본 연구에서는 식품용 프로바이토틱 생균인 비스루트균의 인공위액과 인공담즙산에 대한 내성, 효소활성, 항생물질과 알콜에 대한 내성, 그리고 병원성 세균에 대한 항균기작 등 주요 생균제 특성에 대하여 검토하였다. 인공위액 내성 실험에서는 pH 2.5로 조성된 인공위액을 통과한 생존율이 매우 높았으며 균수가 $2.4{\times}10^7\;CFU/mL$의 수준이었다. 인공담즙산에 대한 내성에서는 pH 2.5의 인공위액을 통과한 비스루트균의 인공담즙산의 내성은 oxgall이 함유되지 않은 대조구$(1.6{\times}10^7\;CFU/mL)$에 비해 오히려 균수가 증가되었으며, 최종적인 생존수가 $3.3{\times}10^7\;CFU/mL$ 으로 확인됨으로써 프로바이오틱 생균으로 매우 우수한 특성을 가지고 있었다. 효소활성을 측정한 결과, 비스루트균은 발암효소인 ${\beta}-glucuronidase$ 및 ${\beta}-glucosidase$ 의 활성이 나타나지 않았다. 또한 항생물질에 대한 내성은 rifamycin $10\;{\mu}g/mL$ 이상의 농도에 대해서는 생육 저해를 보였으나, $nisin(100\;{\mu}g/mL)$, $streptomycin(20\;{\mu}g/mL)$, $tetracycline(20\;{\mu}g/mL)$에 대해 내성을 보였다. 그리고 비스루트균의 알콜에 대한 내성은 4%의 농도에서 저해를 받았으며, 8%의 농도에서 더욱 저해를 받으나, $8{\sim}32%$ 범위의 농도에서는 균수가 더욱 크게 감소를 하지는 않았다. Listeria에 대한 향균기작을 측정한 결과, 24시간이내에 L. monocytogenes ATCC 19111을 완전히 저해를 하였으며, bactericidal한 양상을 나타내었다. 본 연구를 통해 밝혀진 비스루트균의 프로바이오틱 특성은 기능성 식품의 개발 등 산업적으로 매우 유용하다고 판단된다.
한국의 임상검체와 자연환경에서 분리된 Cryptococcus neoformans 58주에 대한 혈청형과 세포외효소 생성능에 관한 셍물학적 특성을 조사하였다. 환자로부터 분리된 임상균주 51주 중 48주는 혈청형 A (94.1%) 였으며 2주는 혈청형 B (3.92%),그리고 나머지 1주는 혈청형 D (1.96%)였다. 자연환경에서 분리된 7주는 비둘기 분변에서 분리된 것들이며 모두 혈정형 A였다. 모든 균주는 proteinase와 phnospholipase를 생성하였고, 또한 API-ZYM system을 이용한 19종류의 효소생성능 시험에서는 alkaline phosphatase, esterase (C4), esterase lipase (C8), leucine arylamidase, acid phosphatase, naphthol-AS-BI-phosphohydrolase, $\alpha$-glucosidase, 그리고 $\beta$-glucosidase를 생성하였으나, N-acetyl-$\beta$-glucosarninidase는 39주 (67.2%)에서만 생성하였다. 혈청형 B로 동정된 2주와 혈청형 A로 동정된 균주중 1주는$\beta$-glucuronidase를 생성하였다. 본 연구에 사용된 총21종류의 효소 생성능 시험을 기초로 하여 생물형을 구분하였는데, 모두 4가지의 유형을 나타내었고, 또한 임상과 환경균주에서 혈정형과 생물형 특성간의 유의한 상관성를 나타내었다.
