• 미생물학회지
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• 제27권2호
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• pp.77-84
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• 1989

Saccharomyces cerevisiae의 RNAI 유전자의 온도 감수성 돌연변이 균주는 성장허용 온도인 23"C에서는 정상적인 성"J--을하나, 성 장억제 온도인 36°C에서는 tRNA, rRNA 그러고 mRNA 의 선우울질을을 핵내에 축적함으후써 성장을 못한다. 본 실 험에서는 complementation 에 의하여 RNAI 유전자를 클로녕하였으며 concomitant loss 실험에 의하여 이 유천자의 클로닝 을 확인하였다. 유전자의 위치를 확인한 결과 3.5kb의 Bgl II 조각내에 RNAI 유전자가 존재함을 알 수 있였으며, 2.1kb에 해당하는 BamH I -Bgl II 조각에서는 RNAI 유전지에 의한 complementation 능력이 상실되는 것으후 보아 RNAI 유전자 는 3.5kb의 BglIl 조각내에 포함되는 BamH 1 자리 주위에 결쳐 있픔을 알 수 있었다.

• 한국양식학회지
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• 제19권2호
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• pp.77-83
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• 2006

본 연구는 시볼트전복, Haliotis sieboldii 치패를 이용하여 급격한 수온변화 스트레스에 따른 혈림프수의 변화와 간부위에서의 항산화효소 및 아가미 부위에서의 HSP70 mRNA의 변화를 조사하였다. 실험구는 $10,\;15,\;20^{\circ}C$(대조구), $25^{\circ}C$ 및 $30^{\circ}C$로 설정하였으며, 측정 시간은 0, 6, 12, 24및 48 h후에 측정하였다. 그 결과 실험기간 중의 생존율은 $30^{\circ}C$ 실험구를 제외한 모든실험구에서 100%의 생존율을 나타내었으며, $30^{\circ}C$ 실험구에서는 12 h이후 3마리가 폐사하여 90의 생존율을 기록하였고, 24 h째에는 전량 폐사하여 0%의 생존율을 나타내었다. 혈림프 수의 변화는 $15^{\circ}C$및 $25^{\circ}C$ 실험구의 경우 증가하는 경향을 나타내었고, $30^{\circ}C$ 실험구의 경우 감소하는 경향을 나타내었다. SOD의 경우 급격한 수온 스트레스 직후 모든 실험구에서 감소하는 경향을 나타내었으나, $30^{\circ}C$ 실험구에서는 계속 증가하는 경향을 나타내었고, 12 h 이후에는 모든 개체가 폐사하여 더 이상의 관찰은 할 수 없었다. 또한 10 및 $15^{\circ}C$ 실험구의 경우 24 h째에 모두 최고의 활성 상태를 나타내었으나, 48 h째에는 감소하는 경향을 나타내었고 $25^{\circ}C$ 실험구의 경우 대조군과 비교하여 감소하는 경향을 나타내었다. CAT에서는 수온 스트레스 직후 10 및 $25^{\circ}C$ 실험구에서는 대조군과 비교하여 낮은 활성을 나타내었으며, 시간의 지남에 따라 회복하는 경향을 나타내었다. 또한, $15^{\circ}C$ 실험구의 경우에는 6 h째에 가장 높은 CAT 활성을 나타내었으며, 이 후 차츰 회복하는 경향을 나타내었고, $30^{\circ}C$ 실험구의 경우에는 시간의 지남에 따라 유의적으로 활성이 낮아지는 경향을 나타내었다. HSP70 mRNA의 발현은 대조군($20^{\circ}C$)과 비교하여 $25^{\circ}C$ 48 h째 실험구를 제외한 모든 실험구에서 유의적으로 높게 발현되었다. 이상의 결과로, $20^{\circ}C$에서 순치된 시볼트전복은 급격한 수온 스트레스에 대해 많은 스트레스 요인으로 작용하는 것으로 나타났으며, 수온 스트레스에 대한 생리학적 방어 기작이 분자 레벨인 HSP70 mRNA에서는 신속히 발현되어 스트레스에 대처하지만, SOD나 CAT와 같은 항산화 효소의 발현은 다소 늦게 작용하는 것으로 나타났다. 그러나, 시간의 지남에 따라 $5^{\circ}C$ 내외의 스트레스와 저수온 스트레스의 경우에는 비교적 안정화되는 것으로 보여지며, $10^{\circ}C$ 이상의 고수온에 노출되었을 경우에는 생리학적 방어기작이 한계점에 이르러 더 이상 방어 기작이 작동하지 않아 폐사에 이르게 되는 것으로 나타났다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제50권3호
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• pp.243-247
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• 2012

