Acanthamoeba cysts are resistant to unfavorable physiological conditions and various disinfectants. Acanthamoeba cysts have 2 walls containing various sugar moieties, and in particular, one third of the inner wall is composed of cellulose. In this study, it has been shown that down-regulation of cellulose synthase by small interfering RNA (siRNA) significantly inhibits the formation of mature Acanthamoeba castellanii cysts. Calcofluor white staining and transmission electron microscopy revealed that siRNA transfected amoeba failed to form an inner wall during encystation and thus are likely to be more vulnerable. In addition, the expression of xylose isomerase, which is involved in cyst wall formation, was not altered in cellulose synthase down-regulated amoeba, indicating that cellulose synthase is a crucial factor for inner wall formation by Acanthamoeba during encystation.
Su, Yanjing;Zhao, Guoqi;Wei, Zhenwu;Yan, Changjie;Liu, Sujiao
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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v.25
no.6
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pp.800-805
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2012
Rice straw is an important roughage resource for ruminants in many rice-producing countries. In this study, a rice brittle mutant (BM, mutation in OsCesA4, encoding cellulose synthase) and its wild type (WT) were employed to investigate the effects of a cellulose synthase gene mutation on rice straw morphological fractions, chemical composition, stem histological structure and in situ digestibility. The morphological fractions investigation showed that BM had a higher leaf sheath proportion (43.70% vs 38.21%, p<0.01) and a lower leaf blade proportion (25.21% vs 32.14%, p<0.01) than WT. Chemical composition analysis showed that BM rice straw was significantly (p<0.01) higher in CP (crude protein), hemicellulose and acid insoluble ash (AIA) contents, but lower in dry matter (DM), acid detergent fiber (ADFom) and cellulose contents when compared to WT. No significant difference (p>0.05) was detected in neutral detergent fiber (NDFom) and ADL contents for both strains. Histological structure observation indicated that BM stems had fewer sclerenchyma cells and a thinner sclerenchyma cell wall than WT. The results of in situ digestion showed that BM had higher DM, NDFom, cellulose and hemicellulose disappearance at 24 or 48 h of incubation (p<0.05). The effective digestibility of BM rice straw DM and NDFom was greater than that of WT (31.4% vs 26.7% for DM, 29.1% vs 24.3% for NDFom, p<0.05), but the rate of digestion of the slowly digested fraction of BM rice straw DM and NDF was decreased. These results indicated that the mutation in the cellulose synthase gene could improve the nutritive value of rice straw for ruminants.
Introduction Cellulose microfibril is a major cell wall polymer that plays an important role in the growth and development of plants. The gene cellulose synthase A (CesA), encoding cellulose synthases, is involved in the synthesis of cellulose microfibrils. However, the regulatory mechanism of CesA gene expression is not well understood, especially during the early developmental stages. Objective To identify factor(s) that regulate the expression of CesA genes and ultimately control seedling growth and development. Methods The presence of cis-elements in the promoter region of the eight CesA genes identified in flax (Linum usitatissimum L. 'Nike') seedlings was verified, and three kinds of ethylene-responsive cis-elements were identified in the promoters. Therefore, the effect of ethylene on the expression of four selected CesA genes classified into Clades 1 and 6 after treatment with $10^{-4}$ and $10^{-3}M$ 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid (ACC) was examined in the hypocotyl of 4-6-day-old flax seedlings. Results ACC-induced ethylene either up- or down-regulated the expression of the CesA genes depending on the clade to which these genes belonged, age of seedlings, part of the hypocotyl, and concentration of ACC. Conclusion Ethylene might be one of the factors regulating the expression of CesA genes in flax seedlings.
Acetolactate synthase was purified from Escherichia coli MF2000/pTATX containing Arabidopsis thaliana acetolactate synthase gene. Purification steps included DEAE cellulose ion exchange column chromatography, phenyl sepharose hydrophobic column chromatography, hydroxylapatite affinity column chromatography, and Mono-Q HPLC. Molecular weight was estimated to be ∼65 KDa and purification fold was 109 times. The enzyme showed a pH optimum of 7 and the $K_M$ value was 5.9 mM. The purified enzyme was not inhibited by any of the end products, valine, leucine, and isoleucine.
The mature cyst of Acanthamoeba is highly resistant to various antibiotics and therapeutic agents. Cyst wall of Acanthamoeba are composed of cellulose, acid-resistant proteins, lipids, and unidentified materials. Because cellulose is one of the primary components of the inner cyst wall, cellulose synthesis is essential to the process of cyst formation in Acanthamoeba. In this study, we hypothesized the key and short-step process in synthesis of cellulose from glycogen in encysting Acanthamoeba castellanii, and confirmed it by comparing the expression pattern of enzymes involving glycogenolysis and cellulose synthesis. The genes of 3 enzymes, glycogen phosphorylase, UDP-glucose pyrophosphorylase, and cellulose synthase, which are involved in the cellulose synthesis, were expressed high at the 1st and 2nd day of encystation. However, the phosphoglucomutase that facilitates the interconversion of glucose 1-phosphate and glucose 6-phosphate expressed low during encystation. This report identified the short-cut pathway of cellulose synthesis required for construction of the cyst wall during the encystation process in Acanthamoeba. This study provides important information to understand cyst wall formation in encysting Acanthamoeba.
