난생 생물의 알 생성유도 단백질인 비텔로제닌(viteILogenin, VTG)을 성숙한 암컷 황소개구리 (Rana catesbeiana)혈청으로부터 음이온 교환 크로마토그래피를 이용하여 정제 하였으며 정제한 비텔로제닌을 BALB/c mice에 주사하여 폴리크로날 항체를 생산하였고 이것은 protein A column으로 정제 하였다. 이렇게 정제된 폴리크로날 항체를 이용하여 황소개구리 비탈로제닌 측정용 효소면역측정법을 개발하였으며 그 측정 범위는 $12{\sim}1,560ng/mL$였다. 또한 이 효소면역측정법을 평가하기 위해 성숙한 수컷 황소개구리를 청정지역과 폐수처리장 하류 하천에서 서식하는 황소개구리 혈액 속의 비텔로제닌을 측정하였다. 그 결과 폐수처리장 하류 하천에 서식하는 수컷 황소개구리 비텔로제닌이 청정지역보다 현저하게 높게 유도됨을 알 수 있었다.
Properties of unitary ATP-sensitive $K^+$ channels were studied using planar lipid bilayer technique. Vesicles were prepared from bullfrog (Rana catesbeiana) skeletal muscle. ATP-sensitive $K^+$ (K (ATP)) channels were identified by their unitary conductance and sensitivity to ATP. In the symmetrical solution containing 200mM KCI, 10mM Hepes, 1mM EGTA and pH 7.2, single K (ATP) channels showed a linear current-voltage relations with slight inward rectification. Slope conductance at reversal potential was $60.1{\pm}0.43$ pS(n=3)). Micromolar ATP reversibly inhibited the channel activity when applied to the cytoplasmic side. In the range of -50~+50 mV, the channel activity was not voltage-dependent, but the channel gating within a burst was more frequent at negative voltage range. Varying the concentrations of external/internal KCl(mM) to 40/200, 200/200, 200/100 and 200/40 shifted reversal potentials to $-30.8{\pm}2.9$(n=3), $-1.1{\pm}2.7$(n=3), 10.5 and 30.6(mV), respecrivety. These reversal potentials were close to the expected values by the Nernst equation, indicating nearly ideal selectivity for $K^+$ over $Cl^-$. Under bi-ionic conditions of 200mM external test ions and 200mM internal $K^+$, the reversal potentials for each test ion/K pair were measured. The measured reversal potentials were used for the calculation of the releative permeability of alkali cations to $K^+$ ions using the Goldman-Hodgkin-Katz equation. The permeability sequence of 5 cations relative to $K^+$ was $K^+$(1), $Rb^+$(0.49), $Cs^+$(0.27), $Na^+$(0.027) and $Li^+$(0.021). This sequence was recognized as Eisenman's selectivity sequence IV. In addition, modelling the permeation of $K^+$ ion through ATP-sensitive $K^+$ channel revealed that a 3-barrier 2-site multiple occupancy model can reasonably predict the observed current-voltage relations.
Using three species of Korean frogs (Rana dybowskii, R. rugosa and R. nigromaculata), the annual spermatogenic pattern, the seasonal changes in the steroidogenic competence, and responsiveness of testis to gonadotropins in terms of testosterone secretion in vitro were examined. The spermatogenic pattern of R. dybowskii was classified as a discontinuous type since spermatogenesis stops completely after spawning in late winter (February) until mid-summer (July). In contrast, the pattern of R. nigromaculata and R. rugosa was classified as a potent continuous type since sperm was always present in the seminiferous tubules all year round. In all three species, the levels of testicular testosterone and that of testosterone secreted by testis following in vitro culture were very low in late summer (August), but increased thereafter until winter (hibernation period). Interestingly, responsiveness of testis in vitro to gonadotropins in terms of testosterone secretion increased markedly in November (early hibernation period). Specifically, bullfrog LH was more effective than FSH in stimulating the secretion of testosterone by frog testis in vitro during hibernation period. This fact suggests that testosterone secretion by testis during hibernation is at least regulated by the pituitary gonadotropin rather than environmental factors. Taken together, the data presented here suggest that testicular cycles of three species of Korean frogs are closely linked to their females breeding cycles, and are eventually controlled by various environmental cues.
습지생태계에 심각한 영향을 미치는 침입외래종 황소개구리(Rana catesbeiana)의 생태적 제어를 목적으로 효과적인 생물종을 선발하기 위하여 6종의 토종 포식성 어류와 6종의 조류를 이용하여 황소개구리의 올챙이와 아성체를 대상으로 포식률을 측정하였다. 본 실험에 사용한 어류 중 동자개(Pseudobagrus fulvidraco), 메기(Silurus asotus), 가물치(Channa argus) 3종은 황소개구리의 올챙이와 아성체를 모두 포식하였고, 그 중 전자를 더 선호하였다. 그러나 끄리(Opsariichthys uncirostris), 드렁허리(Monopterus albus), 뱀장어(Anguilla japonica) 3종은 황소개구리의 올챙이와 아성체를 전혀 섭식하지 않았다. 그리고 고니(Cygnus columbianus), 큰고니(Cygnus cygnus), 쇠오리(Anas crecca), 원앙(Aix galericulata), 홍머리오리(Anas penelope), 가창오리(Anas formosa) 등 실험에 사용한 6종의 조류 또한 황소개구리의 올챙이와 아성체를 전혀 먹지 않았다. 결과적으로, 국내 습지생태계에서 토종 물고기를 이용한 침입외래종 황소개구리의 제어가능성을 확인할 수 있었다.