Ascaris suum eggs are inactivated by composting conditions; however, it is difficult to find functional changes in heat-treated A. suum eggs. Here, unembryonated A. suum eggs were incubated at $20^{\circ}C$, $50^{\circ}C$, and $70^{\circ}C$ in vitro, and the gene expression levels related to viability, such as eukaryotic translation initiation factor 4E (IF4E), phosphofructokinase 1 (PFK1), and thioredoxin 1 (TRX1), and to apoptosis, such as apoptosis-inducing factor 1 (AIF1) and cell death protein 6 (CDP6), were evaluated by real-time quantitative RT-PCR. No prominent morphological alterations were noted in the eggs at $20^{\circ}C$ until day 10. In contrast, the eggs developed rapidly, and embryonated eggs and hatched larvae began to die, starting on day 2 at $50^{\circ}C$ and day 1 at $70^{\circ}C$. At $20^{\circ}C$, IF4E, PFK1, and TRX1 mRNA expression was significantly increased from days 2-4; however, AIF1 and CDP6 mRNA expression was not changed significantly. IF4E, PFK1, and TRX1 mRNA expression was markedly decreased from day 2 at $50^{\circ}C$ and $70^{\circ}C$, whereas AIF1 and CDP6 mRNA expression was significantly increased. The expressions of HSP70 and HSP90 were detected for 9-10 days at $20^{\circ}C$, for 3-5 days at $50^{\circ}C$, and for 2 days at $70^{\circ}C$. Taken together, incremental heat increases were associated with the rapid development of A. suum eggs, decreased expression of genes related to viability, and earlier expression of apoptosis-related genes, and finally these changes of viability- and apoptosis-related genes of A. suum eggs were associated with survival of the eggs under temperature stress.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제37권3호
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• pp.207-216
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• 2010

목 적: Small interfering RNA (siRNA)를 이용하여 homeobox (HOXA) 10 유전자의 발현이 억제된 일차배양 자궁내막 세포를 이용하여 자궁내막 탈락막화 (decidualization)에 HOXA유전자를 포함한 세포 내 신호전달기전을 분석하고자 하였다. 연구방법: 본원 산부인과에서 자궁내막 질환 이외의 이유로 전자궁 적출술을 받은 환자의 자궁내막 조직을 채취한다. $37^{\circ}C$에서 20분간 Trypsin-EDTA를 처리하여 단일세포로 분리한 후 10% fetal bovine serum이 첨가된 DMEM/F12 배지를 이용하여 24시간 동안 $37^{\circ}C$ 5% $CO_2$ 배양기 안에서 배양한다. 배양된 자궁내막 세포를 HOXA10 siRNA로 첨가한 후 TGF-${\beta}1$을 10 ng/mL 농도로 48시간 첨가하여 탈락막화를 유도한다. 배양된 자궁내막 세포에서 reverse transcription polymerase chain reaction을 이용하여 HOXA10, prolactin, cyclooxygenase (COX)-2, peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR)-$\gamma$ 및 wingless-type MMTV integration site family (Wnt)의 발현을 관찰하였다. 결 과: HOXA10의 경우 transforming growth factor (TGF)-${\bata}1$과 HOXA10 siRNA를 처리하지 않은 대조군에 비하여 TGF-${\beta}1$을 처리한 군에서 약 1.8배 가량 발현양의 증가를 보였다. 자궁내막 탈락막 표지인자로 알려져 있는 prolactin의 경우 TGF-${\beta}1$을 처리한 경우 대조군에 비하여 유의한 발현의 증가를 보였으며 HOXA10 siRNA를 처리한 군에 있어서는 TGF-${\beta}1$을 첨가하더라도 prolactin mRNA의 발현양의 증가를 관찰할 수 없었다. 또한 자궁내막 세포의 분화인자로 알려져 있는 COX-2의 발현 역시 HOXA10 siRNA를 처리한 군에 있어서 mRNA 발현양이 유의하게 감소하였으며 TGF-${\beta}1$을 처리하여도 발현의 증가를 관찰할 수 없었다. Wnt4의 경우 HOXA10 siRNA를 이용하여 HOXA10의 발현을 억제한 경우 대조군에 비하여 유의하게 mRNA의 발현양이 감소하였으며 이러한 발현양의 감소는 TGF-${\beta}1$을 처리하여도 증가됨을 관찰할 수 없었다. PPAR$\gamma$의 발현은 HOXA10 siRNA의 처리와 관계없이 TGF-${\beta}1$에 의하여 감소하는 것을 관찰할 수 있었다. 결 론: Progesterone에 의하여 자궁내막 상피세포에서 분비되는 것으로 알려져 있는 TGF-${\beta}1$에 의한 자궁내막 기질세포의 분화 (탈락막화)는 HOXA10 및 Wnt에 의하여 조절되는 것으로 생각된다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제12권5호
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• pp.695-701
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• 1999

