Coenzyme $Q_{10}$과 그 유도체 coenzyme $Q_n$ 6종을 합성하고, 이들 유도체에 대하여 상피세포(LLC-PK1 cell)를 이용한 항산화 효과와 NIH/3T3 세포를 이용한 세포독성 실험을 실시하였다. 그 결과, 합성한 coenzyme $Q_n$ 유도체들이 coenzyme $Q_{10}$에 비해 우수한 항산화 효과를 나타내었으며, 그 중 coenzyme $Q_3$-C가 모든 농도에서 $107.7{\sim}135.9%$로 가장 우수한 효과를 나타내었다. 또한, 모든 coenzyme $Q_n$ 유도체들이 Coenzyme $Q_{10}$과 유사한 세포독성을 나타내었다. Coenzyme $Q_n$의 n수에 따른 항산화 효과 및 세포독성 실험에서 isoprene unit의 수가 적은 유도체들에서 우수한 효과를 나타내었다.
Coenzyme $Q_{10}$ 고역가 변이주인 Agrobacterium tumefaciens KPU-11-03의 다양한 유기 질소원에 대한 coenzyme $Q_{10}$ 생산량과 coenzyme $Q_{10}$의 구성비율 등을 비교한 결과, CSP 첨가 시 coenzyme $Q_{10}$ 생산량은 212.7 mg/l, 구성비율은 94%로 다른 유기질소원에 비해 매우 높게 나타났다. 특히 Bacto tryptone, Bacto peptone, soybean meal, casamino acid 등의 유기 질소원 첨가 시에는 극히 낮은 coenzyme $Q_{10}$ 역가를 나타내어 균체내의 coenzyme $Q_{10}$의 축적은 유기 질소원의 종류 즉 아미노산의 종류 및 량과 상관성이 있음을 추정할 수 있었다. 또한 무기질소원에 대하여 실험한 결과, $(NH_4)_2SO_4$ 첨가 시에 coenzyme $Q_{10}$역가가 약 2배 증가하였고 다른 무기질소원에 사용 시에는 오히려 감소하였다. Coenzyme $Q_{10}$ 역가와 관련된 아미노산을 확인하기 위해 유기질소원으로 Bacto tryptone을 첨가한 배지에 9가지의 아미노산을 첨가하여 실혐한 결과, 방향족 아미노산인 tyrosine 첨가 시의 coenzyme $Q_{10}$ 생산량은 99.5 mg/l로 비첨가구보다 약 8.2배 증가하였으나 phenylalanine과 tryptophan등의 다른 방향족 아미노산의 첨가 시에는 coenzyme $Q_{10}$ 생산량이 오히려 감소하는 것으로 나타나 tyrosine의 첨가가 coenzyme $Q_{10}$ 역가에 매우 중요함을 확인하였다.
Coenzyme $Q_{10}$과 6가지 coenzyme Qn 유토체들을 합성하였다. Coenzyme Qn유도체들을 murine melanoma(B16/F1)에 대한 멜라닌 생성 저해시험, collagenase 및 elastase 활성 저해시험을 실시하였다. 그 결과, 합성된 coenzyme Qn유도체들의 농도에 따른 멜라닌 생성억제, collagenase와 elastase의 활성 저해시험 모두에서 우수한 활성을 보여주었다. Coenzyme Qn화합물들 중 coenzyme $Q_1$과 coenzyme $Q_2$는 멜라닌 생성억제와 elastase 활성저해활성이 다른 coenzyme Qn유도체들보다 우수하게 나타났다. 하지만 collagenase 활성저해시험에서는 coenzyme Qn 화합물들이 80-85%의 collagenase 활성저해력을 나타내었다. 또한 coenzyme Qn들의 생리활성을 비교하면, collagenase 저해활성시험을 제외한 다른 효소활성에서는 isoprene unit의 n수가 적을수록 더 우수한 활성이 있음을 확인하였으며, collagenase의 경우 coenzyme Qn 화합물의 생리활성이 모두 유사함으로 isoprene unit의 n수보다 coenzyme Qn화합물의 benzoquinone에 의한 효과로 생각된다. 이와 같은 결과로, coenzyme $Q_1$과 coenzyme $Q_2$는 앞으로 새로운 기능성 화장품으로 사용될 수 있을 것으로 사료된다.
