An endophytic bacterial strain was isolated from kimchi, a Korean traditional fermented Brassica campestris and identified as Bacillus subtilis MJMP2 based on the 16S rRNA sequence. This strain showed strong antagonistic activity against Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo) KACC10331, the pathogen of bacterial rice blight disease, as well as activity against some other rice phytopathogenic fungi. The active compound was purified through size-exclusion chromatography and preparative High-performance liquid chromatography. The molecular weight was determined as m/z 1043 by mass spectroscopy, which is identical to that of iturin A. Furthermore, a crude extract from the culture supernatant of Bacillus subtilis MJMP2 showed inhibitory activity against rice blight disease in both a rice leaf explant assay and a pot assay. The crude extract also enhanced the length of roots of Arabidopsis thaliana. These results suggest that the strain Bacillus subtilis MJMP2 could be used as a biological agent to control rice blight disease.
Host-pathogen interaction in rice bacterial blight pathosystem was analyzed for a better understanding of their relationship and recognition of stable pathogenicity among the populations of Xanthomonas oryzae pv. oryzae. A total number of 52 bacterial strains isolated from diseased leaf samples collected from 12 rice growing states and one Union Territory of India, were inoculated on 16 rice varieties, each possessing known genes for resistance. Analysis of variance revealed that the host genotypes(G) accounted for largest(78.4%) proportion of the total sum of squares(SS), followed by 16.5% due to the pathogen isolates(I) and 5.1% due to the $I{\times}G$ interactions. Application of the Additive Main effects and Multiplicative Interaction(AMMI) model revealed that the first two interaction principal component axes(IPCA) accounted for 66.8% and 21.5% of the interaction SS, respectively. The biplot generated using the isolate and genotypic scores of the first two IPCAs revealed groups of host genotypes and pathogen isolates falling into four sectors. A group of five isolates with high virulence, high absolute IPCA-1 scores, moderate IPCA-2 scores, low AMMI stability index '$D_i$' values and minimal deviations from additive main effects displayed in AMMI biplot as well as response plot, were identified as possessing stable pathogenicity across 16 host genotypes. The largest group of 27 isolates with low virulence, small IPCA-1 as well as IPCA-2 scores, low $D_i$ values and minimal deviations from additive main effect predictions, possessed stable pathogenicity for low virulence. The AMMI analysis and biplot display facilitated in a better understanding of the host-pathogen interaction, adaptability of pathogen isolates to specific host genotypes, identification of isolates showing stable pathogenicity and most discriminating host genotypes, which could be useful in location specific breeding programs aiming at deployment of resistant host genotypes in bacterial blight disease control strategies.
Ranjani, Pandurangan;Gowthami, Yaram;Gnanamanickam, Samuel S;Palani, Perumal
Microbiology and Biotechnology Letters
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v.46
no.4
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pp.346-359
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2018
Xanthomonas oryzae, a bacterial pathogen causing leaf blight disease (BLB) in rice, can cause widespread disease and has caused epidemics globally, resulting in severe crop losses of 50% in Asia. The pathogen is seed-borne and is transmitted through seeds. Thus, control of BLB requires the elimination of the pathogen from seeds. Concern about environment-friendly organic production has spurred improvements in a variety of biological disease control methods, including the use of bacteriophages, against bacterial plant pathogens. The present study explored the potential of bacteriophages isolated from diseased plant leaves and soil samples in killing the bacterial pathogen in rice seeds. Eight different phages were isolated and evaluated for their bacteriolytic activity against different pathogenic X. oryzae strains. Of these, a phage designated ${\varphi}XOF4$ killed all the pathogenic X. oryzae strains and showed the broadest host range. Transmission electron microscopy of ${\varphi}XOF4$ revealed it to be a tailed phage with an icosahedral head. The virus was assigned to the family Siphoviridae, order Caudovirales. Seedlings raised from the seeds treated with $1{\times}10^8pfu/ml$ of ${\varphi}XOF4$ phage displayed reduced incidence of BLB disease and complete bacterial growth inhibition. The findings indicate the potential of the ${\varphi}XOF4$ phage as a potential biological control agent against BLB disease in rice.
Accurate and rapid detection of bacterial plant pathogen is the first step toward disease management and prevention of pathogen spread. Bacterial plant pathogens Clavibacter michiganensis subsp. nebraskensis (Cmn), Pantoea stewartii subsp. stewartii (Pss), and Rathayibacter tritici (Rt) cause Goss's bacterial wilt and blight of maize, Stewart's wilt of maize and spike blight of wheat and barley, respectively. The bacterial diseases are not globally distributed and not present in Korea. This study adopted comparative genomics approach and aimed to develop specific primer pairs to detect these three bacterial pathogens. Genome comparison among target pathogens and their closely related bacterial species generated 15-20 candidate primer pairs per bacterial pathogen. The primer pairs were assessed by a conventional PCR for specificity against 33 species of Clavibacter, Pantoea, Rathayibacter, Pectobacterium, Curtobacterium. The investigation for specificity and sensitivity of the primer pairs allowed final selection of one or two primer pairs per bacterial pathogens. In our assay condition, a detection limit of Pss and Cmn was $2pg/{\mu}l$ of genomic DNA per PCR reaction, while the detection limit for Rt primers was higher. The selected primers could also detect bacterial cells up to $8.8{\times}10^3cfu$ to $7.84{\times}10^4cfu$ per gram of grain seeds artificially infected with corresponding bacterial pathogens. The primer pairs and PCR assay developed in this study provide an accurate and rapid detection method for three bacterial pathogens of grains, which can be used to investigate bacteria contamination in grain seeds and to ultimately prevent pathogen dissemination over countries.
