H. erinaceum의 기능성 소재화 연구의 일환으로, 지금까지 체계적으로 연구된 바 없는 H. erinaceum의 액체배양을 시도하고. 이 버섯의 서로 다른 생물반응기하의 액체배양 특성을 규명하고 대량생산을 검토하였다. 5 L 용량의 jar fermenter와 air-lift fermenter에서의 액체배양의 비교실험을 통해 air-lift fermenter의 사용이 종균 배양에 적합한 것으로 나타났으며, 형태 분석을 통해 적정 크기($2{\sim}4mm$)의 pellet 형태의 유지가 대량 생산의 중요인자인 것을 규명하였다. Air-lift fermenter 하의 배양을 종균으로 하고, 적정 크기의 pellet을 유지하는 500 L까지의 jar fermenter를 사용한 회분 배양의 scale-up 실험결과, 30 및 500 L에서의 교반 및 통기속도는 각각 200 rpm, 1 vvm 및 150 rpm, 1 vvm이었다. 이 조건하에서 배양의 전 기간 중 적정 pellet을 유지하였으며, 최대 균사체량은 약 $13{\sim}14g/L$이었다.
For the efficient production of a new exo-polysaccharide from Ganoderma lucidum ASI 7004, the optimum conditions and methods in submerged cultivation were investigated with an airlift fermenter system. The optimum aeration rate was 2.5 Wm at the initial pH 5.0 and 28$^{\circ}C$. The increase of dissolved oxygen concentration by pure oxygen supply during cultivation did not improved the exo-polysaccaride production and the mycelial growth. The maximum exo-polysaccharide production and the mycelial growth under the optimum culture condition were obtained in media of glucose 60g/L, yeast extract 6g/L, (NH4)2HPO4 1g/L and KH2PO4 0.5g/L. Under these optimum medium and culture conditions, about 7.15g/L of exo-polysaccharide and 13.9g/L of mycelial growth were producted, respectively.
A submerged cultivation of Ganoderma lucidum was carried out in an air-lift fermenter system, and the effects of different pH processes on extracellular branched ${\beta}$-1,3-glucan(EPS) production and mycelial growth(MDW) were investigated. The controlled pH process improved the production of branched ${\beta}$-1,3-glucan and biomass in comparison to the uncontrolled pH process. However, the maximum production of branched ${\beta}$-1,3-glucan were obtained by the bi-staged pH process. From these results, we confirmed that the bi-staged pH process was the most effective for improving the production of branched ${\beta}$-1,3-glucan from submerged culture of G. lucidum.
송이(Tricholoma matsutake)균을 고체배양과 액체배양에서 균사 생장의 적합한 조건을 구명함으로 앞으로 송이균을 대량 배양하여 접종함으로 송이를 생산할 수 있는 가능성을 얻기 위하여 본 연구를 실시하였다. 송이균은 고체배지의 경우 HA, TMM 배지에서 생장이 양호하였으며, 액체배지의 경우 PDB, TMM 배지에서 균사의 생장이 우수하게 나타났다. 온도에서는 $25^{\circ}C$에서 균사의 생장이 가장 효과적이었다. 송이균이 잘 생장하는 탄소원은 다당류인 Dextrin이고 질소원은 Yeast extract와 Peptone이고 $Fe_{2}(SO_{4})_{3}{\cdot}H_{2}O$와 KCl이었다. 액체배양에서는 균사의 생장은 플라스크 배양에서 진탕배양에서 정치배양보다 $2{\sim}7$배 정도의 균사의 생장이 좋았으며, 100 ml 가장 양호하였다. 균사의 절편을 삼각플라스크에 $6{\sim}7$개 넣어서 배양하는 것이 양호하였으며 배양기간은 접종 후 4주에서부터 균사의 생장과 펠릿의 분화가 나타나기 시작하여 9주까지 활발하게 생장하였다. 대량배양에서 균사생장이 양호한 배지로는 감자추출배지이었으며 8리터 병에 200 ml 접종량을 넣고 8주간 배양하면 송이의 균사체량이 가장 많이 얻을 수 있었다.
It was discovered that ammonium phosphate in the medium played an important role in both growing mycelium and producing exopolysaccharides (EPS) from G. lucidum. In lower concentration levels of ammonium phosphate (0-3 g/l), an improved mycelial growth was observed by maintaining more filamentous morphology than in high concentrations (5-11 g/l). In addition, it was confirmed by comparing the factual dimension and frequency of the area regarding the mycelial pellets. This must be attributed to limitations of nutrient transfer by maintaining filamentous mycelium during the cultivation in a low ammonium phosphate containing medium. On the other hand, the best EPS production was observed in medium with the absence or low concentration of ammonium phosphate. The shear stress of the culture broth was greatly affected by the shear rate, as compared with that of the culture broth with high ammonium phosphate concentration. The rheological characteristics of the fermentation broth and filtrate worked well according to the Herschel-Bulkley model. It was also found that the morphological changes of the mycelium resulting from the ammonium phosphate concentration directly affected the rheological characteristics of the system and resulted in reversely affecting the EPS production levels. Based on these results, it can be concluded that delicate regulation of the ammonium phosphate concentration in the culture media should be provided in order to obtain optimal mycelial growth and/or EPS production.
버섯의 액체배양에 의한 균사체 및 세포외 다당 발효의 안정성과 생산성 증가를 도모하기 위하여, 영지(Ganoderma lucidum ASI 7004)의 액체배양 중, 배지조성($0{\sim}11\;g/l$의 ammonium)을 달리하여 균사체 형태 및 분화의 경시변화를 영상분석 시스템을 이용하여 분석하였다. 배지 조성 및 배양 조건에 따른 균사체 형태의 배양경시변화를 영상분석한 결과, non-branched long filamentous mycelium, non-branched short mycelium, branched long filamentous mycelium, branched short mycelium, entangled mycelium 및 각종 clump의 필라멘트 형태와, smooth pellet, rough pellet 및 hollow rough pellet의 펠렛 형태 등, 다양한 형태를 관찰할 수 있었다. Ammonium ion이 낮은 경우에는 필라멘트 형태의 균사 생육이 주인 반면, 높은 농도로 갈수록 펠렛 형태의 균사 생육이 주로 관찰되었다. 이러한 형태의 변화를 수치화 하는 수단으로 fractal 차원을 이용하여 형태를 분류한 결과, 11 g/l의 ammonium phosphate 농도에서 주로 나타나는 균사형태의 fractal 차원을 이용하여 형태를 분류한 결과, 11 g/l의 ammonium phosphate 농도에서 주로 나타나는 균사형태의 fractal 차원은 1.05 이었으나(펠렛형), ammonium phosphate의 결핍 시에 주로 나타나는 균사 형태의 fractal 차원은 1.3이었다(필라멘트형). 또 필라멘트형 및 펠렛형 균사체가 공존할 때의 fractal 차원은 1.16으로, 이들의 중간 값을 나타내었다. 따라서, fractal 차원은 균사 형태의 변화를 측정하는 지표 값으로 매우 유용할 것으로 생각되었다. 또 원형도는 펠렛형 균사체의 표면에서 균사 생육 정도를 판정하는데 유용한 것으로 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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