Choi, In Young;Kim, Jinhee;Kim, Su-Hyeon;Ban, O-Hyun;Yang, Jungwoo;Park, Mi-Kyung
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제31권7호
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pp.949-955
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2021
Previously, our research group isolated Bifidobacterium breve IDCC4401 from infant feces as a potential probiotic. For this study, we evaluated the safety of B. breve IDCC4401 using genomic and phenotypic analyses. Whole genome sequencing was performed to identify genomic characteristics and investigate the potential presence of genes encoding virulence, antibiotic resistance, and mobile genetic elements. Phenotypic analyses including antibiotic susceptibility, enzyme activity, production of biogenic amines (BAs), and proportion of D-/L-lactate were evaluated using E-test, API ZYM test, high-performance liquid chromatography (HPLC), and D-/L-lactic acid assay respectively. The genome of B. breve IDCC4401 consists of 2,426,499 bp with a GC content of 58.70% and 2,016 coding regions. Confirmation of the genome as B. breve was provided by its 98.93% similarity with B. breve DSM20213. Furthermore, B. breve IDCC4401 genes encoding virulence and antibiotic resistance were not identified. Although B. breve IDCC4401 showed antibiotic resistance against vancomycin, we confirmed that this was an intrinsic feature since the antibiotic resistance gene was not present. B. breve IDCC4401 showed leucine arylamidase, cystine arylamidase, α-galactosidase, β-galactosidase, and α-glucosidase activities, whereas it did not show production of harmful enzymes such as β-glucosidase and β-glucuronidase. In addition, B. breve IDCC4401 did not produce any tyramine, histamine, putrescine, cadaverine, or 2-phenethylamine, which are frequently detected BAs during fermentation. B. breve IDCC4401 produced 95.08% of L-lactate and 4.92% of D-lactate. Therefore, our findings demonstrate the safety of B. breve IDCC 4401 as a potential probiotic for use in the food industry.
An efficient transient expression system has been developed and characterized for the production of foreign genes in seedlings. The seedlings can be easily produced from commercial seeds used for vegetable sprouts. In principal, a chemical abrasive was employed to generate wounds in seedlings prior to vacuum-infiltration with Agrobacterium tumefaciens bearing the target gene. This optimized chemical wounding-assisted agro-infiltration process resulted in up to 15-fold increase in $\beta$-glucuronidase (GUS) enzyme activity. This procedure has been used efficiently to express hepatitis B surface antigen (HBsAg) protein in a transient mode. Therefore, seedlings with proper wounds can be suggested as a convenient tool for the production of useful recombinant proteins.
Osteoblast(OBL) cells were isolated from ICR Swiss neonatal mouse calvarial tissues and cultured in a CO2 incubator with minimum essential medium (MEM) containing 0.25g BSA. The cells were cultured for 7 days and were treated with bovine parathyroid hormone (bPTH, 1-34) and calcitonin(CT). Enzyme activities related to mineral metabolism and other biochemical actions within the bone cells including protein phosphorylation were investigated. In other experiments using cultured calvarial bone tissues, hormones were treated for 24, 48, 72 or 96 hours. The activities of $\beta$-glucuronidase enzymes involved in bone collagen synthesis and mineral deposits were increased by 8% with bPTH and were inhibited with CT treatment, while those were 67% increase treated with bPTH and CT together. On the other hand, alkaline phophatase(AP) activities were inhibited by PTH hormone at all the time courses observed. Protein phosphorylation reaction in OBL was mediated by bPTH, cAMP and ionized Ca. Phosphorylation was observed in different cell fractions including homogenate, membrane and cytosol. The number of proteins phosphorylated by PTH, cAMP, and Ca were 10, 5, and 9, respectively. Most of the protein kinases(PKs) were existed in cytosolic compartment. In membrane fractions, two bPTH-dependent-PKs (70K, 50K Da) were observed of which 70K Da protein was also Ca-dependent. Most of the cAMP-dependent PKs were regulated via bPTH. 70K, 50K, 5K, 19K, 16K, 10.5K phosphoproteins regulated by Ca share the same pathways as those by bPTH-dependent proteins. Ca seems to regulate PK activities differently from cAMP.
Ahn, Y.J.;Kim, M.J.;Kawamura, T.;Yamamoto, T.;Fujisawa, T.;Mitsuoka, T.
