The evidences that Lam B protein of E. coli is used as a receptor for infections of bacteriophage N4 as well as bacteriophage lambda were obtained from the following experimental results. First, all of the isolated lambda resistant dlones possessing foreign DNA fragments in the plasmids were also resistant to bacteriophage N4, but not to bacteriophage $\phi$ 80, T4 and T7. Second, when the plasmid DNA was treated with various restriction enzymes and ligated to delete the total or a portion of the foreign DNA fragments, the deleted plasmids lost the resistant activities to lambda and N4, simultaneously. Third, after amplification of Lam B protein about 200 times by inducing the protein using maltose as a sole carbon source, the host E. coli became sensitive to both lambda and N4.
김치로부터 분리한 Lactobacillus plantarum bacteriophage SC 921은 M.O.I가 0.2일 경우 용균효과가 빠르게 진행됨을 알 수 있었고, SDS-PAGE를 실시하여 phage particle protein을 조사해 본 결과 4개의 major protein으로 구성되어 있는데 이들은 각각 48, 34, 32, 29 kDa으로 구성되어 있다. Exo III로 30분간 반응시킨 후 S1 nuclease를 처리하여 DNA의 형태를 조사해 본 결과 intact DNA는 linear form의 double strand를 유전전달 물질로 가지고 있었다. 제한효소에 대한 절단 효과를 조사한 결과, Sma I에 대해서 1개, Xba I, Cla I, Kpn I, EcoRI에 대해서 각각 2, 4, 5, 6개의 절단부위를 가지고 있으며, Hind III에 대해서는 절단부위가 매우 많은 것을 알 수 있었다. Hind III를 이용하여 intact DNA의 genome size를 측정해본 결과 약 66.5 kbp정도였다. 위의 실험결과와 restriction enzyme mapping을 통해 기존에 알려진 bacteriophage B2와 비교해본 결과 숙주 균주는 같으나 단백질적인 구조나 유전전달물질로 본 구조는 서로 다름을 알 수 있었다.
Endolysins are bacteriophage-derived enzymes that hydrolyze the peptidoglycan of host bacteria. Endolysins are considered to be promising tools for the control of pathogenic bacteria. LysB4 is an endolysin produced by Bacillus cereus-infecting bacteriophage B4, and consists of an N-terminal enzymatic active domain (EAD) and a C-terminal cell wall binding domain (CBD). LysB4 was discovered for the first time as an L-alanoyl-D-glutamate endopeptidase with the ability to breakdown the peptidoglycan among B. cereus-infecting phages. To understand the activity of LysB4 at the molecular level, this study determined the X-ray crystal structure of the LysB4 EAD, using the full-length LysB4 endolysin. The LysB4 EAD has an active site that is typical of LAS-type enzymes, where $Zn^{2+}$ is tetrahedrally coordinated by three amino acid residues and one water molecule. Mutational studies identified essential residues that are involved in lytic activity. Based on the structural and biochemical information about LysB4, we suggest a ligand-docking model and a putative endopeptidase mechanism for the LysB4 EAD. These suggestions add insight into the molecular mechanism of the endolysin LysB4 in B. cereus-infecting phages.
Park, Ga Young;Lee, Hye Min;Yu, Hyun Jin;Son, Jee Soo;Park, Sang Joon;Song, Kyoung Seob
Genes and Genomics
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제40권12호
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pp.1383-1388
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2018
The development of therapeutic bacteriophages will provide several benefits based on an understanding the basic physiological dynamics of phage and bacteria interactions for therapeutic use in light of the results of antibiotic abuse. However, studies on bacteriophage therapeutics against microbes are very limited, because of lack of phage stability and an incomplete understanding of the physiological intracellular mechanisms of phage. The major objective of this investigation was to provide opportunity for development of a novel therapeutic treatment to control respiratory diseases in swine. The cytokine array system was used to identify the secreted cytokines/chemokines after Bordetella bronchiseptica infection into swine nasal turbinate cells (PT-K75). We also performed the real-time quantitative PCR method to investigate the gene expression regulated by B. bronchiseptica infection or bacteriophage treatment. We found that B. bronchiseptica infection of PT-K75 induces secretion of many cytokines/chemokines to regulate airway inflammation. Of them, secretion and expression of IL-$1{\beta}$ and IL-6 are increased in a dose-dependent manner. Interestingly, membrane-bound mucin production via expression of the Muc1 gene is increased in B. bronchiseptica-infected PT-K75 cells. However, cytokine production and Muc1 gene expression are dramatically inhibited by treatment with a specific B. bronchiseptica bacteriophage (Bor-BRP-1). The regulation of cytokine profiles in B. bronchiseptica-induced inflammation by B. bronchiseptica bacteriophage is essential for avoiding inappropriate inflammatory responses. The ability of bacteriophages to downregulate the immune response by inhibiting bacterial infection emphasizes the possibility of bacteriophage-based therapies as a novel anti-inflammatory therapeutic strategy in swine respiratory tracts.
