• 대한수의학회지
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• 제29권4호
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• pp.503-515
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• 1989

Critical parameters affecting sensitivity and specificity of an enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) for detection of antibodies to avian infections bronchitis virus(IBV) were standardized. By adopting the optimized conditions an equation calculating ELISA antibody titers from the observations at single serum dilution was formulated. The purified antigen of IBV Mass-41 strain was dispensed into polystyrene microplate wells at a concentration of 300ng per well($100{\mu}l$) and the plates were coated by completey drying at $37^{\circ}C$. Diluted chicken serum and horseradish peroxidase conjugated goat anti-chicken IgG were added in order in $100{\mu}l$ volumes per well and allowed to react for 30 minutes each at room temperature. Just before use and after each reaction the plates were washed three times with distilled water. Finally o-phenylenediamine solution was added as an enzyme substrate. After incubation for another 15 minutes at room temperature absorbances were read at 492nm. Hyperimmune serum against Mass-41 strain was used as internal reference positive(IRP) serum. After repeated titration of IRP and negative serum, a constant titer of IRP was determined. Serum titrations were carried out for various sample sera together with IRP and negative sera and the observed titers of sample sera were corrected by reflecting the ratio between observed and constant titers of IRP serum. These corrected titers of the sample sera were plotted against sample/positive(S/P) OD ratios. All the OD's measured in the serum titrations were also corrected by substracting negative serum OD. The following equation was formulated from the above data; $Log_{10}$ ELISA titer=$5.568({\log}_{10}S/P)+4.161$ Thus it was possible to calculate ELISA titer by measuring absorbance at 1/400 single serum dilution. Titer measured by cross ELISA tests employing Mass-41 strain and three local IBV isolates were similar. These results suggest that the ELISA tests standardized in this study can be used for evaluating not only vaccinal immunity but also for infection status against fields IBV's.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제6권3호
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• pp.111-117
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• 1991

가축사료중 zearalenone 분석을 위한 enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) 법의 개발을 위해 우선 zearalenone의 항원성을 증폭시키기 위해 zearalenone oxime 유도체를 합성한 다음 bovine serum albumin(BSA)와 conjugate를 만들고, 이를 항원으로 토끼에 면역시켜 11주에 zearalenone에 특이한 항체를 얻어냈다. 생성된 항체를 zearalenone외에 ${\alpha}-zearalenol$과는 강한 cross reactivity를 나타내었고 ${\beta}-zearalenol,\;{\alpha}-zearalenol\;및\;{\beta}-zearalenol$과는 약간의 반응을 보였으며 확립된 ELISA 조건은 당므과 같다. 먼저 시료를 methanol-phosphate buffered saline-dimethyl formate(70 : 29: 1)을 4배 첨가하여 blending 한 다음 Whatman No. 4를 통한 여액을 ELISA시료로 사용하였다. 효소 반응시간과 발색시간은 각각 $37^{\circ}C$에서 30분과 15분이었고, 흡광도는 410nm에서 ELISA reader로서 측정하였으며, 측정한계는 1~100 ppb로 매우 낮았다. 확립된 ELISA 조건으로 실제시료의 zearalenone오염도는 측정결과 24개 시료 중 4개의 시료가 양성반응을 보였고 그 함량범위는 $3.93~7.43\;\mu\textrm{g}/kg$이었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제24권5호
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• pp.630-635
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• 1996

For a survey of the occurrence of aflatoxin M$_{1}$ (AFM$_{1}$) in domestic cow's milk, we developed an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) system, and quantitated the toxin in cow's milk. In order to produce specific antibodies AFM, conjugated to bovine serum albumin (AFM$_{1}$-BSA) and Freund's adjuvant were immunized subcutaneously to rabbits. By use of the antiserum showing the highest titer and AFB$_{1}$-HRP conjugate, we established a competitive direct ELISA (cdELISA) for AFM$_{1}$, whose detection limit was 0.003 ppb. The cross-reactivities of the antiserum against aflatoxin M$_{1}$ M$_{2}$, B$_{1}$, B$_{2}$, G$_{1}$, G$_{2}$, B$_{2a}$, and G$_{2a}$, were 100, 29.9, 25.0, 2.7, 13.0, 0.65, 0, and 0%, respectively. When the cdELISA was applied to the cow's milk spiked with AFM$_{1}$ and followed by cleanup with C$_{18}$ cartridge, the mean recovery of the assay was 104% (mean of CV, 6.4%) in the final concentration of 0.01-1 ppb (10-1, 000 ppt). When cow's milk samples gathered from markets and farms were assayed by the cdELISA, the mean concentration and SD of AFM$_{1}$ was 80.4 $\pm$ 55.0 ppt (n=64; range, 5.6-280 ppt).