Journal of Ginseng Research
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제14권2호
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pp.253-264
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1990
The growth responses of a variety of human intestinal bacteria to extracts of Panax ginseng and five other oriental medicinal Araliaceae were elraluattd in vitro and in vivo. The extracts enhanced the growth of Brifidobnnerilrm breve and B. longlim in media with or without carbon sources, suggesting that bifidus factors) might be involved in the phenomenon. This effect was most pronounced with water extract of P. ginseng, the growth of 27 bifidobacteria strains belonging to B adolescentis, B. longum, B. brim and B. infantis being greatly stimurated, whereas seven B. bifidum strains and other bacteria such as clostridia and Escherichin soli had little or no ability to utilise it for growth. Methanol extracts of p. ginseng were found to selectively inhibit growth of various clostridia including bifidobacteria. Paraputrificum, but this effect was not observed on other bacteria including bifidobacteria. The effect of ginseng extract intake (600 mg/day for two weeks) on the faecal microflora, pH, volatile fatty acids, ammonia, putrefactive products, and -glucuronidase, -glucosidase and nitroreductase activities, and on the blood components (triglyceride, total cholesterol and ammonia) were investigated using seven healthy human volunteers. The total concentration of faecal microflora including Bifidnkaderiifm app. during the period of ginseng extract intake %twas significantly unaffected from the preceding and subsequent control peroids. However, the frequency of occurrence of subjects having C. perfringens was significantly decreased. The faecal pH value was also significantly decreased, suggesting that the intake might increase the activity of Bifidobncterium spry. Other biochemical properties in faeces did not changed significantly. The levels of ammonia and triglycerid in blood were decreased with ginseng extract intake. These results may be an indication of at least one of the Pharmacological actions of p. ginseng as an adaptogen.
The aim of the present study was to investigate the antigenotoxic properties of the probiotic Lactobacillus rhamnosus IMC501; DNA damage was induced by one representative food mutagen, 2-amino-1-methyl-6-phenylimidazo[4,5-b]pyridine (PhIP). Mice were treated orally with suspensions of lactobacilli for 10 days before administration of food mutagen. During the treatment, the abundance of lactobacilli in feces, as assessed by qPCR analysis, increased, whereas ${\beta}$-glucuronidase and N-acetyl-${\beta}$-glucosaminidase activities decreased. The extent of DNA damage was measured in colon and liver cells by comet assay. In colonocytes, diet supplementation with IMC501 resulted in a significant inhibition of DNA damage induced by PhIP. The results obtained in this in vitro study suggest that Lactobacillus rhamnosus IMC501 used as a dietary supplement can provide a useful integration of antimutagen food components of the normal diet, which are generally lower than the protective level.
Hong, Joon Ki;Lim, Myung-Ho;Kim, Jin A;Kim, Jung Sun;Lee, Seung Bum;Suh, Eun Jung;Lee, Soo In;Lee, Yeon-Hee
Plant Breeding and Biotechnology
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제2권3호
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pp.289-300
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2014
A tissue-specific and developmentally expressed gene was isolated from Chinese cabbage (Brassica rapa L. ssp. pekinensis), designated BrREF (B. rapa Rubber elongation factor). BrREF transcripts were expressed at high levels in seedlings and at low levels in flower buds and roots. To study the activity of this promoter, the 2.2 kb upstream sequence of BrREF gene was fused to a β-glucuronidase (GUS) reporter gene and was introduced into Arabidopsis thaliana and B. napus by Agrobacterium-mediated transformation. Strong expression of GUS driven by the BrREF promoter was detected in the cotyledons and hypocotyls of transgenic plant seedlings, but GUS expression was weak in roots, excluding the root tips. GUS expression in the cotyledons and hypocotyls decreased dramatically as the seedlings matured and was not detected in the tissues of mature plants. During floral development, GUS expression was observed in immature anthers. These findings suggest that the BrREF promoter can modulate the tissue-specific and developmental expression of gene at the early stages of growth and development.
