• 대한본초학회지
• /
• 제24권3호
• /
• pp.29-37
• /
• 2009

Objectives : The present study was carried out to investigate the effect of Trichosanthis Radix extract (TRE) on the proliferation and activation of eosinophils which were prepared from lung cells of asthma-induced mice by ovalbumin (OVA) treatment. Methods : C57BL/6 mouse was exposed to OVA three times a week for 6 weeks. The mouse lung tissues were dissected out, chopped and dossiciated with collagenase (1 $\mu$g/ml). Eosinophils were activated by rmIL-3/rmIL-5 co-treatments. The lung cells were treated with TRE, incubated for 48 hr at 37$^{\circ}C$, and analyzed by flow cytometer, ELISA and RT-PCR methods Results : To measure cytotoxicity, mouse lung fibroblast cells (mLFCs) were pretreated with various concentrations of TRE. TRE at 100 $\mu$g/ml, the highest concentration, examined did not have any cytotoxic effects on mLFCs. In FACS analysis, number of granulocyte/lymphocyte, CD3e-/CCR3+, CD3e+/CD69+, CD4+/CD8+ T cells in asthma-induced lung cells were significantly decreased by TRE treatment compared to the control group. But CD4+/CD25+ T cells were not examined significant change in lung cells treated with TRE. In ELISA analysis, production levels of IL-3, IL-5, IL-13 and histamine in asthma-induced lung cells, which were induced by rIL-3 plus rmIL-5 co-treatment, were significantly decreased by TRE treatment. Conclusions : The present data suggested that Trichosanthis Radix on the inhibition of parameters associated with asthma responses in eosinpophils, and thus implicate the possibility for the clinical application of Trichosanthis Radix.

• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제26권2호
• /
• pp.73-86
• /
• 1988

간흡충(Clonorchis sinensis)의 조항원(WWA), 정제항원(ABA)의 민감도와 특이도를 비교해 보는 한편, 발육단계별로 충란 항원(EGA)-피낭유충 항원(MEA)-성충 항원(WWA)의 단백질 구성물질의 차이를 SDS-polyacrylamide gel electrophoresis(SDS-PAGE)로 관찰하고 이들 항원의 유용성을 효소면역반응(enzyme-linked immunosorbent assay: ELISA)으로 비교하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 간흡충의 조항원으로부터 정제된 항원(ABA)은 항체와 결합한 결합항원(affinity-purified antibody(IgG) binding antigen:ABA)으로서 Ouchterlony 반응으로 간흡충 감염 가토혈청과 4개의 침모대 (WWA는 7개)를 형성하였다. WWA의 major protein들은 분자량 16,300∼18,500 및 28,000∼29,000 dalton의 Polypeptide band였고, ABA는 분자량 18,000∼21,000 및 29,000∼31,000 dalton의 단백질로 다소의 차이를 보였다. ELISA시첩에서 ABA는 WWA에 비해 현저히 민감도가 낮았다. WWA와 ABA에 대한 폐흡충 감염 사람혈청의 ELISA 정사에서 WWA는 Ouchterlony 양성자 8예중 3예에서 교차반응을 나타내었으나 ABA는 교차반응을 나타내지 않았다. 간흡충의 발육단계별 항원 단백질의 분자량 범위는 WWA 11,000∼80,000, MEA 15,000∼100,000, EGA 15,000∼200,000 dalton이었다. 주류원 단백질의 분자량은 EGA는 각각 36,600 (band No. 22), 38,500(No. 20), 64,000(No. 9), 62,000(No. 10), 54,500(No. 11), 53,000(No. 12) dalton, MEA는 각각 65,600(No. 3), 44,700 (No.7), 43,900(No. 8) dalton, WWA는 각각 16,300∼18,500(No. 31-32), 28,000∼29,000(No. 25), 11,000w13,000 (No. 35) 및 31,000(No. 24) dalton이었다. 즉, MEA와 EGA가 WWA보다 고분자의 단백질로 구성되어 있었다. 각 발육단계별 항원의 항원성은 ELISA 반응으로 볼 때 WWA가 가장 높았고, MEA는 약한 항원성만을 나타내었으며 EGA는 음성이었다. WWA와 간흡충 감염 가토혈청은 감염 4∼6주에 OD>1.0, 12주 이후 항체가의 plateau를 나타내었으나 MEA는 Ouchterlony 반응에서 EGA와 함께 음성반응을 보였다. ELISA에서도 중감염군(12∼20주)에서만 OD>0.6으로 미약한 항원성이 인정되었으며 경감염군은 전감염기간중 OD<0.6를 나타내었다. 이상의 결과로 보아 성충 항원이 가장 강력한 함원성 물질을 포함하고 있음이 명백하다고 생각된다. 그러나 성충 조항원은 면역진단에 사용할 겹우 타흡충과의 빈번한 교차반응이 예상되므로 민감도 및 특이도가 높은 정제 항원물질을 분리하는 일이 중요하다고 생각된다.

