Somatic embryogenesis has become a major tool in the study of plant embryology, as it is possible in culture to manipulate cells of many plant species to produce somatic embryos in a process that is remarkably similar to zygotic embryogenesis. Traditionally, the process has been studied by an examination of the ex vitro factors which influence embryo formation. Later structural, physiological and biochemical approaches have been applied. Host recently, molecular tools are being used. Together, these various approaches are giving valuable information on the process. This article gives an overview of somatic embryogenesis by reviewing information on the morphogenesis, physiology, biochemistry and molecular biology of the process. Topics covered include a brief description of the factors involved in the production of embryogenic cells. Carrot cell suspension is most commonly used, and the development of a high frequency and synchronous system is outlined. At the physiological and biochemical lev-els various topics, including the reactivation of the cell cycle, changes in endogenous growth regulators, amino acid, polyamine, DNA, RNA and protein metabolism, and embryogenic factors in conditioned medium are all discussed. Lastly, recent information on genes and molecular markers of the embryogenic process are outlined. Somatic embryogenesis, the best example of totipotency in plant cells, is not only an important tool in studies in basic biology, but is potentially of equal significance in the micropropagation of economically important plants.
Inoculation of carrot discs with Agrobacterium rhizogenes harboring Ri plasmid resulted in transformation of cells, as revealed by the tumors and hairy roots arising from them. Measurements of IAA content using HPLC indicate that it is higher in tumors and inoculated tissues than in uninoculated tissue. A lot of meristemoids and vessel elements formed I tumor tissue and the hairy roots differentiated from meristemoids. IAA content in tumor tissues is decreased with hairy root and vessel elements formation from them. Formation of wound callus in uninoculated tissues resulted on wound healing but no formation of vessel elements and hairy roots. Tumor tissues show continuous growing on hormone free medium.
These studies were carried out to obtain the transformant from carrot cells by using binary vector pGA472 with NPT II gene to confer kanamycin resistance in the plant cells. The binary vector pGA472 was mobilized from E. coli MC1000 into A. tumefaciens strains isolated in the Korea, C23-1. K29-1, and disarmed Ti-plasmid PC2760, and A28l using a tri-parental mating method with E. coli HB101/pRK2013. Transconjugants, C23-1/pGA472, K29-1/pGA472, PC2 760/pGA472 and A28l/pGA472 were obtaind on the minimum AB media containing tetracycline and kanamycin, were comfirmed to hold the Ti-plasmid and pGA472 binary vector on the 0.7% agarose gel. Transformed carrot calli were initiated on the MS media supplemented with l00$\mu\textrm{g}$/ml kanamycin and 250$\mu\textrm{g}$/ml carbenicillin after co-cultivation of carrot explant and transconjugant Agrobacteria. Selected callus was grown vigouousley for subculture on the medium containing 100$\mu\textrm{g}$/ml kanamycin, thus indication that the selected callus was transformed with NPT II gene.
The effect of Ca2+ and polyamines on the activity $\beta$-glucan synthetase II(GSII) related to cell wall synthesis was studied in carrot suspension cultured cells. The activity of GS II is four times higher than that of $\beta$-glucan synthetase I in carrot suspension cultured cells and in vitro expreiment, the activity of GSII was increased in response to increase in concentration of Ca2+ and polyamines. When carrot suspension cultured cells were incubated together with Ca2+ and polyamines, the GSII activity was high at 0.1mM of Ca2+ and 1mM of putrescine. Also, polycationic poly-L-lysine and poly-L-ornithine increased about 50% the GSII activity than that of the control, respectively. These results may imply that Ca2+ and polyamines were related to the enzyme activity as a polycationic nature. In addition, verapamil as the calcium channel blocker and flunarizine as an antagonist of calcium mechanism in cytoplasm decreased GSII activity ramarkably, Ca2+ and calmodulin stimulated GSII activity as Ca2+ of free ion rather than Ca2+ calmodulin complex. The effect of 2,4-D on the GSII activity in culture medium is shown to be low at 0.1mg per liter and GSII activity increased about 30% more than that of the 0.1mg/l at the range of 0.3-1.0mg per litere. Cummulative results suggest that Ca2+ and polyfamines stimulate the cell wall synthesis by means of the enhancement of GSII activity responsible for synthesizing the cell wall components.
Anthers from several lines of carrot (Daucus carota L.) were plated on the semi-solid B$_{5}$, basal medium supplemented with 2,4-D and NAA at two concentrations, 1.0 and 2.0 mg/L plus 0.2 mg/L BAP (benzylaminop-urine). Anthers of the most lines on the B$_{5}$ basal medium with 2,4-D showed higher percentages of callus formation than those with NAA. Particularly, in line 45477, highest percentages of callus formation (50%) were observed on B$_{5}$ medium with 1.0 mg/L 2,4-D plus 0.2 mg/L BAP. With 1.0 mg/L 2,4-D, two months was sufficient for initiation of callus development. Calli were regenerated into plantlets through embryogenesis onto regeneration medium without any growth regulators. When callus showing yellowish and soft structure was cultured, it yielded green plants at high regeneration rates, The response of anthers in callus induction and plant regeneration was different among lines investigated. Optimal callus induction and plant regeneration could be obtained through manipulating the concentration of growth regulators. Plantlets after transfer to perlite were grown successfully in greenhouse conditions. Anther culture of carrot will be used as a useful breeding tool in future.
