In order to diagnose canine heartworm infection by antigen capture ELISA, the crude somatic(S), partial somatic(below 45kDa) and excretory/secretory(E/S) antigen of adult heartworm were identified and the antigenicity was examined by silver stain, immunoblot and ELISA. Then, production of monoclonal antibody to specific antigen carried out in this experiment. The bands to S antigen and E/S antigen were recognized between 10 and 200kDa and common bands were recognized strongly 14, 18, 28, 43kDa by silver stain. By western blot analysis, fractions to S antigen were recognized 14, 16, 18, 20, 24, 28, 32, 43, 50, 55kDa, etc. and only a 14kDa to E/S antigen in positive sera which were positive in modified Knott's test and necropsy. In ELISA, the positive sera reacted to antigens(SA, $SA_{45}$, E/S) were significantly different from negative sera by Student's t-test(p<0.05). Four hybridoma cell lines(14, 16, 17, 32kDa) than produce specific monoclonal antibodies for these antigens were obtained by immunizing BALB/c mice with a partially purified somatic antigen (below 45kDa) preparation, by fusing spleen cells with SP2/O cell myeloma cells, and by screening cell culture supernatants for antibody. In these results, it was confirmed that partial somatic antigen(below 45kDa) or E/S antigen can be used for serologic diagnosis of heartworm infection and monoclonal antibody reacting with specific antigen(14kDa) can be used for antigen capture ELISA in prepatent period of canine heartworm infection.
The aim of this study was to detect bovine viral diarrhea virus (BVDV) from calves in Chonbuk province. Blood samples were taken from ninety-two dairy calves. Capture enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect BVDV. BVDV were detected in eight out of ninety-two (8.6%) dairy calves. BVDV were detected in one of twenty five of female calves and one of twenty three of male calves of 4 months old, whereas in the 5 months age group, BVDV were detected in low of twenty three of female calves and two of twenty one of male calves. There were no significant differences (p>0.05) in the detection rate of BVDV on the basis of sex. On the other hand, ages of calves had significant differences (p<0.05) on the prevalence of BVDV.
Ho, Chin Woi;Tan, Wen Siang;Chong, Fui Chin;Ling, Tau Chuan;Tey, Beng Ti
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제19권4호
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pp.416-423
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2009
Hepatitis B core antigen(HBcAg) is an important serological marker used in the diagnosis of hepatitis B virus(HBV) infections. In the current study, a fast and efficient preparative purification protocol for truncated HBcAg from Escherichia coli disruptate was developed. The recombinant HBcAg was first captured by anion exchange expanded bed adsorption chromatography integrated with a cell disruption process. This online capture process has shortened the process time and eliminated the "hold-up" period that may be detrimental to the quality of target protein. The eluted product from the expanded bed adsorption chromatography was subsequently purified using size-exclusion chromatography. The results showed that this novel purification protocol achieved a recovery yield of 45.1% with a product purity of 88.2%, which corresponds to a purification factor of 4.5. The recovered HBcAg is still biologically active as shown by ELISA test.
Immunoglobulin G was purified by 40% $(NH_4)_2SO_4$ precipitation, DEAE-Sephadex, Sephadex G-150 column chromatographies from rabbit antiserum against V. vulnificus ATCC 27562 O antigen and used for immunological test for V. vulnificus isolates. The profiles of cell lysate total protein and outer membrane protein from the isolates were analyzed by SDS-PAGE and densitometry. The overall profiles in all isolates were similar. Distict protein band was observed in comparison with V. parahaemolyticus. Western Blotting with rabbit Immunoglobulin G against cell lysates and OMP of V. vulnificus isolates showed a strong antigenic response to antigen 66, 60, 54, 48, 33 and 26 kDa which were common to all strains examined. The 26 kDa antigen showed V. vulnificus specific antigen in comparison with Vibrio parahaemolyticus. A sandwich enzyme-linked immunosorbent assay was developed by using rat anti-V. vulnificus ATCC 27562 polyclonal antibodies as capture antibody, a purified rabbit IgG antibody as detector antibody, and goat anti-rabbit IgG-alkaline phosphatase conjugate as developer antibody. When four V. vulnificus isolates were tested, the reactivity showed from 50 to 70% by sandwich ELISA.
The aim of this study was to investigate the prevalence of bovine viral diarrhea virus (BVDV) infection in Chonbuk province. Blood samples were taken from 92 korean calves to determined their serological status against BVDV, Capture enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to test for antigen. The number of seropositive calves ranged from 3.3% to 12.9%. Antigens against BVDV were detected in 3.3% of healthy calves, 6.4% of digestive symptom calves, 12.9% of respiratory symptom calves, respectively. Sex and age of calves had no significant differences on the prevalence of BVDV. The results indicate that transmission of BVDV may have become exposed as a result of contact with acute infected or persistently infected cattle.
