• 미생물학회지
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• 제42권4호
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• pp.294-298
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• 2006

Streptomyces somaliensis가 생산하는 phospholipase D (PLD)를 정제하기 위하여 펩티드 항체 결합 면역 친화 크로마토그래피용 칼럼을 개발하였다. 단백질 구조 예측 프로그램과 Streptomyces PLD X-선 결정구조를 참조하여, S. somaliensis PLD의 1차 구조로부터 항원특성이 높고. 표면에 위치하는 것으로 예상된 5종류의 펩티드들을 epitope로 선정한 뒤, 이에 대한 항체로 면역친화 크로마토그래피용 칼럼을 제작하였다. 배양 농축액을 칼럼에 통과시켜 정제한 활성 분획을 SDS-PAGE 및 Western blot 결과, 칼럼 종류에 따라 순수한 PLD또는 35 kDa의 단백질 불순물만을 포함하는 PLD 정제 분획을 보여 면역친화 칼럼의 높은 항원결합 특이성을 보여주었다. 그러나 수용액상에서 PLD 자체의 구조적 불안정성 때문에 정제 후 PLD의 특이적 활성 및 정제 수율은 낮았다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제40권6호
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• pp.546-550
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• 1997

근류균과 대두의 공생에서 숙주 결합성을 조사하기 위하여 대두종자로 부터 분리한 lectin과 뿌리추출물과의 동일성 여부를 조사한 결과는 다음과 같다. 탈지 대두분으로 부터 분리한 lectin은 크로마토그라피와 전기영동상 단일물질로 분리되었고 백운 및 팔달로 부터 분리한 lectin은 표준 lectin의 항체와 항원-항체 반응을 나타내어 동일한 물질이었다. 종자lectin 및 뿌리추출물 및 뿌리분비물에 대한 화학주성은 RCR 3407, KCTC 2422에서 뿌리분비물에 대한 주성이 가장 높았고 종자 lectin과 뿌리추출물은 비슷한 화학주성을 나타내었다. 대두의 유근으로 부터 분리한 뿌리추출물은 표준 lectin의 항체와 침강선을 형성하여 대두 종자 lectin과 동일한 물질임을 알수 있었으며 뿌리 분비물과는 침강선을 형성치 않았다. 대두와 상호접종군을 형성하는 RCR3407, KCTC2422 및 LPN-101은 대두의 종자 lectin 및 뿌리추출물과 결합하였으나 완두의 lectin과는 결합하지 않았고 대두와 근류형성을 하지않는 LPN-100은 대두의 lectin과 결합하지 않았다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제33권2호
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• pp.75-84
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• 2018

The cryopreservation has been extensively applied in many cells including spermatozoa (semen) during past several decades. Especially, the canine spermatozoa cryopreservation has contributed on generation of progeny of rare/genetically valuable dog breeds, genome resource banking and transportation of male germplasm at a distant place. However, severe and irreversible damages to the spermatozoa during cryopreservation procedures such as the thermal shock (cold shock), formation of intracellular ice crystals, osmotic shock, stress of cryoprotectants and generator of reactive oxygen species (ROS) have been addressed. According as a number of researches have been conducted to overcome these problems and to advance cryopreservation technique, several analytical methods have been employed to evaluate the quality of the fresh or cryopreserved canine spermatozoa in regards to the motility, morphology, integrity of membrane and DNA, mitochondrial activity, ROS generation, binding affinity to oocytes, in vitro fertilization potential and fertility potential by artificial insemination. Because the study designs with certain application of analytical methods are selective and varied depending on each experimental objective and laboratory condition, it is necessary to establish the normal reference data of the fresh or cryopreserved canine spermatozoa for each analytical method to monitor experimental procedure, to translate raw data and to discuss results. Here, we reviewed the recent articles to introduce various analytical methods for the canine spermatozoa as well as to establish the normal reference data for each analytical method in the fresh or cryopreserved canine spermatozoa, based on the results of the previous articles. We hope that this review contributes to the advancement of cryobiology in canine spermatozoa.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제34권4호
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• pp.1025-1029
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• 2013