• 한국임상수의학회:학술대회논문집
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• 한국임상수의학회 2009년도 춘계학술대회
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• pp.244-244
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• 2009

• 한국식품과학회지
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• 제40권3호
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• pp.343-348
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• 2008

여러가지 방법으로 난백을 처리하고 난백 중 주요한 알레르겐인 OM의 알레르기성 변화를 계란 알레르기 환자의 IgE 항체를 이용한 간접경합 ELISA로 조사하였다. 12종의 효소를 이용한 가수분해, 방사선조사, succinic anhydride 처리는 OM의 알레르기성을 효과적으로 감소시키지 못 하였다. OM의 당쇄를 제거하는 TFMS의 처리는 OM의 알레르기성을 1/20 정도로 감소시켰다. $100^{\circ}C$에서 10분간의 열처리는 알레르기성을 감소시키지 못하였으나 $121^{\circ}C$(10분)의 처리는 난백 중 OM의 알레르기성을 1/100정도로 감소시켰다. NaOH 단독 처리는 3%(w/v) 이상에서 알레르기성이 대부분 사라졌고, NaOH(0.3%(w/v) 이상)와 열($70^{\circ}C$,15 min)의 복합처리는 알레르기성을 1/10,000 이하로 낮춤으로써 가장 효과적인 감소를 보였다. 본 연구에서 환자의 IgE 항체를 이용한 ELISA 분석결과와 동일 시료에 대한 토끼 IgG 항체의 ELISA 결과는 대체적으로 비슷한 결과를 보였지만, TFMS 처리물에 대한 반응성은 후자에서 훨씬 많이 감소되어(1/10,000) 대조적이었다. 이는 식품의 항원성과 알레르기성 간에는 약간의 차이가 있음을 시사하였다.

• 한국독성학회:학술대회논문집
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• 한국독성학회 2002년도 Molecular and Cellular Response to Toxic Substances
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• pp.185-185
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• 2002

A murine local lymph node assay (LLNA) has been developed as an alternative test to guinea pig maximization test. The disadvantage of LLNA is the need for the use of radioactive material. In this study, we aimed to investigate the development of non-radio isotopic endpoint for local lymph node assay in Balb/c mice using Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) based on Bromodeoxyuridine (BrdU) incorporation.(omitted)

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1996년도 춘계학술대회
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• pp.176-176
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• 1996

축산식품중에 잔류하고 있는 sulfamethazine을 검출하기 위하여 sulfamethazine에 대한 단클론항체를 생산하고 이를 이용하여 효소면역측정법을 개발하였다. 면역원은 sulfamethazine에 KLH를 그리고 흡착항원은 BSA를 glutaraldehyde법으로 결합시켰다. 면역원으로 Balb/c mouse를 면역시킨 다음 비장 형질세포률 얻어 myeloma cell과 융합하여 융합잡종세포를 만들었다. Sulfamethazine에 대한 항체를 분비하는 융합잡종세포를 단계회석법과 ELISA를 이용하여 cloning하여 D2, A9, B8, Bl 클론을 얻었다. 이들 클론에서 얻어진 단클론항체를 사용하여 indirect competitive ELISA를 실시하여 표준곡선을 작성하여 본 결과 농도의존성 곡선을 얻을 수 있었다. 4클론중에서 A9 클론을 사용하여 다른 유사한 sulfonamide듣과 p-aminobenzoic acid와 교차반응을 조사한 결과 sulfamerazine에 12.5%의 교차반응을 보였으나 다른 설파제에 대해서는 교차 반응을 보이지 않았다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제59권1호
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• pp.47-52
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• 2005

연구배경 : 클라미디아 폐렴균은 임상적으로 중요한 균으로 혈청검사가 진단에 중요하다. 현재 이용되는 micro-immunofluorescence법은 주관적이고 시간이 많이 소요되므로 좀더 객관적으로 진단할 수 있는 ELISA법을 이용하여 만성 기침을 주소로 내원한 환자들의 혈청을 대상으로 검사하고 표준방법과 결과를 비교하였다. 방 법 : 2003년 8월부터 2004년 7월까지 강원대학교병원을 방문한 35명의 성인 환자에서 얻은 혈청을 ELISA법과 micoimmunofluorescence법으로 시행하였다. 비인두 스왑에서 PCR을 시행하였다. 두 방법의 비교는 비모수 상관계수 분석(Spearman)을 하였다. 결 과 : ELISA 검사결과 IgG는 민감도 84.0%, 특이도 60.0%, IgA는 민감도 84.0%, 특이도60.0%, IgM은 민감도 40.0%, 특이도 96.7%의 결과를 보였다. PCR은 3명의 환자에서 양성이었다. 결 론 : ELISA법이 많은 환자들을 대상으로 하는 역학적 연구에서는 좀더 유용하게 이용될 수 있을 것으로 사료된다. 임상적으로 적용되기 위해서는 좀더 연구가 필요할 것으로 사료된다.