Pedraza, Luz Adriana;Bautista, Jessica;Uribe-Velez, Daniel
The Plant Pathology Journal
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v.34
no.5
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pp.393-402
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2018
Rice world production is affected due to the growing impact of diseases such as bacterial panicle blight, produced by Burkholderia glumae. The pathogen-induced symptoms include seedling rot, grain rot and leafsheath browning in rice plants. It is currently recognized the entrance of this pathogen to the plant, from infected seeds and from environmental sources of the microorganism. However, it is still not fully elucidated the dynamics and permanence of the pathogen in the plant, from its entry until the development of disease symptoms in seedlings or panicles. In this work it was evaluated the infection of B. glumae rice plants, starting from inoculated seeds and substrates, and its subsequent monitoring after infection. Various organs of the plant during the vegetative stage and until the beginning of the reproductive stage, were evaluated. In both inoculation models, the bacteria was maintained in the plant as an endophyte between $1{\times}10^1$ and $1{\times}10^5cfu$ of B. $glumae.g^{-1}$ of plant throughout the vegetative stage. An increase of bacterial population towards initiation of the panicle was observed, and in the maturity of the grain, an endophyte population was identified in the flag leaf at $1{\times}10^6cfu$ of B. $glumae.g^{-1}$ fresh weight of rice plant, conducting towards the symptoms of bacterial panicle blight. The results found, suggest that B. glumae in rice plants developed from infected seeds or from the substrate, can colonize seedlings, establishing and maintaining a bacterial population over time, using rice plants as habitat to survive endophyticly until formation of bacterial panicle blight symptoms.
Many of the fungicides and antibiotics currently available against plant pathogens are of limited use due to the emergence of resistant strains. In this study, we examined the effects of diphenyleneiodonium chloride (DPIC), an inhibitor of the superoxide producing enzyme NADPH oxidase, against fungal and bacterial plant pathogens. We found that DPIC inhibits fungal spore germination and bacterial cell proliferation. In addition, we demonstrated the potent antibacterial activity of DPIC using rice heads infected with the bacterial pathogen Burkholderia glumae which causes bacterial panicle blight (BPB). We found that treatment with DPIC reduced BPB when applied during the initial flowering stage of the rice heads. These results suggest that DPIC could serve as a new and useful antimicrobial agent in agriculture.
Ooi, Ying Shing;Nor, Nik M.I. Mohamed;Furusawa, Go;Tharek, Munirah;Ghazali, Amir H.
The Plant Pathology Journal
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v.38
no.5
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pp.490-502
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2022
Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo) causes bacterial leaf blight (BLB) disease in rice (Oryza sativa L.) and it is among the most destructive pathogen responsible for severe yield losses. Potential bacterial biocontrol agents (BCAs) with plant growth promotion (PGP) abilities can be applied to better manage the BLB disease and increase crop yield, compared to current conventional practices. Thus, this study aimed to isolate, screen, and identify potential BCAs with PGP abilities. Isolation of the BCAs was performed from internal plant tissues and rhizosphere soil of healthy and Xoo-infected rice. A total of 18 bacterial strains were successfully screened for in vitro antagonistic ability against Xoo, siderophore production and PGP potentials. Among the bacterial strains, 3 endophytes, Bacillus sp. strain USML8, Bacillus sp. strain USML9, and Bacillus sp. strain USMR1 which were isolated from diseased plants harbored the BCA traits and significantly reduced leaf blight severity of rice. Simultaneously, the endophytic BCAs also possessed plant growth promoting traits and were able to enhance rice growth. Application of the selected endophytes (BCAs-PGP) at the early growth stage of rice exhibited potential in suppressing BLB disease and promoting rice growth.
Xanthomonas axonopodis pv. glycines 8ra produces a bacteriocin called glycinecinA, which specifically inhibits the growth of bacteria belonging to Xanthomonas species. GlycinecinA was produced by culturing Escherichia coli DH5 containing biosynthetic genes for glycinecinA, and was tested for its control effect against X. vesicatoria on red pepper and X. oryzae pv. oryzae on rice. The bacteriocin activity was much higher in the cell extract than in the supernatant. It reached a maximum level at the stationary phase, ws maintained up to 2 months at room temperature and approximately 10 months at $4^{\circ}$. The optimum concentration of glycinecinA for the control in the greenhouse and in the field was 12,800 AU/ml. In this study, the activity of glycinecinA on rice and red pepper leaves continued for 7-8 days, during which the pathogen populations remained at low levels. Bacterial leaf spot of red pepper and bacterial leaf blight of rice were significantly reduced by the bacteriocin treatments. The control efficacy was as high as, or even higher than, the chemical treatment of copper hydroxide. These results suggest that the bacteriocin is a potential control agent for bacterial diseases.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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