The present study investigated the effects of dietary Edwardsiella tarda (E. tarda) specific bacteriophage (phage) and Bacillus subtilis (B. subtilis) mixture on innate immune responses and antibacterial activity of Nile tilapia, Oreochromis niloticus. In a dietary experiment, tilapia were fed the control diet (C), a phage-only supplemented diet (P), a B. subtilis only supplemented diet (B), or a B. subtilis and phage mixed diet (B+P). A respiratory burst and significant increase in lysozyme activity (P<0.05) were noted in the B+P group, as compared to other groups after 4 days of feeding. The B group showed a significant (P<0.05) increase in respiratory burst and lysozyme activity versus the C and P groups, whereas no significant increases (P<0.05) were observed in the P and C groups. $ACH_{50}$ was significantly up-regulated in the B+P group versus other groups after 8 days of feeding (P<0.05). In vivo antibacterial activity was significantly enhanced in the B+P fed group, as compared to other groups (P<0.05) after 7 days of E. tarda challenge. A significant (P<0.05) increase in antibacterial activity was seen in the B group, as compared to C or P groups after 14 days of feeding. These results suggest that a B. subtilis and phage mixture could be utilized as an alternative to antibiotics in the control of fish diseases caused by E. tarda.
(1) 한국각지에서 분리한 수도백엽고병균 30균주를 일본의 4계통의 Bacteriophage를 공시하여 분류하여 본 결과 A' 및 B계통의 다음 2종류로 분류하였다. A' 계통 $OP_1$ 및 $OP_2$에 감수성이나 $OP_1h$, $OP_1h_2$에는 저항성이었다. B계통 : $OP_1h$, $OP_1h_2$ 및 $OP_2$ 감수성이나 $OP_1$에 저항성이었다. A'계통은 $OP_1_2$에 저항성이나 일본의 A 계통은 $OP_1h_2$에도 감수성이었다는 점이 상이하였다. (2) A' 계통균이 국내에 가장 널리 분포하고 있었으며, 계통간의 지역별분포상황은A'계통균이 경기이남에 않았으나 B 계통균은 수원 및 그 이북지방에 분포하고 있었다. (3) 동일품종간에 있어 균의 계통분포는 균일성이 없었다.
본 연구는 bacteriophage의 급여가 육계의 생산성, 영양소 소화율, 혈액 특성, 장기 무게 및 분내 미생물 조성에 미치는 영향을 알아보기 위해 시험을 실시하였다. 사양 시험은 1일령 ROSS 308 (♂, ♀) 340수 공시하였고, 시험 개시 체중은 $41.71{\pm}0.16$ g으로 31일 간 실시하였다. 시험 설계는 1) CON, basal diet, 2) SE05, CON+bacteriophage SE 0.05%, 3) SE10, CON+bacteriophage SE 0.10% 및 4) SE15, CON+bacteriophage SE 0.15%로 4개 처리를 하여 처리당 5반복, 반복당 17수씩 완전임의 배치하였다. 1~14일령의 생산성에 있어서는 처리구간 유의적 차이가 없었다. 그러나 15~31일령에 있어서는 증체량에서 SE15 처리구가 CON 처리구보다 높게 나타났고, 전체 시험 기간 동안의 증체량에 있어서도 SE10 및 SE15 처리구가 CON 처리구보다 유의적으로 높게 나타났다. 영양소 소화율에서는 처리구 간 차이를 나타내지 않았고, 혈액 특성에 있어서도 처리구 간 차이를 나타내지 않았다. 도체 특성 중 가슴육의 보수력 있어서는 SE15 처리구가 CON 처리구보다 유의적으로 높게 나타났고, 장기 무게 중 F낭의 무게가 bacteriophage를 급여한 처리구에서 유의적으로 높게 나타났다. 분내 미생물 조성에 있어서는 처리구간 유의적 차이를 나타내지 않았다. 결론적으로, 본 시험의 결과 육계에 사료 내 bacteriophage를 첨가 시 증체량을 향상시키고, F낭의 무게를 증가시킨다. 또한 0.15% 급여시 가슴육의 보수력이 증가하는 효과를 나타내었다. 이와같은 결과는 bacteriophage의 첨가를 통하여 생산성과 면역력을 향상시켜주고 육내 보수력을 개선하여 보다 고품질의 계육을 생산할 수 있을 것으로 판단된다.
