본 연구에서는 김치재료 중 존재하는 각종 효소의 특성을 이용한 김치의 품질개선을 위한 기초자료를 제시하고자 몇 가지의 대표적인 가수분해효소와 산화효소의 활성을 조사하였다. 가수분해효소로는 발효원으로 사용되고 균체증식에 필수적인 당 및 아미노산의 생산에 관여하는 amylase와 protease를 연구하였으며, 산화효소로는 이취발생과 vitamin C의 산화에 관여하는 peroxidase 및 ascorbic acid oxidase 활성을 조사하였다. 시료 1 g중 존재하는 효소활성은 ${\alpha}-amylase$의 경우 멸치젓, 고춧가루, 새우젓, 굴에서, ${\beta}-amylase$는 멸치젓, 굴, 무에서 높게 나타났다. Protease의 경우는 멸치젓, 새우젓, 고춧가루에서 높게 나타났으며, peroxidase와 ascorbic acid oxidase는 각각 무, 오이, 파 및 멸치젓, 고춧가루, 새우젓에서 높게 나타나 김치재료중 발효식품인 멸치젓과 새우젓이 전반적으로 높은 가수분해 및 산화활성을 나타내었고, 고춧가루는 가수분해효소 활성이, 무, 오이는 산화효소 활성이 높게 나타났다.
Ascorbate peroxidase catalyze the oxidation of ascorbic acid through the reaction with hydrogen peroxide. Ascorbic acid are utilized as a substrate in oxidative stress. In Candida albieans, ascorbic acid is used as antioxidants, so called D-erythroascorbic acid (EASe). Oxidative stress change concentrations of EASC resulting in interaction with alternative oxidase (AOX).(omitted)
동진벼 유묘 뿌리에 환원제인 ascorbic acid, 신호전달물질인 salicylic acid와 methyl jasmonic acid, 중금속인 $NiCl_2$와 $CuSO_4$ 및 NaCl를 다양한 농도로 처리한 후 항산화효소인 glutathione peroxidase(GPX)의 활성과 동위효소의 패턴 변화를 살펴보았다. Ascorbic acid 처리에 의한 GPX의 총활성은 ascorbic acid 농도 증가에 의존적으로 증가하였으며 이러한 GPX활성 증가는 GPX1 동위효소의 현저한 활성증가에 기인하였다. GPX는 신호전달물질인 salicylic acid와 methyl jasmonic acid에 대하여 서로 다른 반응성을 보였다. GPX의 활성은 0.1 mM salicylic acid에 의해 증가하였다가 이후 감소하였다. 이에 비해 GPX는 methyl jasmonic acid의 농도증가에 의존하여 점진적으로 증가하여 1 mM methyl jasmonic acid에 의하여 약 3배의 활성증가를 보였다. 뿐만 아니라 GPX1 동위효소는 salicylic acid 농도가 증가할수록 활성이 감소한 반면 methyl jasmonic acid 농도가 증가할수록 현저하게 증가하였다. GPX의 총활성은 $NiCl_2$ 농도 증가에 따라 점진적으로 증가되었으나, $CuSO_4$ 처리군의 경우 GPX의 총비활성도는 0.5 mM $CuSO_4$에 의하여 약 2배 증가한 이후 점차 감소하였다. $NiCl_2$와 $CuSO_4$ 처리에 의한 GPX 활성증가도 주로 GPX1 동위효소의 활성증가에 기인하였다. NaCl 처리에 의한 GPX 총활성은 300 mM NaCl 처리군에서 약 1.7배 증가되었다가 이후 감소하였다. 특이하게도 NaCl 농도가 증가함에 따라 GPX2 동위효소 활성이 점차 증가하였다.
$SO_2$에 대한 양버즘나무의 내성을 증대시키고자 uniconazole, sodium benzoate 또는 ascorbic acid를 단용 또는 복합처리한 후 $SO_2$에 의한 가시피해정도, 엽록소함량 및 유리기 제거제로 활성산소의 독성을 중화시킬 수 있는 superoxide dismutase(SOD) 및 peroxidase(POD)의 활성변화를 조사하였다. Uniconazole처리에 의한 $SO_2$ 피해경감 효과는 SOD불활성제인 diethyldithiocarbamate(DDTC)를 다시 처리하므로써 가시피해가 증가하였고 SOD와 POD의 활성도 감소하였다. 유리기 제거제인 sodium benzoate와 ascorbic acid처리는 SOD나 POD 활성에 영향을 주지않으면서 $SO_2$의 피해를 경감시키고, DDTC의 $SO_2$피해증가 효과를 ascorbic acid 처리로 감소시킬 수 있었다. 이상의 결과로 미루어 uniconazole은 식물체내에서 산화방지물질의 역할을 하는 SOD의 활성을 증대시켜 $SO_2$가스의 피해를 경감시키는 효과가 인정되며, ascorbic acid와 sodium benzoate의 내성 증대 효과는 식물체내의 SOD나 POD 활성 증진과는 관계가 없는 것으로 판단된다.