• 한국가금학회지
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• 제18권3호
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• pp.183-196
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• 1991

세계적으로 가장 출현빈도가 높은 혈청형인 마사추셋형 IBV를 발육란에서 증식시킨 다음 요막강액을 채취, 바이러스를 농축 정제하여 항원으로 사용하고 야외 IBV감염계군에서 채취한 혈청중 HI반응에 의해 양성 및 음성혈청을 선발, 표준혈청으로 사용하여 ELISA를 시도한 결과 다음과 같은 성적을 얻었다. 1. 정제항원은 ELISA plate의 well당 40ng 단백량으로 coating하였을 때 높은 P/N치를 나타냈고 혈구응집항원은 well당 1.2~2.5 HA unit로 coating하였을 때 정제항원과 유사한 결과를 보였다. 2. 항원의 coating시 온도와 시간은 37$^{\circ}C$, 1시간이나 4$^{\circ}C$에 12~16시간 처리하였을 때 P/N에서 유의성 있는 차이를 보이지 않았으며 항원을 건조시켜 4$^{\circ}C$에 1개월 보관하여도 항원성의 변화를 인정할 수 없었다. 3 제품이 다른 3종류의 plate에서 항원 coating의 차이를 비교한 결과 제품간에 항원 coating의 균일도와 농도에 있어서 뚜렷한 차이가 인정되었다. 4. 음성혈청희석배수 1：50에서도 비특이 반응은 인정되지 않았으며 가경혈청은 1：100희석했을 때 높은 P/N치를 보여서 screen용 희석배수로 적당하였다. 5. Substrate처리한 후 발색 정도는 15분 이후에는 일정하여 30분까지 변화가 없었으며 이때 발색정지제를 처리하였을 때 치리직후부터 4시간까지도 흡광도에 있어서 유의성 있는 차이가 인정되지 않았다. 6. 74개의 혈청에 대해 ELISA에 의한 P/N치와 HI항체가와의 상관관계는 r＝0.42였으며 HI가 2$^{6}$이상, P/N치 1.4이상을 기준으로 하였을 때 양성 case의 일치율은 98.7%였다. 1. 백신접종 시험계군에서 ELISA와 HI test에 의한 항체 소장 비교에서는 10주째를 제외하고는 양 test에서 유사한 추이를 보였다.

• 한국식품과학회지
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• 제44권1호
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• pp.1-7
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• 2012

기존에 생선 검출을 위한 ELISA 개발은 여러 편 보고된 바 있으나, 고등어만을 특이적으로 검출하는 방법에 관한 보고는 거의 없었다. 본 연구에서는 고등어 parvalbumin에 대한 토끼 항체를 이용하여 가공식품 중 고등어의 검출을 위한 ELISA를 개발 하였다. 암모늄침전법과 Sephadex G-50 column chromatography를 이용하여 열에 안정한 12 kDa의 고등어 parvalbumin을 분리, 정제하였다. 여기에서 얻어진 parvalbumin을 토끼에게 면역하여 생산한 항 parvalbumin 항체 및 특이항체-HRP 복합물을 이용하여 샌드위치 ELISA(sELISA)의 조건을 확립하였다. 이때 parvalbumin 의 검출한계는 3 ng/mL이고, 고등어(생살)의 검출범위는 5-5,000 ${mu}g/mL$이었다. 이어서. 광어, 우럭, 오징어, 꽃게, 꽁치, 대구, 새우, 연어, 바다가재, 고등어에 대한 교차반응을 조사한 결과 고등어에 대한 반응성은 월등히 높았으나 다른 수산식품에서는 반응성이 거의 없거나 매우 낮게 나타나 고등어에 대한 특이성이 매우 높은 항체임을 알 수 있었다. 또한 분석시 시료의 열 안정성은 $100^{\circ}C$까지 양호하였으며 크림스프, 이유식, 소시지, 소스에 대한 spike test(0.01-0.3%)에서 분석회수율은 각각 104, 101, 54, 0%로 나타났다. sELISA에 의하여 16점의 시판시료 중 고등어의 함유 유무를 조사한 결과, 정성적으로 표시와 일치하는 것은 75%이었다. 그러므로 본 연구에서 개발한 sELISA는 일부 한계가 있기는 하지만, 가공식품 중 고등어를 정성적으로 검출하는데는 효과적으로 활용할 수 있을 것이다.