Recently, we have shown that some endocrine disruptors, heavy metals, organotins and azoles suppressed steroidogenic enzymes such as P450 side-chain cleavage enzyme (P450scc) and aromatase in bullfrog ovarian follicles. In the present study, by using an amphibian ovarian follicle culture system, we examined the effects of these endocrine disruptors on maturation and ovulation of oocytes from Rana dybowskii in vitro. Ovarian fragments or isolated follicles were cultured for 24 h in a medium containing frog pituitary homogenate (FPH) or progesterone ($P_{4}$) with or without endocrine disruptors, and oocyte maturation (germinal vesicle breakdown, GVBD) and ovulation were examined. Among the organotins, tributyltin (TBT) strongly inhibited both FPH-and $P_{4}-induced$ oocyte maturation ($ED_{50}$:0.6 and 0.7 ${\mu}M$, respectively); however, tetrabutyltin (TTBT) and dibutyltin (DBT) showed only partial suppression, while monobutyltin (MBT) showed no inhibitory effect. All of the organotins suppressed $P_{4}-induced$ oocyte ovulation very effectively at a low concentration, and TBT and DBT exerted an inhibitory effect on FPH-induced ovulation. Among the heavy metals, mercury (Hg), cadmium (Cd) and cobalt (Co) were very effective in inhibiting FPH-induced oocyte maturation and ovulation, while lead (Pb), arsenite (As) and zinc (Zn) were less effective. However, all of the heavy metals suppressed FPH-induced oocyte ovulation at a high dose ($100{\mu}M$). Among the azoles, itraconazole (ICZ), ketoconazole (KCZ) and clotrimazole (CTZ) effectively inhibited FPH-induced oocyte maturation and ovulation, while econazole (ECZ), miconazole (MCZ) and fluconazole (FCZ) were considerably less effective. These results demonstrated that the abovementioned endocrine disruptors exhibited differential effects on oocyte maturation and ovulation in amphibian follicles and that the frog ovarian culture system could be used as an effective experimental tool to screen and evaluate the toxicity of various endocrine disruptors in vitro.
본 연구에서는 수계에 서식하는 어류와 양서류에 대해 DEHA, carbaryl, amitrole의 잔류 실태를 조사하였다. 한강, 낙동강, 금강, 영산강 그리고 기타 수계를 포함한 29개 지점과 습지 2개 지점 등 총 31개 지점을 선정하였다. Carbaryl과 amitrole은 모든 지점에서 검출되지 않았으며, DEHA는 10개 지점에서 검출되었다. 검출된 DEHA의 최대 평균 농도는 금강에서 $52.7{\mu}g/kg$으로 나타났다. 검출된 10개 지점에 대해 살펴보면, 어류에 대한 평균 농도는 $40.0{\mu}g/kg$으로 나타났고, 양서류에 대한 평균 농도는 $8.90{\mu}g/kg$으로 어류에 비해 1/5 정도 상대적으로 낮게 나타났다. 검출빈도는 어류 10/62, 양서류 2/62를 보였고 어류에 대한 최대 검출 농도는 공주 지역의 붕어로 $95.5{\mu}g/kg$을 나타내었고, 양서류에 대해서는 나주 지역의 황소개구리로 $12.1{\mu}g/kg$였다. 검출된 10개 지점 중 6개 지점은 농경지였고 나머지 4개 지점은 준도시였다.
담수 외래종에 대한 대중의 인식은 시대나 외래종과 관련된 특정 사건에 따라 달라진다. 인식차이는 관리계획을 수립하고 이해하는데 영향을 미쳐 외래종을 관리하는데 대중들의 인식을 이해하는 것이 중요하다. 본 연구에서는 보전문화체학 (Conservation culturomics)에서 사용하는 소셜 네트워크 플렛폼의 디지털 텍스트, 언론보도, 인터넷 검색량을 분석하여 담수 외래종에 대한 대중의 관심도와 감성을 파악하고자 하였다. 11종의 담수 외래종을 대상으로 트위터 게시글 수와, 언론보도량, 검색량을 추출하여 대중의 관심도를 파악하였다. 또한 이 자료들의 시간에 따른 추세와 계절 변동성여부, 자료의 반복 주기를 확인하였다. 수집된 자료를 텍스트마이닝 기법 기반의 감성분석을 통해 감성지수(sentiment score)로 산출해 각 종에 대한 대중들의 감성을 분석하였다. 연구결과 황소개구리와 뉴트리아, 파랑볼우럭, 큰입우럭은 다른 종들보다 상대적으로 많은 대중의 관심을 받는 것으로 확인되었다. 일부 종에서는 특정 시기에 따라 반복되고 변화하는 트윗량과, 언론보도량, 검색량을 나타냈다. 한편 텍스트마이닝 분석 결과, 대부분의 사람들이 담수 외래종에 대해 부정적인 감성을 가지고 있었다. 특히 생태계교란 생물이 지정된 이후 연도가 갈수록 부정적인 감성은 증가하였다. 하지만 과학적 근거가 없는 정보가 확산되거나 혐오를 증대시켜 담수 외래종을 관리하는 것은 한계가 있다. 따라서 외래종에 대한 대중들의 인식을 과학적으로 파악하여 관리방안이 수립되어야 한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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