발현이 가능한 pCold I vector와 단백질 접힘을 도와주는 chaperone을 사용하여 CalB를 발현하였다. Liu 등(17)은 E. coli Origami2와 B, 그리고 $DH5{\alpha}$를 실험한 결과, Origami 균주에서만 CalB에 의한 halo의 형성이 관찰되었으나, 동 연구에서는 실험한 3종의 균주와 5종의 chaperone plasmid중 Rosettagami와 $DH5{\alpha}$에서 groES/groEL chaperone이 CalB와 동시에 발현되면 soluble한 형태의 Cal B가 발현됨을 관찰할 수 있었다. 또한 신속한 CalB의 발현시스템을 구축하기 위해서는 유전자 조작의 용이성 및 안정성에서 우월한 $DH5{\alpha}$가 Rosettagami에 비해 soluble한 CalB의 발현에 더욱 적합한 균주임이 관찰되었다. 즉 재조합 pCold plasmid와 pGro7 plasmid (groES/groEL)로 형질이 전환된 $DH5{\alpha}$가 CalB 발현시스템에 가장 적합하다.
The FimH subunit of type 1-fimbriated Escherichiu coli (E. coli) has been determined as a major cause for urinary tract infections. Thus, to produce a possible vaccine antigen against urinary tract infections, the fimIH gene was genetically coupled to the ctxa2b gene and cloned into a pMAL-p2E expression vector. The chimeric construction of pMALfimH/ctxa2b was then transformed into E. coli K-12 TB1 and its nucleotide sequence was verified. A fusion protein, based on fusing adhesin to the cholera toxin subunit A2B (CTXA2B), was induced with 0.01 mM isopropyl-${\beta}-D-thiogalactoside$ (IPTG) for 4 h at $37^{\circ}C$ to yield a soluble fusion protein. The fusion protein was then purified by affinity chromatography. The expressed fusion protein was confirmed by SDS-PAGE and Western blotting using antibodies to the maltose binding protein (MBP) or the cholera toxin subunit B (CTXB), plus the N-terminal amino acid sequence was also analyzed. The orderly-assembled fusion protein was confirmed by a modified $G_{Ml}-ganglioside$ ELISA, using antibodies to adhesin. The results indicated that the purified fusion protein was an adhesin/CTXA2B protein containing E. coli adhesin and the $G_{Ml}-ganglioside$ binding activity of CTXB. Accordingly, this adhesin/CTXA2B protein may be a potential antigen for oral immunization against uropathogenic E. coli.
Plasmid pBR322와 runaway Plasmid pSY343을 vector로 사용하여 E. stearothermophilus IAM 11062내의 $\alpha$-amylase 유전자를 E. coli내에 클로닝 하였다. 이때 얻어진 $\alpha$-amylase유전자는 제한효소 Hind III의 말단을 갖고 있는 4.7kb의 크기였으며 E. coli내에서 이들 유전자는 비교적 안정적 있게 유지되고 발현되었다. 재조합 $\alpha$-amylase유전자가 클로닝된 E. coli는 B. stearothermophilus IAM 11062보다 3배의 $\alpha$-amylase를 더 많이 생성하였다. EDTA를 사용한 osmotic shock 방법에 의하여 E. coli내에서 생성된 $\alpha$-amylase는 그 효소 생성량의 75%정도가 periplasm에 존재함이 밝혀졌다. 재조합된 $\alpha$-amylase 유전자에 의해서 E. coli에서 생성된 $\alpha$-amylase는 최적 작용온도가 55$^{\circ}C$로서 이들의 열안정성과 분자량(61,000)도 B. stearothermophilus IAM 11062의 $\alpha$-amylase와 거의 동일하게 나타나 E. coli와 B. stearothermophilus IAM 11062에서 생성된 $\alpha$-amylase는 효소학적 성질이 같음을 보여주었다.
목적: 요로감염은 소아에서 흔한 세균 감염이며, Escherichia coli가 주요 원인균이다. 본 연구는 우리나라에서 소아 요로감염을 일으키는 E. coli의 계통 분류와 독성인자를 분석하고자 하였다. 방법: 2010년 10월부터 2013년 4월까지 요로감염으로 입원한 33명의 소아 환자로부터 검출된 E. coli균주를 대상으로 하였다. 중합효소연쇄반응을 통해 E. coli의 계통 분류 및 5가지 독성인자(fimH, sfa, papA, hylA, and cnf1)를 조사하였다. E. coli의 분자유전학적 특징을 환자의 임상적 진단과 동반된 방광요관 역류에 따라 분석하였다. 결과: 대부분의 요로병원성 E. coli 는 계통 분류에서 B2군(84.8%)에 속했으며, 나머지는 모두 D군(15.2%)에 해당되었다. 독성인자는 fimH (100%), sfa (100%), hylA (63.6%), cnfI (63.6%), 그리고 papA (36.4%)의 분포를 보였다. 임상 진단에 따른 계통 분류에서 급성 신우신염의 경우 B2군이 92.3%, D군이 7.7%를 나타냈으며, 방광염에서는 B2군에서 57.1%, D2군은 42.9%였다. 독성인자는 양 군에서 비슷하게 분포하였다. 급성 신우신염에서 방광요관 역류의 유무에 따른 계통 분류의 분포에는 차이가 없었으나, 독성인자의 경우 papA 유전자가 방광요관 역류가 동반되지 않은 군에서보다 방광요관 역류 군에서 적게 나타났다(43.8% vs. 20.0%, P=0.399). 결론: 본 연구는 국내 소아 요로감염의 원인 E. coli 균주의 분자유전학적 역학 자료를 제시하였으며, 이 결과는 향후 소아 요로감염의 발생 기전을 이해하는 데 기초가 될 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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