Native crystalline chitin was hydrolyzed in an agitated bead reaction system using crude chitinase excreted from Aspergillus fumigatus JC-19. The reaction was enhanced significantly, and the concentration and yield of reducing sugar after 48 hours were measured to be 35.42 g/I (w/v) and 0.64, respectively, around 1.86 times higher than those of the conventional system that was carried out without glass beads. The effect of reaction conditions, such as the amounts of chitin, chitinase and glass beads, and the size of glass bead, were examined. Ball milled chitin was also hydrolyzed in the agitated bead reaction system, the conversion yield and reaction rate of ball milled chitin for 24 hours increased up to 0.87 and 48.02 g/I, respectively. Chitinase showed relatively high stability in the agitated bead reaction system, particularly in the presence of enzyme stabilizer, $Ca^{++}$, which played a critical role in preventing the deactivation of chitinase by the physical impact of glass beads. The variations of the structural features of chitin during the reaction were followed by SEM and X-ray diffraction, and the enhanced hydrolysis reaction was caused by both the fragmentation of chitin particles and the destruction of the crystalline structure owing to the synergic effects of the attrition of glass beads and the hydrolytic action of chitinase.
Park Hyun-Sook;Park Mee-Hyun;Kim Chi-Hwa;Woo Jeeun;Lee Jee-Yeon;Kim Sung-Uk;Choi Wonja
Proceedings of the Microbiological Society of Korea Conference
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2000.10a
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pp.39-45
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2000
It hab been proposed that CHS3-mediated chitin synthesis during the vegitative cell cycle is regulated by CHS4. To investigate direct protein-protein interaction between their coding products, we used yeast two hybrid system and found that a domain of Chs3p was responsible for interaction with Chs4p. This domain, termed MIRC3-4 (maximum interacting region of chs3p with chs4p), spans from 647 to 700 residues. It is well conserved among CHS3 homologs of various fungi such as Candida albicans, Emericella nidulans, Neurospora crassa, Magnaporthe grisea, Ustilago maydis, Glomus versiforme, Exophiala dermatitidis, Rhizopus microsporus. A series of mutaion in the MIRC3-4 resulted in no appearance of chitin ring at the early G 1 phase but did not affect chitin synthesis in the cell wall after cytokinesis. Absence of chitin ring could be caused either by delocalization of Chs3p to the septum or by improper interaction with Chs4p. To discriminate those two, not mutually exclusive, alternatives, mutants cells were immunostained with Chs3p-specific antibody. Some exhibited localization of chs3p to the septum, while others failed. These results indicate that simultaneous localization and activation Chs3p by Chs4p is required for chitin ring synthesis.
Proceedings of the Korean Environmental Sciences Society Conference
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2000.05a
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pp.195-200
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2000
Chitin과 탈아세틸화된 chitosan은 중금속 제거에 효과적인 생물흡착제로 잘 알려져 있다. 그러나 본 연구의 결과 crab shell에 있어서의 중금속 제거효율이 순수 chitin과 chitosan에서 보다 더 뛰어남을 알 수가 있었다. 납, 카드뮴, 망간이온 제거실험에서 crab shell은 초기 2시간 이내에 모두 제거되었으나, chitin과 chitosan의 흡착 실험에선 14시간이 경과되어도 이들 중금속의 대부분 수용액 내에서 거의 제거되지 않았다. 구리의 경우 염의 형태에 따른 흡착의 영향을 chitosan에선 제거된 량이 Cu($SO_{4})_{2}$ > Cu($NO_{3})_{2}$ > Cu($Cl_{2}$)의 순으로 나타났으나 chitin에선 모두 흡착이 거의 안된 상태로 나타났다. 주사현미경 분석 결과 crab shell의 표면에 납이 축적되어 있는 상태를 확인하였다.
To increase the dissolution rate of piroxicam, chitin and chitosan which are widely occurring biodegradable natural materials were used as drug carriers. The ground mixtures of piroxicam with chitin or chitosan were prepared by grinding in a ball mill. The dissolution rates of piroxicam from the ground mixtures were enhanced markedly than that from the physical mixtures or from intact piroxicam. The X-ray diffraction peaks disappeared in the ground mixture indicating the production of the amorphous form. The comparison of infrared spectra of the physical mixture and the ground minture showed an interaction such as association between the functional groups of piroxicam and chitin or chitosan in the molecular level. The weight losses in TGA curves shoed all the same patterns. However, in the ground mixture by DTA curve, the undothermic peak due to the fusion of piroxicam was disappeared indicating the different thermal property.
Diazotized chitin (CHITN) was synthesized reacting with NaN3 and HCl to alkaline hydrolyzed chitin for the support of immobilized enzyme. Immobilized $\beta$-glucosidase on diazotized chitin(CHITN-Gase) was produced reacting with glutaraldehyds as bifunctional reagent. CHITN-Gase activities were determined reacting with p-nitrophenol-$\beta$-D-glucopyranoside in plug flow reactor as a reference. Optimum temperature, optimum pH, reaction constant and deactivation rate were determined with variation of flow rate and H/D. The particle size of immobilized enzyme in the best was, 35 mesh (CHITN35-Gase). The optimum conditions of immobilized enzyme were $70^{\circ}C$ in temperature and 5.0 in pH. Diameter and flow rate of plug flow reactor in the best was 8.5mm in diameter and 0.8ml/min in flow rate. Reaction constant was mainly influenced by electrostatic force. The best glucose hydrolizing activities of CHITN3 5-Gase was 3.34$\times$10-5 M/1. while that of native-$\beta$-glucosidase was 2.44$\times$10-5 M/1.