식이 중에 첨가된 coenzyme $Q_{10}$이 ADR을 투여한 흰쥐의 심장 미토콘드리아 분획의 coenzyme $Q_{10}$ 수준과 지방산 조성에 미치는 영향을 구명하기 위하여 두가지 실험을 실시하였다. 실험 1에서는 4주간 실험식이를 공급함과 동시에 ADR을 투여하였으나 실험 2에서는 4주간 실험식이만을 급여한 후 다시 4주간 실험1과 같은 방법으로 ADR투여와 실험식이 공급을 병행하였다. 실험군은 실험1과 2에서 모두 ADR 2수준 (1.0mg/kg B.W./week, 2.0mg/kg B.W./weed)과 coenzyme $Q_{10}$ 3수준 (무첨가군, 0.1g/kg diet 및 0.5/kg diet)에 의한 6개의 실험군과 basal diet만을 공급하는 대조군을 설정하였다. 본 실험에서 얻어진 실험결과를 요약하면 심장 미토콘드리아 내의 coenzyme $Q_{10}$의 함량은 ADR투여로 크게 감소되었으나 특히 식이중의 coenzyme $Q_{10}$을 고수준으로 급여함에 따라 유의적으로 증가되었으며 실험1에 비해 실험2에서 coenzyme $Q_{10}$급여효과가 더욱 크게 나타났다. 지방산 조성은 모든 실험군에서 plamitic(16 : 0), stearic(18 : 0), linoleic acid(18 : 2)와 arachidonic acid(20 : 4)가 주요지방산으로서 80% 이상을 차지하였고 ADR투여로 인해 arachidonic acid(20 : 4)와 docosahexaenoic acid(22 : 6)등의 고불포화지방산 함량이 감소되는 경향이었으며 coenzyme$Q_{10}$ 급여에 의해 이러한 감소가 조절되었다.
본 연구에서는 coenzyme $Q_{10}$을 나노에멀젼화 하기 위해 초고압균질기를 이용하여 3가지 다른 형태의 밸브를 대상으로 평가를 진행하였으며, 선정된 밸브를 사용하여 제조된 coenzyme $Q_{10}$ 나노에멀젼의 품질 특성 및 안정성 평가를 하였다. 초고압균질기를 이용한 coenzyme $Q_{10}$ 나노에멀젼 제조 시 최적 조건은 150MPa, C 밸브, 통과 횟수 3회이었다. 제조된 나노에멀젼은 평균입자 크기가 40 nm, 제타 전위 값이 -57 mV을 나타내어 콜로이드 상태가 충분히 안정하다고 볼 수 있었다. 또한 수용액에 빠르게 분산되었으며, 이때 coenzyme $Q_{10}$ 100 mg을 함유한 증류수100 mL의 투과도 값이 90(%T)로 투명한 용액을 얻을 수 있었다. 제조한 coenzyme $Q_{10}$ 나노에멀젼은 $4^{\circ}C$ 및 $25^{\circ}C$에서 12주 동안 보존하여도 침전 또는 부유물을 발생시키지 않았고 coenzyme $Q_{10}$ 함량이 변하지 않았으며, 10일간의 동결처리 후에도 안정하였다. pH 2 용액을 제외하고는 pH(4-10) 처리와 열($95^{\circ}C$)처리 및 동결($-20^{\circ}C$)처리 시에도 안정하였다. 따라서 제조된 coenzyme $Q_{10}$ 나노에멀젼은 액체 형태 등 다양한 식품에 적용할 수 있는 가능성을 확보하였으며, 유통시에는 상온보다는 냉장 보관이 더 적합 할 것으로 판단된다.