The hypothalamus is the classic site of synthesis of arginine vasotocin as neurohypophyseal hormone in the chicken. However, high concentrations of arginine vasotocin were also measured in ovarian tissues by radioimmunoassay. At first, we observed specific positive signal of mRNA encoding AVT in the hypothalamus by Northern hybridization. However, we could not find any specific bands in ovarian and uterine tissues. For evidence of transcription of the arginine vasotocin gene ingonadal tissues of the chicken, this study has applied the polymerase chain reaction as a highly sensitive assay. The hypothalamus, the four largest preovulatory ovarian follicles and the shell gland (uterus) were collected at 4 h and 20 h before oviposition. The ovarian follicular tissues were separated into granulose theca interns and theca externa layers. The uterine tissues were separated into myometrium and endometrium The extracted mRNA was converted to cDNA by reverse-transcriptase using oligo-$d(T)_{15}$ primer. Then, the cDNA was amplified by Vent polymerase and arginine vasotocin specific primers. The amplification reaction was incubated by 30 cycles successively, $95^{\circ}C$, $55^{\circ}C$ and $72^{\circ}C$ earth for 1 min. Te comparisons of the mRNA levels encoding arginine vasotocin between the tissues were determined by semi-quantification methods. After amplification of the cDNA, the PCR products were detected in hypothalamus, ovarian tissues and uterine tissues. The results of semi-quantification showed that the levels of arginine vasotocin mRNA in ovarian iud uterine tissues were about from 1/50 to 1/1000 when compared to that in the hypothalamus. The very low levels of mRNA encoding arginine vasotocin in ovarian and uterine tissues probably led us to conclude that arginine vasotocin may play a role of local mediate acting autocrine and/or paracrine.

• 한국어병학회지
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• 제26권2호
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• pp.77-88
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• 2013

본 연구에서는 2012년 8월, 우리나라 울산 소재의 강도다리 양식장에서 뚜렷한 증상 없이 강도다리 폐사가 발생하여 그 원인을 밝히고자 하였다. 기생충, 세균, 바이러스 검사를 수행하였으며, 내부 장기에서 균이 순수 분리되어 해당 분리균주의 표현형 및 유전적 특성을 분석하였다. 순수 배양된 균체를 확인하여 계대 배양하여 생화학적 성상과 16S rRNA 유전자와 capsular polysaccharide (CPS) 유전자의 염기서열 분석 결과 Photobacterium damselae subsp. piscicida으로 동정되었다. Photobacterium damselae subsp. piscicida와 Photobacterium damselae subsp. damselae는 TCBS agar 배지의 균주 배양 유무, 16S rRNA 및 CPS 유전자 분석을 통해 구분할 수 있었다. 실험 균주는 ofloxacin과 gentamycin에 대해서 감수성을 나타냈으며, 배양 온도에 따른 발육시험 시 $18^{\circ}C$ 및 $25^{\circ}C$에서 시험한 다른 균주에 비해 유의적으로 높은 생장율을 나타내었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제30권2호
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• pp.151-156
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• 2002

내열성 $\beta$-glycosidase 효소를 생성하는 균주를 분리하기 위해서 일본의 Atagawa 온천지역에서 시료를 채취하였다. 조효소액이 $70^{\circ}C$에서 4시간 동안 $\beta$-glycosidase활성을 유지하는 KNOUC 202를 선발하여 분리, 동정하였다. 선발된 KNOUC 202는 호기성으로 그람음성 간균이며, 포자를 형성하지 않으며, 운동성이 없으며, carotenoid를 생성하고, catalase, oxidase 양성으로 나타났으며, 최적 성장온도는 $70~72^{\circ}C$이고, 최적 pH는 7.0~7.2이었으며, NaCl 3% 농도에서 성장하였다. 세포내 지방산의 주성분은 iso-15:0과 iso-17:0이었다. KNOUC 202의 16S rRNA sequence는 Thermus thermophilus ATCC 27635(HB8)와 유사도가 99.9% 이었다. 따라서 형태학적, 이화학적, 생화학적 특성, 지방산조성 및 16S rRNA sequence 분석결과에 근거하여 KNOUC 202를 Thermus thermophilus로 동정하였다.