In the previous paper (Bull. Korean Chem. Soc., 2011, 32, 2997), the hybrid molecules between ${\alpha}$-lipoic acid (ALA) and polyphenols (PPs) connected with neutral 2-(2-aminoethoxy)ethanol linker (linker-1) showed new biological activity such as butyrylcholinesterase (BuChE) inhibition. In order to increase the binding affinity of the hybrid compounds to cholinesterase (ChE), the neutral 2-(2-aminoethoxy)ethanol (linker 1) was switched to the cationic 2-(piperazin-1-yl)ethanol linker (linker 2). The $IC_{50}$ values of the linker-2 hybrid molecules for BuChE inhibition were lower than those of linker-1 hybrid molecules (except 9-2) and they also had the same great selectivity for BuChE over AChE (> 800 fold) as linker-1 hybrid molecules. ALA-acetyl caffeic acid (10-2, ALA-AcCA) was shown as an effective inhibitor of BuChE ($IC_{50}=0.44{\pm}0.24{\mu}M$). A kinetic study using 7-2 showed that it is the same mixed type inhibition as 7-1. Its inhibition constant (Ki) to BuChE is $4.3{\pm}0.09{\mu}M$.

• Applied Biological Chemistry
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• 제38권5호
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• pp.403-407
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• 1995

아밀로오스 함량이 높은 옥수수전분을 전분겔 제조에 이용하고자 고아밀로오스 옥수수전분과 99% 메탄올로 탈지한 전분의 이화학적 특성과 호화특성을 알아보았다. 전분입자의 모양은 둥근형이었고 탈지시모양의 변화는 없었으며 선 회절도에 의한 전분의 결정형은 모두 B형이었고 결정도의 변화는 없었다. 요드친화력은 51.6%로, 탈지시 71.3%로 증가하였으며 총지방질 함량은 감소하였다. $80^{\circ}C$에서의 팽윤력과 용해도는 탈지에 의해 큰 차이가 없었으며 물결합능력은 104.6%에서 탈지시 117.3%로 증가하였다. 온도에 따른 용해성 탄수화물과 용출 아밀로오스의 함량은 $110^{\circ}C$이상에서 급격히 증가하였으며 탈지전분이 생전분에 비해 용출되는 양이 많았다. 알칼리의 농도에 따른 점도 변화는 0.3N NaOH 이상의 농도에서 증가되었으며 광투과도는 0.4N NaOH용액에서 증가를 보여 보통전분보다는 열호화 뿐만 아니라 알칼리에 의한 호화도 잘 일어나지 않았다. DSC에 의한 호화 endotherm은 단일피크가 아니고 폭넓은 두 개의 피크를 보였는데 탈지하면 높은 온도의 피크가 더 커졌으며 엔탈피는 0.62cal/g으로 낮았고 탈지에 의한 차이는 없었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제24권4호
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• pp.483-488
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• 2014

In order to improve the expression of heat-resistant xylanase XYNB from Aspergillus niger SCTCC 400264, XynB has been cloned into Pichia pastoris secretary vector pPIC9K. The XynB production of recombinant P. pastoris was four times that of E. coli, and the $V_{max}$ and specific activity of XynB reached $2,547.7{\mu}mol/mg$ and 4,757 U/mg, respectively. XynB still had 74% residual enzyme activity after 30 min of heat treatment at $80^{\circ}C$. From the van der Waals force analysis of XYNB (ACN89393 and AAS67299), there is one more oxygen radical in AAS67299 in their catalytic site, indicating that the local cavity is much more free, and it is more optimal for substrate binding, affinity reaction, and proton transfer, etc, and eventually increasing enzyme activity. The H-bonds analysis of XYNB indicated that there are two more H-bonds in the 33rd Ser of XYNB (AAS67299) than in the 33rd Ala(ACN89393 ), and two H-bonds between Ser70 and Asp67.