본 연구는 항암제로서의 효능을 가진 ADR을 투여하여 유도된 흰쥐의 체내 지질과산화에 대하여 vitamin E와 coenzyme $Q_{10}$ 의 항산화 효과를 구명하고자 실시되었다. 횐쥐의 성장상태는 ADR의 투여로 대조군에 비하여 저하되었으나 vitamin E나 coenzyme $Q_{10}$ 공급에 의하여 별다른 영향을 받지 못했다. 혈장과 심장 미토콘드리아 분획에서의 지질과산화물 함량은 ADR 단독 투여군에서 현저하게 증가되었으나 vitamin E나 coenzyme $Q_{10}$ 의 공급량에 비례하여 저하되었고 그 작용 능력은 vitamin E가 더 우수한 것으로 나타났다. 지질과산화물 대사효소 활성도에 있어서는 catalase 활성도가 전 처리군에서 유의적 차이를 보이지 알은 반면 GSH-Px 활성도는 ADR투여로 대조군에 비해 증가되었으나 vitamin E의 공급으로 대조군의 수준으로 저하되었다. Adriamycin에 의해 증가된 SOD 활성도는 vitamin E와 coenzyme $Q_{10}$ 공급에 의해서 모두 영향을 받았으나 coenzyme $Q_{10}$ 보다는 vitamin E에 의해 더 큰 효과를 나타내었다. 심장 미토콘드리아 분획의 지방산 조성은 ADR 단독 투여군에 있어서는 arachidonic acid가 다른 처리군들에 비해서 가장 높게 나타난 반면에 docosahexaenioc acid는 관찰되지 않았다. 그러나 높은 수준의 vitamin E나 coenzyme $Q_{10}$ 을 공급시켰을 때 arachidonic acid는 감소하는 대신 docosahexaenioc acid는 증가되었으며 높은 수준의 vitamin E가 coenzyme $Q_{10}$ 보다도 더 큰 보호작용을 나타내었다. 이상의 결과를 종합해서 볼 때 ADR 투여로 인해 심장에서 일어난 지질과산화 반응에 대해 vitamin E 나 coenzyme $Q_{10}$ 이 정상 수준에는 미치지 못하나 지질과산화 방어계 효소변화를 통해 보호작용을 나타낸다는 것을 알 수 있었다. 또한 심장에서 ADR에 의한 지질과산화 반응을 억제시키는 능력에 있어서는 농도에 비례하여 vitamin E가 coenzyme $Q_{10}$ 보다도 더 우수한 것으로 나타났다.
본 실험에서는 coenzyme $Q_{10}$을 cyclodextrin, starch를 이용하여 각각 복합체를 형성하고 형성된 복합체의 용해도 및 구조적 특성을 확인하였다. Starch 복합체는 용해 온도가 증가할수록 복합체 및 복합체내의 coenzyme $Q_{10}$의 용해도가 유의적으로 증가하는데 비해 cyclodextrin 복합체는 $37^{\circ}C$에서 coenzyme $Q_{10}$의 최대 용해도를 보였으며 이후 $50^{\circ}C$에서는 강하게 aggreagation이 일어났고, $80^{\circ}C$에서는 약해진 결합에 의해 복합체가 깨짐으로써 coenzyme $Q_{10}$이 물 위에 뜨는 형상을 나타내었다. 두 복합체의 구조적 차이를 FT-IR, XRD, DSC를 통하여 확인한 결과 cyclodextrin 복합체는 coenzyme $Q_{10}$의 isoprenoid chain에 주로 포접이 되어 있는데 반해 starch 복합체는 coenzyme $Q_{10}$의 isoprenoid chain 뿐만 아니라 benzoquinone ring에도 포접되어 있는 것을 확인하였고, 또한 starch 복합체가 cyclodextrin 복합체에 비해 coenzyme $Q_{10}$ 무정형영역이 더 크게 증가되어 있는 것을 확인하였다. In vitro simulated digestion model을 통하여 각 소화기관 별 복합체의 방출 패턴을 확인 한 결과 두 복합체 모두 구강, 위장의 효소 및 조건에 비해 소장의 효소와 조건에서 유의적으로 크게 coenzyme $Q_{10}$의 방출이 확인되었다. 따라서 coenzyme $Q_{10}$은 cyclodextrin, starch와 포접되어 복합체를 형성함으로서 생체이용율의 향상을 기대할 수 있다.