• 한국식품위생안전성학회지
• /
• 제31권1호
• /
• pp.21-27
• /
• 2016

본 연구에서는 V. parahaemolyticus를 신속정확하게 고감도로 검출하기 위해 단클론성 항체를 개발하고 이를 이용하여 일반적인 효소면역분석법(ELISA)과 효소면역분석법의 낮은 민감도를 보완할 수 있는 면역선택여과법(ISF)을 개발하여 민감도 및 효율성을 비교분석 하였다. 먼저 heat killed V. parahaemolyticus (HKVP)를 준비하여 7주령 BALB/c mouse에 면역한 후 세포융합 및 클로닝을 통해 HKVP 4H9-9번 및 16번 2종의 hybridoma cell을 확보하였다. Western blot을 통해 보다 특이성이 높은 것으로 확인된 HKVP 4H9-9번 항체를 대량 생산정제하여 분석법을 확립한 결과 검출한계가 ID-ELISA법은 $10^6cell/mL$, ISF 법은 $5{\times}10^1cell/mL$로 나타나 ISF법의 민감도가 매우 높은 것으로 확인되었다. 분석효율성은 ID-ELISA법의 경우 분석을 위해 9단계의 과정을 거쳐 총 16시간의 분석시간이 소요된 반면, ISF법의 경우 3단계의 과정을 거쳐 1시간 이내에 분석을 완료할 수 있는 것으로 확인되었다. 교차반응성의 경우 두 분석법 모두 일부 Vibrio spp. (IDELISA법: V. alginolyticus, ISF법: V. vulnificus)과 S. aureus에 반응성이 있는 것으로 확인되었지만 V. parahaemolyticus에 보다 강한 반응성을 나타내었기 때문에 V. parahaemolyticus에 특이적인 분석법인 것으로 확인되었다. 특히 ISF법은 ELISA법 보다 민감도가 높고 분석에 소요되는 시간도 짧아 V. parahaemolyticus를 신속하게 분석하는데 활용이 가능할 것으로 판단된다.

• 한국식품과학회지
• /
• 제26권5호
• /
• pp.532-538
• /
• 1994

Chymotrypsin, trypsin, pancreatin, 그리고 Aspergillus oryzae 유래 단백질분해효소의 in vitro 처리에 의하여 유청단백질(WPI)의 가수분해물(WPH)중 ${\beta}-LG$유래의 항원성변화를 조사하기 위하여 토끼 항${\beta}-LG$항혈청을 이용한 competitive inhibition ELISA(cELISA)와 heterologous PCA를 실시하였다. cELISA에 의하여 WPH의 monovalent항원성을 분석한 결과, 전체적으로 ${\beta}-LG$유래의 monovalent항원성은 효소처리에 의하여 $10^{-1.7}{\sim}10^{-4.1}$배 또는 그 이하로 저하되었으며, 특히 pepsin전처리후 Asp. oryzae유래의 효소로 가수분해한 경우(OUP)의 항원성은 거의 상실되었다. Guinea pig를 이용한 PCA test에 의하여 ${\beta}-LG$유래의 polyvalent항원성을 분석한 결과, WPH의 항원성은 $1/2{\sim}1/128$ 또는 그 이하로 저하되었다. 특히, WPH중에서 열변성이나 pepsin의 전처리없이 Asp. oryzae유래의 효소로 가수분해한 경우(OUN), 가수분해도(DH)가 그다지 높지 않고 monovalent항원성도 여전히 잔존하였음에도 불구하고($10^{-3.2}$배로 저하) 알레르기의 발증과 밀접한 관련이 있는 polyvalent항원성은 거의 상실되었다. 이는 OUN의 분해효율이 아주 높지는 않으나 ${\beta}-LG$상의 항원결정기가 효과적으로 파괴되어, polyvalent항원성이 제거되었기 때문으로 추측된다. 이 결과는, Asp. oryzae유래의 효소를 WPI에 처리하면 우유 알레르기의 주요 원인물질인 ${\beta}-LG$의 polyvalent항원성이 제거됨으로써 저알레르기성 infant formula용 WPH가 제조될 수 있음을 시사하고 있다.