• 한국식품과학회지
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• 제27권4호
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• pp.532-536
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• 1995

저장 중에 수분활성이 전분의 이화학적 성질에 미치는 영향을 알아보기 위해 수분활성도(0.32, 0.48, 0.75, 0.89)로 조절된 데시케이터에 고구마 전분을 넣고 $40^{\circ}C$ 항온기에서 5, 15, 30일간 저장한 다음 이화학적 특성을 비교하였다. 입자의 모양이나 형태는 변화가 없었고, 결정형은 Ca형으로 변하지 않았다. 수분활성이 높을수록, 저장기간이 길어질수록 수분함량과 물결합능력은 증가하였고, 요오드 친화력과 $80^{\circ}C$에서의 팽윤력은 감소하였다. 아밀로그라프에 의한 호화 양상은 저장 15일에는 뚜렷한 차이를 보이지 않았으나, 저장 30일에는 수분활성이 높을수록 $50^{\circ}C$ 냉각점도, consistency와 setback이 증가하였다.

• BMB Reports
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• 제41권11호
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• pp.814-819
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• 2008

Interleukin-32 (IL-32) induces a variety of proinflammatory cytokines and chemokines. The IL-32 transcript was reported originally in activated T cells; subsequently, it was demonstrated to be abundantly expressed in epithelial and endothelial cells upon stimulation with inflammatory cytokines. IL-32 is regulated robustly by other major proinflammatory cytokines, thereby suggesting that IL-32 is crucial to inflammation and immune responses. Recently, an IL-32$\alpha$-affinity column was employed in order to isolate an IL-32 binding protein, neutrophil proteinase 3 (PR3). Proteinase 3 processes a variety of inflammatory cytokines, including TNF$\alpha$, IL-$1{\beta}$, IL-8, and IL-32, thereby enhancing their biological activities. In the current study, we designed four PR3-cleaved IL-32 separate domains, identified by potential PR3 cleavage sites in the IL-32$\alpha$ and $\gamma$ polypeptides. The separate domains of the IL-32 isoforms $\alpha$ and $\gamma$ were more active than the intrinsic $\alpha$ and $\gamma$ isoforms. Interestingly, the N-terminal IL-32 isoform $\gamma$ separate domain evidenced the highest levels of biological activity among the IL-32 separate domains.

• 한국식물학회:학술대회논문집
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• 한국식물학회 1996년도 식물학심포지움 식물호르몬과 신호전달
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• pp.68-78
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• 1996

Two types of immunoloigcal probes, anti-ABBP Abs, have been developed. The purified ABBP from ABA-C1-BSA-sepharose 4B column was identified by PAGE and appeared in one band of about 56KD, as well as showed a specific binding ability and a high affinity for ABA (Kd2.0$\times$10-9 mol/L). Unexpectedly, the existence of rRNA with a length of around 300 nucleotides could be found, when the ABBP was digested with proteinase K and identified by eletrophorsis on an agarose gel (1%). As a result, about 120 cDNA clones coding maize 17s RNA and only one cDNA clone coding ABBP (24cDNA) were obtained from 200,000 seperated phage plaques by the anti-ABBP pAbs. 24cDNA had 1075bp and contained an open reading frame coding 254 amino acids. The anti-idiotypic Ab raised against an ABA MAb showed the ability of either mimicking ABA or competing with ABA. The localization of ABBPs in plant cell was investigated.

• 생명과학회지
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• 제25권4호
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• pp.385-389
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• 2015

선행연구에서 카스파제-3 효소가 DEVD 기질을 완전히 절단하는 반면 IETD 기질은 DEVD의 약 50%정도만을 부분적으로 분해한다는 사실을 보고하였다. 본 연구에서는 정제된 폴리-단백질이 카스파제-3 단백질 분해효소의 기질에 따른 차별적인 분해활성에 의해 프로세싱 되는 양상을 분석하였다. 모델 단백질로서 GST, MBP, RFP 세 종류의 단백질을 DEVD 및 IETD 펩타이드로 연결시킨 폴리-단백질을 제작하였으며, 폴리-단백질은C-말단에 6개의 히스티딘 태그가 결합되도록 클로닝 되었다. IMAC 크로마토그래피를 이용하여 분리 및 정제된 재조합 단백질은 SDS-PAGE 분석을 통해 분자량이 약 93 kDa으로 나타났으며, 카스파제-3 효소의 처리에 의해 각각 MBP:RFP, MBP 그리고 GST 3종류의 단백질 절편으로 절단 및 분리되었다. 이 연구를 통해 단백질 분해효소와 기질 간의 반응성의 차이를 이용하여 폴리-단백질을 정량적으로 프로세싱 할 수 있다는 예를 보여주었다.