• Animal cells and systems
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• 제14권1호
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• pp.17-23
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• 2010

We isolated warm temperature acclimation-related protein 65-kDa (Wap65) cDNA from the liver of olive flounder and investigated the mRNA expression of Wap65 and HSP70 in olive flounder exposed to osmotic (17.5, 8.75, and 4 psu) and thermal stress (25 and $30^{\circ}C$). The mRNA expression of Wap65 and HSP70 was increased by thermal stress. The mRNA expression of HSP70 was also increased by osmotic stress, whereas no significant change in Wap65 expression was detected. These results indicate that Wap65 mRNA expression occurs specifically in response to increases in water temperature, but not in response to osmotic stress. Plasma cortisol levels were also increased by osmotic and thermal stress. We also utilized the stress hormone cortisol to examine whether Wap65 expression is thermal-stress-specific. Cortisol treatment increased HSP70 mRNA expression in vitro, but had no significant effect on Wap65 mRNA expression. Thus, thermal stress, but not osmotic stress, induces Wap65 expression.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제21권8호
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• pp.1116-1126
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• 2008

The objective of this study was to investigate the expression and localization of heat shock protein 70 (Hsp70) and its mRNA in the heart, liver, and kidney of acutely heat-stressed broilers at various stressing times. Male AA broilers (n = 100) were randomly divided into 5 groups of 20 birds per group. After 30 d of adaptive feeding at ambient temperature, 80 experimental broilers were suddenly heat stressed by increasing the environmental temperature from $22{\pm}1^{\circ}C$ to $37{\pm}1^{\circ}C$. The 4 groups were heat stressed for 2, 3, 5, and 10 h, respectively. The localizations of Hsp70 protein and mRNA, determined by immunohistochemical staining and in situ hybridization, respectively, were demonstrated to be tissue dependent, implying that different tissues have differential sensibilities to heat stress. Intense Hsp70 staining was identified in the vascular endothelial cell of heart, liver and kidney, suggesting an association between expression of Hsp70 in vascular endothelial cell and functional recovery of blood vessels after heat shock treatment. Ante-mortem heat stress had a significant effect on the expression of Hsp70 protein and mRNA. The quantitation of Hsp70 protein and mRNA were both time and tissue dependent. During the exposure to heat stress, the heart, liver and kidney of broiler chickens exhibited increased amounts of Hsp70 protein and mRNA. The expression of hsp70 mRNA in the heart, liver and kidney of heat-stressed broilers increased significantly and attained the highest level after a 2-h exposure to elevated temperatures. However, significant elevations in Hsp70 protein occurred after 2, 5, and 3 h of heat stressing, respectively, indicating that the stress-induced responses vary among different tissues.

• 한국어류학회지
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• 제22권1호
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• pp.1-8
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• 2010

고수온 환경 ($25^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$)에 노출시킨 넙치의 산화 스트레스 정도를 알아보기 위하여 넙치의 간 조직에서 항산화 효소 [superoxide dismutase (SOD)와 catalase(CAT)] mRNA의 발현량 및 그 활성을 측정한 결과, $20^{\circ}C$ 대조구보다 $25^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$ 실험구에서 증가하는 경향을 보였다. 또한 지질 과산화 지표로 사용되는 lipid peroxidation(LPO)을 측정한 결과, $25^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$ 실험구에서 증가하는 경향을 나타내었다. LPO의 증가는 SOD 및 CAT의 증가와 밀접한 관련이 있으며, 체내의 $H_O_2$ 농도 또한 $25^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$ 실험구에서 증가하는 것으로 보아 고수온 환경이 넙치의 산화 스트레스를 유발하고 있는 것으로 사료된다. 고수온 환경에 노출시킨 넙치의 혈중 alanine aminotransferase (AlaAT)와 aspartate aminotransferase (AspAT) 값을 측정 한 결과, AlaAT와 AspAT 모두 유의적으로 증가하는 경향을 보였다. 또한 면역 지표로 사용되는 lysozyme 활성도가 $20^{\circ}C$ 대조구보다 $30^{\circ}C$ 실험구에서 유의적으로 낮은 값을 나타낸 점으로 보아, 고수온 환경에 노출된 넙치에서는 간 세포의 손상뿐만 아니라 면역력 또한 저해되고 있는 것으로 사료된다. 고수온 환경에 노출시킨 넙치에서 항산화 효소인 SOD와 CAT mRNA 발현량 및 활성이 증가하였을 뿐만 아니라 활성산소와 LPO 값 또한 증가된 점으로 보아, 고수온 환경은 넙치의 체내에서 산화 스트레스를 유발시키는 동시에 면역 기능을 저해시키고 있는 것으로 사료된다.