• 대한약학회:학술대회논문집
• /
• 대한약학회 2001년도 Proceedings of the Pharmaceutical Society of Korea
• /
• pp.106.2-106.2
• /
• 2001

• 대한약학회:학술대회논문집
• /
• 대한약학회 2001년도 Proceedings of the Pharmaceutical Society of Korea
• /
• pp.198.1-198.1
• /
• 2001

• 한국환경성돌연변이발암원학회:학술대회논문집
• /
• 한국환경성돌연변이발암원학회 2002년도 Molecular and Cellular Response to Toxic Substances
• /
• pp.185-185
• /
• 2002

• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제34권4호
• /
• pp.279-282
• /
• 1996

간흡충 특이 단세포군항체인 CsHyb 0605-23과 반응하는 간흡충 항원의 특성을 밝히기 위하여 간흡충의 성충 조항원을 당지질 당질 단백으로 각각 분리한 후 각각 항원으로 사용하여 단세포 군항체와 효소떤역흡착검사법을 실시하였다. 그 결과. 오직 당질분획만이 단세포군항체와 반응하였다. 당질항원을 sodiumperiodate를 사용하여 약하게 산화시키자 단세포군항체와의 반응도가 떨어졌다. 따라서 이 단세포군항체에 반응하는 간흡충의 항원 및 항원결정기는 당질로 생각된다.

• Environmental Analysis Health and Toxicology
• /
• 제19권4호
• /
• pp.353-357
• /
• 2004

난황단백질인 비탈로제닌을 성숙한 암컷 붕어 혈청으로부터 음이온 교환 크로마토그래피를 이용하여 정제 하였다. 정제한 비탈로제닌을 BALB/c mice를 이용하여 폴리크로날 항체를 생산하였고 이를 protein A column을 사용하여 정제하였다. 또한 이렇게 정제된 폴리크로날 항체를 이용한 붕어 비탈로제닌 측정용 효소면역측정법을 개발하였으며 그 측정 범위는 2∼l,000ng/mL이고 recovery 변동 범위는 88∼112%였다. 또한 이 효소면역측정법을 평가하기 위해 성숙한 수컷 붕어를 1,000ng/L ethinylestradiol(EE$_2$) 에 4주 동안 노출시켜 유도되어지는 비텔로제닌을 측정하였다. 그 결과 성숙한 수컷 붕어의 경우 비탈로제닌이 3주 만에 암컷 붕어의 평균수치만큼 유도됨을 알 수 있었다.

• The Plant Pathology Journal
• /
• 제16권1호
• /
• pp.48-51
• /
• 2000

Citrus tristeza virus (CTV) was identified form CTV-infected early satsuma mandarin (Citus unshiu) and yuzu (C.junos) by RT-PCR. The total RNAs were isolated from citrus bark and seaf tissues infected with CTV and reverse transcription was followed with primers designed for amplifying CTV coat protein gene. DNA fragments 738 bp were amplified by RT-PCR and these products were colned for sequence analysis. Based on the sequence analysis, this PCR product has 97% sequence homology to CTV (T-385) CP gene isolated from USA. RT-PCR assay for CTV detection was more sensitivity than ELISA assay which was done with anti-CTV CP antibody. This is the frist report about CTV identification in Cheju island Korea.