본 연구는 김치로부터 GABA 생성능이 우수한 젖산균을 분리 및 동정하고, 이 균주의 생리적 특성을 규명하여 상업적으로의 이용가능성을 검토하고자 실시하였다. 이를 위해 MSG 2%가 첨가된 MRS broth에 $37^{\circ}C$에서 18시간 배양한 후 GABA 함량이 $50{\mu}g/mL$ 이상 생산하는 75개의 균주를 1차로 선별하였으며, $90{\mu}g/mL$ 이상 생산하는 5 균주를 2차로 선별하였고, 선발된 5 균주를 MSG 1%, 2% 및 3% 함유된 MRS 배지에 각각 배양한 결과, K74 균주가 최종 선발되었다. K74 균주는 MSG 1%가 첨가된 MRS broth에서 GABA 함량이 $134.52{\mu}g/mL$이었고, MSG 2%와 3%가 첨가된 MRS broth에서GABA 함량이 각각 $212.27{\mu}g/mL$와 $234.63{\mu}g/mL$이었으며, 동정 결과 L. plantarum K74라고 명명되었다. L. plantarum K74의 최적 생장 온도는 $34^{\circ}C$이었으며, pH 4.4에 도달하기까지 18시간이 소요되었다. L. plantarum K74는 또한 답즙산과 산성의 pH에서 모두 우수한 생존력을 나타냈으며, 발암효소인 ${\beta}$-glucuronidase를 생성하지 않고 유당분해효소인 ${\beta}$-galactosidase를 약간 생성하는 것으로 나타났다. 항생제 내성 실험 결과 Kanamycin, Polymyxin B, Streptomycin에 내성을 Novobiocin, Bacitracin, Penicillin-G, Methicillin에감수성을나타냈으며, Escherichia coli와Salmonella typhimurium에 각각 54.9%와 46.3%의 억제 효과를 지니고 있고, Staphyloccous aureus에 대해서는 거의 억제 효과가 없는 것으로 나타났다.
Ahn, Y.J.;Kim, M.J.;Kawamura, T.;Yamamoto, T.;Fujisawa, T.;Mitsuoka, T.
고려인삼학회:학술대회논문집
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고려인삼학회 1990년도 Proceedings of International Symposium on Korean Ginseng, 1990, Seoul, Korea
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pp.111-122
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1990
The growth responses of a variety of human Intestinal bacteria to extracts of Pun(1.vKy'n.ieny and five other oriental medicinal Araliaceae were evaluated in vitro and in vivo. The extracts enhanced the growth of Bifidobncterilim breve and B. longum in Media with or without carbon sources, suggesting the bifid factor (5) might be involved in the phenomenon. This effect was most pronounced with water extract of p. ginseng, the growth of 27 bifidobacteria strains belonging to B. ndolexcentium, H. longlrm, and 1. breve and B. iniuntis being greatly stimurated, whereas seven B. bifidum strains and other bacteria such as clostridia and 5.fcherirhia coli had little or no ability to utilizes it (or growth. Methanol extracts of p, ginseng were found to selectively inhibit growth of various clostridia including C. perfringens and C. Paraputrificum, but this effect was not observed on other bacteria including bifidobacteria. The effect of ginseng extract intake(600 mg/day for two weeks) on the fecal microflora, pH, volatile fatty acids, ammonia, putrefactive products, and -glucuronidase, -glucosidase and nitroreductase activities, and on the blood components (triglyceride, total cholesterol and ammonia) were investigated using seven healthy human volunteers. The total concentration of fecal microflora including Bri'idobucterilim app. during the period of ginseng extract intake was significantly unaffected from the proceeding and sub sequent control periods. However, the frequency of occurrence of subjects having C. perfringens was significantly decreased. The fecal pH value was also significantly decreased, suggesting that the intake might increase the activity of Bifidobacterium spp. Other biochemical properties in faces did not changed significantly. The levels of ammonia and triglycerid in blood were decreased with ginseng extract intake. These results may be an indication of at least one of the pharmacological actions of P ginseng as an adaptogen.
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