Enhancement of antigen-specific IgE is a hallmark of allergic hyperresponsiveness, therefore it is necessary to adopt or develop a highly sensitive and specific assay for determination of allergen-specific IgE levels in vivo. In this presentation, we introduce an ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) system developed to measure the levels of chicken egg ovalbumin (OVA)-specific IgE in serum. The ELISA method uses a commercially available purified rat anti-mouse IgE as a capture Ab and biotinylated OVA as a detection reagent. Avidin-peroxidase with its substrate is used for color development resulting in optical density measurement at 405 nm. The ELISA system produces a highly sensitive dose-response relation-ship between optical density levels and the dilution titer of the OVA-IgE standard serum but no cross-reaction with unrelated IgE or IgG. It is believed that the system is an Efficient tool to delineate an adjuvant effect of environmental pollutants on development of asthmatic and atopic responses.
Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor (TAFI) also known as plasma procarboxypeptidase B or U is a 60 kD glycoprotein, which is the major modulator of fibrinolysis in plasma. TAFI is a proenzyme, which is activated by proteolytic cleavage to an active carboxypeptidase B-like enzyme (TAFIa, 35.8 kD) by thrombin/thrombomodulin and plasmin. Modulation of fibrinolysis occurs when TAFIa enzymatically removes C-terminal lysine residues of partially degraded fibrin, thereby inhibiting the stimulation of tissue plasminogen activator (t-PA) modulated plasminogen activation. TAFIa undergoes a rapid conformational change at $37{^{\circ}C}$ to an inactive isoform called TAFIai. Potato tuber carboxypetidase inhibitor (PTCI) was shown to specifically bind to TAFIa as well as TAFIai. In this study, a novel immunoassay TAFIa/ai ELISA was used for quantitation of the two TAFI activation isoforms TAFIa and TAFIai. The ELISA utilizes PTCI as the capture agent and a double antibody sandwich technique for the detection. Low levels of TAFIa/ai antigen levels were detected in normal plasma and elevated levels were found in hemophilia A plasmas. TAFIa/ai antigen represents a novel marker to monitor fibrinolysis and TAFIa/ai ELISA may be a valuable assay for studying the role of TAFI in normal hemostasis and in pathological conditions.
Rabies virus (RABV)-specific antibodies in animals and humans are measured using standard methods such as fluorescent antibody virus neutralization (FAVN) tests and rapid fluorescent focus inhibition tests, which are based on cell culture systems. An alternative assay that is safe and easy to perform is required for rapid sero-surveillance following mass vaccination of animals. Two purified monoclonal antibodies (4G36 and B2H17) against RABV were selected as capture and detection antibodies, respectively. A genetically modified RABV, the ERAGS strain, was propagated and concentrated by polyethylene glycol precipitation. Optimal conditions for the RABV antigen, antibodies, and serum dilution for a blocking enzymelinked immune sorbent assay (B-ELISA) were established. We evaluated the sensitivity, specificity, and accuracy of the B-ELISA using serum samples from 138 dogs, 71 raccoon dogs, and 25 cats. The B-ELISA showed a diagnostic sensitivity of 95.8-96.3%, specificity of 91.3-100%, and accuracy of 96.0-97.2% compared to the FAVN test. These results suggest that the B-ELISA is useful for sero-surveillance of RABV in dogs, raccoon dogs, and cats.
감마선 조사된 새우의 신속한 판별을 위한 방법으로 갈색새우의 TPM을 항원으로 하여 개별적으로 생산된 M-IgG와 P-IgG를 이용한 Sandwich ELISA를 분석법으로 확립하였다. M-IgG를 항원 포획을 이한 coating 항체로 사용하고, P-IgG를 포획된 TPM에 대한 반응항체로 사용하였을 때, 12.5에서 50$\mu\textrm{g}$/mL의 농도 범위에서 TPM을 정량할 수 있었다. 감마선 조사된 새우의 TPM 농도는 선량에 의존하며 감소하였고, 감마선 조사와 가열 또는 냉동 등의 병용 처리에서도 선량에 의존하며 감소하였다. 이 결과는 면역분석기법의 하나인 Sandwich ELISA가 감마선 조사된 새우의 검지법으로 이용될 수 있다는 가능성을 나타내었다.
Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is very important disease in domestic and wild ruminants and has a world wide distribution. Cattle persistently infected with BVDV (BVDV-PI) are the primary reservoir for BVDV infection in Korean native cattle herds. The prevalence of cattle persistently infected with BVDV (BVD-PI) was determined using 4,260 heads from 29 Korean native cattle farms at 8 districts from 2011 to 2012. The sera and ear nothches were collected for each sample. We surveyed BVD-PI cattle using antibody ELISA and antigen capture ELISA for detection of antibody and antigen respectively. Three thousand seventy-six cattle (72.2%) were positive for BVDV antibody and a total of 27 BVD-PI cattle were found in 12 farms. 11 cattle (40.7%) out of the total 27 BVDV-PI cattle were six months old or under. The positive rate of BVDV antibody (83.2%) from 12 farms with BVD-PI cattle was higher than the positive rate of BVDV antibody (63.6%) from 17 farms without BVD-PI cattle.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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