사과의 건조, 가공 중의 갈변을 방지하기 위한 기초 조사로서 후지 사과로부터 추출한 crude peroxidase의 열불활성화와 갈변 저해제의 저해 효과 등을 조사하였다. Peroxidase의 최적 pH와 온도는 p-phenylenediamine과 $H_2O_2$를 기질로 하였을 때 각각 5.5와 $35^{\circ}C$이었고, 열불활성화 반응은 biphasic으로 heat labile fraction의 $E_a$와 Z값은 각각 48.2kcal/mol 과 $11.2^{\circ}C$, heat resistant fraction의 $E_a$와 Z값은 각각 36.3kcal/mol과 $14.9^{\circ}C$이었다. Peroxidase에 의한 갈변은 sodium diethyldithiocarbamate와 potassium metabisulfite는 10mM에서, L-cysteine과 ascorbic acid는 1mM에서 현저하게 저해되었다.
아그배로 부터 아세톤 침전, DEAE-cellulose 칼럼 크로마토그라피, Ultro-AcA 54겔여과의 과정을 거쳐 peroxidase를 분리 정제하고, 그의 특성을 조사하였다. 아그배peroxidase의 반응 최적 pH는 4.5, 반응최적 온도는 $80^{\circ}C$이었고, $30^{\circ}C$ 이하의 온도와 pH 5.0에서 안정하였으며, $80^{\circ}C$에서 15분간 보존했을 때 거의 불활성화되었다. OPDA에 높은 활성을 나타내었으나, phenol류 기질에 대해서는 약간의 활성을 나타내었으며, OPDA와 $H_{2}O_2$에 대한 Km치는 각각 1.65mM, 7.97mM이었다. 아그배 peroxidase에 대한 저해작용은 L-ascorbic acid와 sodium L-ascorbate가 가장 컸고, 금속이온 중 $Mn^{2+}$만이 5mM 농도에서 효소의 활성을 증가시켰다.
밤(생율(生栗))으로 부터 peroxidase를 $(NH_4)_2SO_4$에 의한 염석 및 DEAE-cellulose column chromatography, sephadex G-100 column chromatography, HPLC방법으로 정제하였으며 정제도는 조효소에 비하여 65.3배였고, HPLC로 측정한 밤 peroxidase 분자량은 35,000으로 추정되었다. sephadexG-100 column chromatography 후 얻은 밤 peroxidase의 작용최적 pH는 5.0이었고, 작용최적 온도는 $50^{\circ}C$이었으며 $80^{\circ}C$에서 1.73분 열처리할 때 90%의 효소가 불활성화되었다. 본 효소는 OPDA 및 PPDA와 같은 방향족 amine류에 높은 활성을 나타내었다. OPDA와 $H_2O_2$에 대한 Km치는 각각 2.6mM과 10mM이었고, 저해작용은 L-ascorbic acid 와 sodium L-ascobate가 가장 컸으며, $Ca^{++}$과 $Ba^{++}$은 1mM과 5mM에서 현저히 효소활성을 증가시켰다.
Enzymatic characterization of peroxidase(E.C. 1.11.1.7) from soybean sprouts was investigated. The optimum pH of the purified peroxidase was 7.0 and relatively stable at pH 6.0~7.0. And the optimum temperature was 50oC. The enzyme was most active with guaiacol as a substrate, followed by (+)catechin, pyrogallol and p phenylenediamine. The Km values for guaiacol and H2O2 were 4.2mM and 2.5mM, respectively. L Ascorbic acid and 2 mercaptoethanol greatly inhibited the enzyme activity, while Cu2+, Co2+ and Ni2+ activated the enzyme.
The sanitizing effect of irradiation on the fresh vegetable extract juices was investigated. Total bacteria, coliform bacteria and total ascorbic acid were determined during the storage periods at 4oC. Chlorophyll, carotenoid, tannin, electron donating ability and peroxidase activity were determined immediately after irradiation. Results showed that the viable cells were detected below the level of 105 CFU/ml during 12 days with doses of 3 and 5 kGy. Total ascorbic acid and tannin contents increased immediately after irradiation. However, irradiation didn't affect chlorophyll and car otenoid contents, electron donating ability, and peroxidase activity. It was considered that irradiation was effective in sanitizing fresh vegetable extract juices.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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