Bacillu circulans F-2를 포함한 B.circulans의 prophage와 bacteriocin을 검출하기 위하여, mitomycin C를 처리하고 전자현미경상, plaque 형성능(plaque-forming activity), 세균세포살균능(killing activtiy)을 실험했다. killing activity 양성균으로부터 서당밀도균배원심(sucrose gradient centrifugation)을 통해 bacteriophage-like particle의 존재를 확인하였다. 이들 입자들은 형태학적으로 phage tail 또는 T4 phage와 닮은 구조를 가지고 있었다.
본 연구는 박테리오파지의 급여가 육계의 생산성, 영양소 소화율, 혈액 특성, 장기무게 및 분내 미생물 조성에 미치는 영향을 알아보기 위해 시험을 실시하였다. 사양 시험은 1일령 ROSS 308(♂, ♀) 340수 공시하였고, 시험 개시 체중은 $41.14{\pm}0.17g$으로 31일간 실시하였다. 시험 설계는 1) CON(basal diet), 2) CP05(CON + bacteriophage CP 0.05%), 3)CP10(CON + bacteriophage CP 0.10%), 4) CP15(CON + bacteriophage CP 0.15%)로 4개 처리를 하여 처리당 5반복, 반복당 17수씩 완전 임의 배치하였다. 1~14일령의 생산성에 있어서는 처리구 간 유의적 차이가 없었다. 그러나 15~31일령에 있어서는 증체량 및 사료 섭취량에서 CP15 처리구가 CON 처리구보다 높게 나타났고, 전체 시험 기간 동안의 증체량에 있어서도 CP10 및 CP15 처리구가 CON 처리구보다 유의적으로 높게 나타났다. 영양소 소화율 및 혈액 특성에 있어서 처리구 간 차이를 나타내지 않았다. 도체 특성 중 가슴육의 보수력 있어서 박테리오파지를 첨가한 처리구가 CON 처리구보다 유의적으로 높게 나타났고, 장기 무게 중 F낭의 무게에 있어 CP05 처리구가 CON 처리구에 비해 유의적으로 높게 나타났다. 분내 미생물 조성에 있어서는 처리구간 유의적 차이를 나타내지 않았다. 결론적으로, 육계 사료 내박테리오파지를 첨가 시 증체량을 향상시키고, F낭의 무게를 증가시키며, 가슴육의 보수력이 증가하는 효과를 나타내었다.
Colibacillosis in pigs remain a major swine industry bruden worldwide. Although some progress has been made in treating collibacillosis in pigs by using biosecurity and antimicrobials, it still remain a considerable problem. The use of host-specific bateriophages as a biocontrol is one possible alternative. The purpose of this study was to evaluate the effect of bacteriophage against enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) K88 infection in piglets. Twenty-eight piglets were randomly divided into four groups and each group was allocated with 7 pigs. Group B, C and D were inoculated with 5 ml of ETEC K88 ($1{\times}10^8$ CFU/ml) per head of piglet via oral. Group C and D were fed with bacteriophages (Group C, $1.0{\times}10^6$ PFU/g; Group D, $1.0{\times}10^8$ PFU/g; CJ CheilJedang Corp., Korea) orally as treatment. In piglets administrated bacteriophages and challenged with ETEC K88 (Group C and D), Clinical signs and the growth performance were improved and antibody titers were maintained low level compared with piglets challenged with ETEC K88 (Group B, P<0.05). Group B were shown high pH in the alimentary tracts compared with other piglets (P<0.05). In quantitative analysis by real-time PCR, the results of Group C and D were lower than those Group B in faecal and intestinal samples (P<0.05). Severe villus atrophy and crypt hyperplasia were observed in Group B consequently V/C ratio increased, compared with other piglets. These results indicate that feeding with bacteriophage has effect to prevent ETEC K88 infection in piglets and suggest that use of bacteriophage can be considered a valid antibiotic alternative.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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