V8 juice agar (V8A) has been the most popular and commonly used medium for growth and reproduction of Phytophthora. However, frequently V8 vegetable juice is not available or difficult to obtain in Korea. We therefore developed widely accessible medium to substitute for V8A using domestically available five juices; two carrot (KCJA), two tomato (KTJA) and a vegetable-mix (KVMA). To prepare 10% juice medium, each vegetable juice 100 ml, DW 900 ml, agar 17 g and Ca CO3 0.5∼1.0g were supplemented to adjust pH ca. 6.0 Mycelial growth of P. cactorum and P. capsici on KTJA and KVMA was equally effective as V8A for the growth of P. cactorum, P. capsici, P. drechsleri and P. nicotianae under light. Sporangial production of P cactorum, P. capsici and P. nicotianae on KTJA and KVMA was as good as V8A and slightly better than CKJA, but the difference was insignificant by P. cactorum and P. nicotianae. The four fungi successfully formed oospores on all the media although the numbers were varied among species and media. While KTJA was the best for P. cactorum and P. capsici, V8A was the best for P. capsici and P. drechsleri. However, KCJA stimulated highest number of oopspores of P. nicotianae. Overall results showed that domestically available vegetable juices were highly effective on growth and reproduction of Phytophthora and comparable to V8 juice. Therefore, the domestic juice medium can be successfully replaced V8A in Phytophthora study.
With 32 fungicides, it was examined the inhibitory effects on the mycelial growth of Alternaria dauci KACC42997 causing Alternaria leaf blight of carrot. Showing the results of the agar dilution method, the fungicides belonging to C2, C5, G1, E2, and E3 group were excellent in inhibiting mycelial growth. Protective fungicides belonging to M group, except for iminoctadine tris-albesilate, and pyraclostrobin belonging to C3 group were effective in inhibiting spore germination of pathogens. The fungicides included into C2 group inhibiting succinate dehydrogenase activity and the G1 group inhibiting demethylase activity showed the excellent inhibitory effect on mycelial growth but the inhibitory effect of spore germination was very low. However, fluazinam belonging to C5 group was excellent in inhibiting spore germination as well as mycelial growth. Especially, when 100 ㎍/ml of fluxapyroxad belonging to the C2 group was treated, 47.1% of spore formation was inhibited on the medium. In comparison of the resistance factors of 3 fungicide groups, as G, C, and E group, in populations of A. dauci isolates collected from Gumi, Pyeongchang, and Jeju, resistance factor in the population of Jeju was the lowest. However, two isolates resistant to fludioxonil belonging to E2 group were found in the isolate group of Pyeongchang, and both showed cross-resistance to iprodione and procymidone.
The present study was attempted to investigate the antioxidant capacity of popular yellow-green vegetable juices (kale, Angelica keishei, carrot, small water dropwort) and to investigate the effect of vegetable juices on protecting oxidative damage to DNA in cultured Chinese hamster lung (CHL) cells. Antioxidant capacity was analyzed by TRAP assay (Total radical-trapping antioxidant potential). Cellular DNA dmamage was measured by SCGE (single-cell gel electrophoresis, also known as comet assay. Cells incubated in medium with PBS (negative control) or with various concentration of the freeze dried green juices (25, 50, 100, 250 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$) resuspended in PBS were treated with $H_2O_2$ (200 ${\mu}{\textrm}{m}$) as an oxidative stimulus for 5 min at 4$^{\circ}C$. The physiological function of each vegetable juice on oxidative DNA damage was analyzed and expressed as tail moment (tail length X percentage migrated DNA in tail) . Kale juice had the highest TRAP value suggesting that kale has the highest antioxidant capacity followed by Angelica keishei, small water dropwort and carrot. Cells treated with $H_2O_2$ had extensive DNA damage compared with cells treated with PBS or pre-treated with vegetable juice extracts. All green juices inhibited $H_2O_2$-induced DNA damage with kale being the most effective juice among the tested juices. These results indicate that green juice supplementation to CHL cells followed by oxidative stimulus inhibited damage to cellular DNA, supporting a protective effect against oxidative damage induced by reactive oxygen species. (Korean J Nutrition 36(1) : 24-31, 2003)
The effect of blanching time and power settings of microwave oven on the ascorbic acid retention in seven kinds of vegetables were investigated. The vegetable were blanched for 120 or 180 sec. at three different power setting, 650 watt(high power), 500 watt(medium power) and 160 watt(low power). The retentions of ascorbic acid in cabbage, garland chrysanthemum, mungbean sprout, amaranth and carrot were higher when they were blanched at the high power than those blanced at the lower power stettings. Blanching of spinach and yul-moo(small korean radish) showed that the vitamin was more retained by the medium power heating. Blanching at the low power revealed that the ascorbic acid retention was reduced remarkably as the blanching time increased. From the scoring difference tests the 10-panel members indicated that the texture of three-tested vegetables was more acceptable when they were blanched at the high power setting.
Ditylenchus destructor isolated from diseased ginseng roots was cultured on ginseng calli, fungal mycelium (Fusarium solani), carrot discs and radish sprouts. Effects of temperature, organic material and flooding on the nematode population changes were examined. D. destructor multiplied readily on the culture media except radish sprout medium, and was cultured best on the fungal culture at 2$0^{\circ}C$. Feeding of the fungal hypha and radish root hairs, molting and mating in the fungal culture medium were observed. Addition of organic materials (perilla, sesame, soybean and ginseng leaves) in soil significantly increased Aphelenchus avenae and saprophytic nematode populations, while D. destructor populations changed little and the nematode population growths were limited by the organic amendments (except sesame leaves). The nematode populations in soil including D. destructor were decreased by flooding. The results indicate that D. destructor may survive but not multiply readily in soil without host plants and that it can be effectively controlled by flooding.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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