Chitosans were prepared from red crab chitin under various alkali treatment conditions(different alkali concentrations, reaction times and temperatures) and theirphysicochemical properties were investigated. The nitrogen content and deacetylation degree of red crab chitin were 6.15% and 22.17A%, respectively. By the IR spectra, red crab and reference chitin showed the sharp bands at 1650 $cm^{-1}$ / and 1550 $cm^{-1}$ /, which are characteristic of chitin. The nitrogen contents of prepared chitosans ranged from 6.19~7.48%. Thedeacetylation degree was increased from 63~76% and 48~78% with increasing reaction time and temperature, whereas viscosity was decreased. The nitrogen content and yield of red crab chitosan perpared from chitin with 50% NaOH, 1:25(w/v) for 3.0 hr at 120$cm^{-1}$ / were 7.26% and 85.0%, respectively. and viscosity, deacetylation degree and molecular weight, 67.0 mPa.s, 75.0% and 6.5$\times$10$^{5}$ Dalton, respectively. From the IR spectra, the amide absorption bands of red crab and reference chitosan became very weak, similarly. And at solid state $^{13}$ C-NMR spectra, C=O(carbonyl carbon) signals absent, whereas $CH_3$(methyl carbon) was residues. Chemical shift of $^{13}$ C-NMR spectra of red crab and reference chitosans were in good agreement with slight experimental deviation.
Membrane electrode based on chitin(po1y-[$1{\rightarrow}4$]-${\beta}$-N-acetyl-D-glucosamine) was prepared by mixing uniformly grounded of chitin (100 mesh) with PVC and DOS. We investigated the potential response of chitin membrane electrode to metal ions. It was observed that the response slopes for $Cd^{2+}$(34.9 mV/decade) and $Cu^{2+}$(34.0 mV/decade) were larger than those for other ions in pH 4 acetate buffer. The potentiometric response of chitin electrode to varying pH was nearly constant in the pH range of 2~12.
The strain of Serratia marcescens QM B1466 produces selectively large amount of chitinolytic enzymes (about 1mg/L medium). Enzymatic hydrolysis of chitin to N-acetyl-${\beta}$-D-glucosamine (NAG) was performed with a system consisting of two hydrolases (chitinase and chitobiase) produced by optimization of a microbial host consuming chitin particles. For the development of Large-scale biological process for the production of NAG from chitinaceous waste, the selection and optimization of a microbial host, particle size of crab/shrimp chitin sources and initial induction time using chitin as a sole carbon source on chitinase/chitobiase production and NAG production were examined. Crab-shell chitin(1.5%) treated by dilute acid and , ball-milled with a normal diameter less than 250m gave the highest chitinase activity over a 7 days culture. Crude chitinase/ chitobiase solution obtained in a 10 L fed-batch fermentation showed a maximum activities of 23.6 U/mL and 5.1 U/mL, respectively with a feeding time of 3 hrs, near pH 8.5 at 30$^{\circ}C$.
Effects of chitin and chitosan treatments on soil microorganisms and the mesofauna were investigated in a microcosm and a fumigated field experiment. Responses of microorganisms were determined using microbial phospholipid fatty acid (PLFA) analysis, whereas responses of the mesofauna were measured in terms of the abundances of nematodes and microarthropods. Soil nitrate concentration increased on the application of chitin. Overall, chitin promoted bacterial and fungal abundance, leading to an increase in abundance of free-living soil nematodes that feed on decomposers. The ratio of saturated to unsaturated fatty acids was highest in the chitin-treated soil. Chitosan had a minimal effect on the abundance of microorganisms; however, it reduced the abundance of collembolans in the microcosm experiment. These results indicate that the application of chitin has beneficial effects on the supply of nutrients and promotion of the abundance of soil organisms.
To increase the dissolution rate of furosemide, chitin and chitosan which are widely occurring biodegradable natural materials were used as drug carriers. The ground mixtures of furosemide with chitin or chitosan were prepared by grinding in a ball mill. The ground mixture showed a faster and more enhanced dissolution rate than the physical mixture or intact furosemide. The crystalline peaks of furosemide disappeared in the ground mixtures indicating the production of amorphous form. The comparison of infrared spectra of the physical mixture and the ground mixture showed an interaction such as association between the functional groups of furosemide and chitin or chitosan in the molecular level. The weight losses in TGA curves showed all the same patterns. However, the endothermic peak due to the fusion of furosemide in DTA curve disappeared in the ground mixture indicating the different thermal property. The dissolution of furosemide from ground mixtures was fast in the order of chitosan and then chitin. The co-grinding technique with chitin or chitosan provided a promising way enhancing the dissolution rate of practically insoluble drug.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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