Crop productivity can be obstructed by various biotic and abiotic stresses and thus these stresses are a threat to universal food security. The information on the use of viruses providing efficacy to plants facing growth challenges owing to stress is lacking. The role of induction of pathogen-related genes by microbes is also colossal in drought-endurance acquisition. Studies put forward the importance of viruses as sustainable means for defending plants against dual stress. A fundamental part of research focuses on a positive interplay between viruses and plants. Notably, the tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) and tomato chlorosis virus (ToCV) possess the capacity to safeguard tomato host plants against severe drought conditions. This study aims to explore the combined effects of TYLCV, ToCV, and drought stress on two tomato cultivars, Money Maker (MK, UK) and Shalala (SH, Azerbaijan). The expression of pathogen-related four cellulose synthase gene families (CesA/Csl) which have been implicated in drought and virus resistance based on gene expression analysis, was assessed using the quantitative real-time polymerase chain reaction method. The molecular tests revealed significant upregulation of Ces-A2, Csl-D3,2, and Csl-D3,1 genes in TYLCV and ToCV-infected tomato plants. CesA/Csl genes, responsible for biosynthesis within the MK and SH tomato cultivars, play a role in defending against TYLCV and ToCV. Additionally, physiological parameters such as "relative water content," "specific leaf weight," "leaf area," and "dry biomass" were measured in dual-stressed tomatoes. Using these features, it might be possible to cultivate TYLCV-resistant plants during seasons characterized by water scarcity.
Phenoxazinone synthase catalyzes the oxidative condensation of two molecules of substituted o-aminophenol to the phenoxazinone chromophore of actinomycin. Mutant strain, Streptomyces sp. V-8-M-1 producing higher phenoxazinone synthase, was obtained from Streptomyces sp. V-8 by treatment of N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine. The phenoxazinone synthase was purified from extract of mutant strain of Streptomyces sp. V-8-M-l by successive steps of streptomycin sulfate, ammonium sulfate precipitation. DEAE-cellulose and Sephadex G-200 column chromatography. Molecular weight of the enzyme was 360,000 daltons. The enzyme was composed of octamer of a single subunit of 45,000 daltons. The Km value and Vmax value for 3-HAA were $14.9{\;}{\mu}M$ and 9.5 mg/U, respectively. The optimal pH and temperature for the enzyme activity were 9.0 and $25~30^{\circ}C$, respectively. Treatment of the enzyme with group specific reagents, phenylglyoxal, p-hydroxymercury-benzoate, Nbromosuccinimide, 5.5'-dithiobis-nitrobenzoic acid and ethylmaleimide resulted in loss of enzyme activity, which shows arginine and cysteine residues are at or near the active site.
Park, Jae-Eup;Kim, Sang-Su;Kim, Young-Lim;Kim, Min-Ju;Ha, Heun-Young;Lee, In-Yong;Moon, Byung-Chul;Ihm, Yang-Bin
Weed & Turfgrass Science
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v.3
no.3
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pp.165-173
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2014
This review study was conducted to recommend the effective use of herbicide mixtures in Korea. The herbicide ingredients by Herbicide Resistancce Action Committee (HRAC) was classified into 23 groupes according to the mode of action (acetyl CoA carboxylase inhibitors, acetolactate synthase, photosystem I and II inhibitors, protoporphyrinogen oxidase inhibitors, carotenoid biosynthesis inhibitors, enolpyruvyl shikimate-3-phosphate synthase inhibitors, glutamine synthetase inhibitors, dihydropteroate synthetase inhibitors, mitosis inhibitors, cellulose inhibitors, oxidative phosphorylation uncouplers, fatty acid and lipid biosynthesis inhibitors, synthetic auxins, auxin transport inhibitors and potential nucleic acid inhibitors or non-descript mode of action). The rice herbicide mixtures registered in Korea were classified based on the guideline of HRAC. Accordingly, such a classification system for resistance management can help to avoid continuous use of the herbicide having the same mode of action in the same field.
Carrot is one of the useful crops used abundantly in cooking in Western as well as Asia regions such as China and Korea. However, seed coats have hairs which should be removed to increase germination rate. Furthermore, because of seed hairs, farmers face several additional losses, such as time consumption, manpower, capital and so on, for seed handling. To prevent these problems, study of gene related hair formation using short-hair seed lines is required. We analyzed genes related to hair formation from seed through expressed sequenced tag (EST) profiling, based on the fact that the development of carrot seed hair is related to cellulose synthesis pathway in secondary cell wall synthesis stage. To study the gene expression related to hair formation of the carrot seed, a cDNA library was constructed by using the early maturation stage of the short-hair line (659-1) and hairy seed line (677-14). In short-hair (659-1) and hairy seed (677-14) lines, results from of EST profiling through BLASTX search analysis using the NCBI database showed that 172 and 224 unigenes had significant homology with known protein sequences, whereas 233 and 192 unigenes were not, respectively. All ESTs were grouped into 16 categories according to their putative functions. Twenty nine unigenes among all ESTs were considered to be genes regulating seed hair development from cellulose synthesis pathway during secondary cell wall synthesis stage; in results, 14 unigenes related to seed hair development were found only in hairy seed line.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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