본 실험은 식이중에 첨가된 coenzyme Q10이 adriamycin (ADR)을 투여한 흰쥐의 심근 미세 구조에 미치는 영향을 규명하기 위하여 실시되었다. 실험군은 모두 ADR 2수준(1.0mg/kg B.W./week, 2.0mg/kg B.W./week)과 coenzyme Q10 3수준(무첨가군, 0.1g / kg diet 및 0.5g / kg diet)에 의한 6개의 실험군과 basal diet만을 공급하는 대조군을 설정하였다. 체중증가량은 ADR의 투여수준이 높을수록 유의적으로 감소되었으며 식이효율에 있어서는 고수준의 ADR 투여시에만 대조군에 비하여 감소되었다. 그러나 coenzyme Q10에 의한 회복효과는 나타나지 않았다. 혈장내 CPK 활성도는 ADR투여로 약간 증가되었으나 유의적인 차이는 없었으며 coenzyme Q10 급여에 대한 영향은 나타나지 않았다. 전자현미경을 통해 심장조직의 형태적변화를 살펴본 결과 ADR투여로 인해 심근세포내 미세구조의 변성을 관찰할 수 있었고 특히 mitochondria 의 변형, myofibil을 비롯한 세포 소기관의 소실 및 파괴로 빈 공간이 형성되어 있었으나 coenzyme Q10 급여군에서는 그 정도가 약화되었다. 고수준의 ADR 투여는 mitochondria 의 volume density와 surface density를 크게 감소시켰지만 고수준의 coenzyme Q10 급여에 의해 이러한 감소가 조절되었다.
Adriamycin(ADR)에 의해 유도된 지질과산화로 인한 세포손상에 대한 vitamin E 및 coenzyme $Q_{10}$의 효과를 검토하기 위하여 이유한 sprague-Dawley 흰쥐를 4군(대조군, coenzyme $Q_{10}$과 vitamin E 무첨가군, coenzyme $Q_{10}$ 급여군, vitamin E 급여군)으로 나누어 6주간 사육하였다. 대조군을 제외한 모든 실험군에게 매주 1회씩 일정시각에 ADR(2mg/kg)을 복강주사하였다. 혈장에서의 지질과산화물 함량, 간 cytosol의 지질과산화물 대사 효소활성도, 간 미토콘드리아의 지방산 조성과 간 지질함량을 측정하였다. 혈장에서의 지질과산화물 함량은 대조군에 비해서 모든 처리군에서 증가되었으나 vitamin E와 coenzyme $Q_{10}$의 급여로 유의적인 감소를 나타내었다. Catalase와 GSH-Px 활성도는 ADR투여로 크게 변화되지 않았으나 coenzyme $Q_{10}$의 급여로 활성이 유으적으로 증가되었다. SOD 활성도는 ADR 투여로 유의적인 감소를 나타내었으며 coenzyme $Q_{10}$ 공급만이 그 활성도를 크게 유도하였다. 간 지질함량의 변화는 ADR 투여로 대조군에 비해 cholesterol과 phospholipid 양이 증가되었고, cholesterol함량에 있어서는 coenzyme $Q_{10}$ 급여로 억제효과를 나타내었다.
Objectives: We aimed to evaluate the effect of Cervi Cornu and coenzymeQ10 on exercise and endurance capacity in rats and mice. Methods: The extract of Cervi Cornu was manufactured by the pharmacy department of Kyung Hee Oriental Medical Hospital, and CoQ10 soft cap (Ildong Pharmaceutical) was used. In total, 24 rats and 30 mice were divided into 3 groups: Control (rat=8, mouse=10), CoQ10 alone (rat=8, mouse=10), Cervi Cornu extract, and CoQ10 (rat=8, mouse=10). Ergogenic effect was evaluated by administering the Cervi Cornu extract and coenzymeQ10 to rats and measuring the time to exhaustion during treadmill running; endurance capacity was assessed by measuring cold water swimming time, serum lactate level, and serum corticosterone level in each group. At 1 week from the end of treatment, we recalculated time to exhaustion during treadmill running in rats to investigate the long-term effect of the Cervi Cornu extract and coenzymeQ10. Results: Cervi Cornu extract has long-term benefits in that it preserves the ergogenic effect caused by exercise. Cervi Cornu and coenzymeQ10 have no effect on increasing cold water swimming time in ICR mice. CoenzymeQ10 decreases the serum corticosterone level in ICR mice performing cold water swimming test. Conclusions: Cervi Cornu seems to preserve the ergogenic effect caused by exercise, but a larger study is needed to investigate effect of Cervi Cornu and coenzymeQ10 on improving endurance capacity. CoenzymeQ10 decreases serum corticosterone level and it is related with the anti-psychological fatigue effect.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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